SN/T 5709-2025 化妆品中尼古丁含量的测定 液相色谱-质谱 质谱法
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资料介绍
ICS 71. 100.70 CCS Y 42
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 5709—2025
化妆品中尼古丁含量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination ofnicotinein cosmetics—
LC-MS/MS method
2025-12-11发布 2026-07-01实施
中华人民共和国海关总署 发 布
SN/T 5709—2025
前 言
本文件按照 GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。
本文件起草单位 : 中华人民共和国广州海关 、中华人民共和国杭州海关 。
本文件主要起草人 :吴映璇 、邵琳智 、董洁 、洪灯 、陈思敏 、庄燕君 、蓝草 、欧阳少伦 、陈永红 。
Ⅰ
SN/T 5709—2025
化妆品中尼古丁含量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
1 范围
本文件描述了化妆品中尼古丁含量的液相色谱-质谱/质谱测定方法 。
本文件适用于液态水基类 、乳液类 、膏霜类 、散粉类 、油状类等化妆品中尼古丁含量的定量测定和确证 。其他化妆品基质经充分验证后参照执行 。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。
GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义 。
4 方法提要
试样采用正己烷 、乙腈-甲 酸 乙 酸 铵 溶 液 超 声 提 取 净 化 后 , 经 液 相 色 谱-质 谱/质 谱 仪 测 定 , 内 标 法定量 。
5 试剂和材料
除非另有说明 ,所有试剂均为分析纯 ,水为 GB/T6682规定的一级水 。
5. 1 乙腈 :色谱纯 。
5.2 甲酸 :色谱纯 。
5.3 正己烷 。
5.4 乙酸铵 :色谱纯 。
5.5 5mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸溶液 :称取 0.385 g 乙酸铵(5.4),量取 1mL 甲酸(5.2),用水溶解并定容至 1000mL,摇匀备用 。
5.6 提 取 液(乙 腈 +5 mmol/L乙 酸 铵-0.1%甲 酸 溶 液 , 90+10, 体 积 比):量 取 900 mL 乙 腈(5.1) 和100mL5mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸溶液(5.5),混匀备用 。
5.7 5mmol/L乙酸铵-0.01%甲酸溶液 :称取 0.385 g 乙酸铵(5.4),量取 0.1mL 甲酸(5.2),用水溶解并定容至 1000mL,摇匀备用 。
5. 8 尼古丁(Nicotine):CAS号 :54 -11-5;质量浓度 :1004mg/L;纯度 ≥99.7% 。
5.9 尼古丁标准储备液(10μg/mL):准确吸取适量尼古丁溶液(5.8),置于 10mL容量瓶中 ,用乙腈定容至刻度 ,混匀 。该溶液于 -18℃密封避光保存 ,有效期 6个月 。
5. 10 尼古丁标准中间液(1.0μg/mL):准确吸取适量尼古丁标准储备溶液(5.9),置于 50mL 容量瓶
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SN/T 5709—2025
中 ,用乙腈定容至刻度 ,混匀 。该溶液于 -18℃密封避光保存 ,有效期 3个月 。
5. 11 尼古丁标 准 工 作 液(0.1 μg/mL): 准 确 吸 取 适 量 的 尼 古 丁 标 准 中 间 液 (1.0 μg/mL) (5.10) 至10mL容量瓶中 ,用提取液稀释并定容至刻度 ,摇匀 ,配制成质量浓度为 0.