SN/T 5708-2025 化妆品中苯丙香豆素和4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的测定 高效液相色谱法

　　ICS 71. 100.70 CCS Y 42

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/T 5708—2025

　　化妆品中苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的测定 高效液相色谱法

　　Determination ofPhenprocoumon and4,6-Dimethyl-8-tert-

　　butylcoumarin in cosmetics—HPLC method

　　2025-12-11发布 2026-07-01实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　SN/T 5708—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。

　　本文件起草单位 :中华人民共和国天津海关 。

　　本文件主要起草人 : 陈旭艳 、陈其勇 、章骅 、娄婷婷 、杨爽 、黄晨 。

　　Ⅰ

　　SN/T 5708—2025

　　化妆品中苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特

　　丁基香豆素的测定 高效液相色谱法

　　1 范围

　　本文件描述了化妆品中苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的高效液相色谱检测方法 。

　　本文件适用于水状 、乳状 、膏霜状 、凝胶状 、粉状 、油状化妆品中苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的检测 。其他化妆品基质经充分验证后参照执行 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义 。

　　4 方法提要

　　水状 、乳状 、膏霜状 、凝 胶 状 、粉 状 化 妆 品 用 甲 醇 提 取 , 油 状 化 妆 品 用 甲 醇-四 氢 呋 喃 混 合 溶 液 提取 ,提取液经离心过滤后 ,用高效液相色谱法测定 ,外标法定量 。

　　5 试剂和材料

　　除另有规定外 ,所有试剂均为分析纯 ,水为 GB/T6682规定的一级水 。

　　5. 1 乙腈 :色谱纯 。

　　5.2 甲醇 :色谱纯 。

　　5.3 乙酸铵 :色谱纯 。

　　5.4 冰乙酸 :色谱纯 。

　　5.5 四氢呋喃 :色谱纯 。

　　5.6 乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取 1.5416 g 乙酸铵 ,加入适量水溶解 ,用水定容至 1000mL,用乙酸调节 pH 至 4.3。

　　5.7 甲醇-四氢呋喃(8+2,体积比):量取 8mL 甲醇和 2mL 四氢呋喃 ,混匀 。

　　5. 8 标准物质 : 苯 丙 香 豆 素(C18 H16 O3 , CAS 号 : 435-97-2) 和 4, 6-二 甲 基-8-特 丁 基 香 豆 素(C15 H18 O2 , CAS号 :17874-34-9),纯度 ≥95%。

　　5.9 苯丙香豆素 、4,6-二甲基-8-特丁基香豆素标准储备溶液 :分别准确称取适量的苯丙香豆素 、4, 6-二甲基-8-特丁基香豆素标准品(精确到 0.1mg),用甲醇(5.2) 配制成质量浓度为 1000 μg/mL标准储备

　　1

　　SN/T 5708—2025

　　溶液 ,4℃保存 ,有效期为 3个月 。

　　5. 10 苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素混合标准中间溶液 :分别准确吸取苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素标准储备溶液(5.9)各 1mL 于 10mL容量瓶中 ,用甲醇(5.2)定容至刻度 ,配制成质量浓度为 100 μg/mL混合标准中间溶液 ,4℃保存 ,有效期为 1个月 。

　　5. 11 苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素混合标准工作溶液 :分别准确吸取苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素混合标准中间液(5.10)0.04mL、0.1mL、0.25mL、0.5mL、1.0mL 于 10mL容量瓶中 ,用甲醇(5.2) 定容至刻度 ,配制成质量浓度为 0.4 μg/mL、1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、 10.0 μg/mL的混合标准工作溶液 。

　　5. 12 有机相滤膜 :0.45 μm。

　　5. 13 刻度具塞离心管 :15mL。

　　6 仪器和设备

　　6. 1 高效液相色谱仪 ,配有二极管阵列检测器或紫外检测器 。

　　6.2 分析天平 :感量 0.1mg和 0.01 g。

　　6.3 超声波水浴 。

　　6.4 离心机(转速大于 5000r/min)。

　　6.5 pH 计 。

　　6.6 涡旋振荡器 。

　　7 测定步骤

　　7. 1 试样处理

　　7. 1. 1 水状、乳状、膏霜状、凝胶状、粉状化妆品

　　称取试样约 1 g(精确至 0.01 g)于 15mL离心管中 ,加甲醇(5.2)8mL,涡旋振荡使基质均匀分散后 ,用甲醇(5.2)定容至 10mL,超声提取 20min,混匀 ,于 5000r/min离心 5min,上清液经 0.45 μm 有机相滤膜过滤 ,滤液供液相色谱测定 。

　　7. 1.2 油状化妆品

　　称取试样约 1 g(精确至 0.01 g)于 15mL离心管中 ,加甲醇-四氢呋喃混合溶液(5.7)8mL,涡旋振荡使基质均匀分散后 ,用甲醇-四氢呋喃混合溶液(5.7)定容至 10mL,超声提取 20min,混匀 ,于 5000 r/min离心 5min,上清液经 0.45 μm 有机相滤膜过滤 ,滤液供液相色谱测定 。

　　7.2 测定

　　7.2. 1 液相色谱参考条件

　　7.2. 1. 1 色谱柱 :CN 柱 ,5 μm ,250mm×4.6mm ,或相当者 。

　　7.2. 1.2 流动相 : 乙腈和乙酸铵溶液(5.6)(50+50,体积比),等度洗脱 。

　　7.2. 1.3 流速 :1mL/min。

　　7.2. 1.4 柱温 :30 ℃ 。

　　7.2. 1.5 检测波长 :280nm。

　　7.2. 1.6 进样量 :10 μL。

　　2

　　SN/T 5708—2025

　　7.2.2 色谱测定

　　质量浓度为 0.4 μg/mL、1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL的混合标准工作溶液 ,按照色谱条件(7.2.1)进行测定 , 以色谱峰的峰面积为纵坐标 、与其对应的浓度为横坐标作图 ,绘制标准工作曲线 。在上述仪器条件下 ,苯丙香豆素的保留时间约为 6.2min,4, 6-二甲基-8-特丁基香豆素的保留时间约为 8.6min。标准溶液色谱图见图 A.1。

　　试样溶液(7.1)注入液相色谱仪 ,按照色谱条件(7.2.1)进行测定 ,记录色谱峰的保留时间和峰面积 。苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素含量高的试样可取适量用甲醇稀释到线性范围内进行测定 。阳性样品需用液相色谱-质谱/质谱进行确证(见附录 B),标准溶液液相色谱-质谱/质谱图见图 A.2。

　　7.3 空白试验

　　除不加待测试样外 ,其他均按 7.2操作步骤进行 。

　　7.4 结果计算

　　化妆品试样中苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的含量以微克每克(μg/g)表示,多点校正按式(1)计算 。

　　X …………………………( 1 )

　　式中 :

　　X ———化妆品样品中苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的含量 ,单位为微克每克(μg/g); ρ ———从标准工作曲线上查出的试样溶液中苯丙香豆素和 4, 6-二甲基-8-特丁基香豆素的质量浓

　　度 ,单位为微克每毫升(μg/mL);

　　ρ0 ———从标准工作曲线上查出的空白溶液中苯丙香豆素和 4, 6-二甲基-8-特丁基香豆素的质量浓

　　度 ,单位为微克每毫升(μg/mL); V ———试样定容体积 ,单位为毫升(mL); f ———稀释倍数 ;

　　m ———试样的质量 ,单位为克(g)。

　　单点校正按式(2)计算 ,计算结果应扣除空白值 。

　　X …………………………( 2 )

　　式中 :

　　X ———化妆品样品中苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的含量 ,单位为微克每克(μg/g);

　　ρ ———标准工作溶液中苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的质量浓度 ,单位为微克每毫升(μg/mL);

　　A ———化妆品样品中苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的峰面积 ;

　　As———标准工作溶液中苯丙香豆素和 4.6-二甲基-8-特丁基香豆素的峰面积 ;

　　V ———试样定容体积 ,单位为毫升(mL);

　　f ———稀释倍数 ;

　　m ———试样的质量 ,单位为克(g)。

　　计算结果保留两位小数 。

　　8 检出限和定量限

　　本方法对苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素的检出限为 1.5 μg/g,定量限为 5 μg/g。

　　3

　　SN/T 5708—2025

　　9 精密度

　　在重复性条件下获得的两次独立测定的结果的绝对差值不应超过算术平均值的 10% 。

　　4

　　SN/T 5708—2025

　　附 录 A

　　(资料性)

　　图 谱

　　A. 1 液相色谱图谱

　　苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素标准溶液液相色谱图谱见图 A.1。

　　图 A. 1 苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素标准溶液液相色谱图谱

　　A.2 液相色谱-串联质谱图谱

　　苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素标准溶液液相色谱-串联质谱选择离子流图见图 A.2。

　　5

　　SN/T 5708—2025

　　图 A.2 苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素标准溶液总离子流图和选择离子流图

　　6

　　SN/T 5708—2025

　　附 录 B

　　(资料性)

　　苯丙香豆素和 4,6-二甲基-8-特丁基香豆素阳性结果的确证

　　B. 1 阳性结果判定

　　测定过程中若有阳性结果 ,采用液相色谱-质谱/质谱法进一步确证 。在相同的试验条件下 ,如果检出的色谱峰保留时间与对照品一致 ,所选择的检测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子对相对丰度比的偏差不超过表 B.1规定的范围 ,则可判定样品中存在待测组分 。

　　表 B. 1 阳性结果确证时相对离子丰度比的最大允许偏差

　　相对离子丰度 K

　　K>50%

　　50%≥K>20%

　　20%≥K>10%

　　K≤10%

　　最大允许偏差

　　±20%

　　±25%

　　±30%

　　±50%

　　B.2 仪器参考条件

　　B.2. 1 色谱条件如下 :

　　a) 色谱柱 :C18柱(100mm×2.1mm×1.7μm),或等效色谱柱 ;

　　b) 流动相 A:0.1%甲酸水溶液 ;

　　c) 流动相 B: 乙腈 ;

　　d) 梯度洗脱程序见表 B.2;

　　e) 流速 :0.3mL/min;

　　f) 柱温 :室温 ;

　　g) 进样量 :10 μL。

　　表 B.2 梯度洗脱程序

　　时间min

　　V(流动相 A) %

　　V(流动相 B) %

　　0.00

　　90

　　10

　　2.00

　　20

　　80

　　5.00

　　20

　　80

　　6.00

　　90

　　10

　　7.00

　　90

　　10

　　B.2.2 质谱条件如下 :

　　a) 喷雾电压 :5500V ;

　　b) 雾化气压力 :275.8kPa;

　　c) 离子源温度 :650 ℃ ;

　　d) 传输管温度 :350 ℃ ;

　　e) 电离方式 : 电喷雾电离 ,ESI(+);

　　f) 检测方式 :多反应监测模式(MRM),监测条件见表 B.3。

　　7

　　SN/T 5708—2025

　　表 B.3 选择离子和质谱参数

　　名称

　　选择离子对

　　碎裂电压 DP V

　　碰撞能量 CE V

　　苯丙香豆素

　　281.0/175.0

　　100

　　34

　　281.0/203.0

　　100

　　21

　　4,6-二甲基-8-特丁基香豆素

　　231.0/175.0

　　70

　　30

　　231.0/215.1

　　70

　　39

　　8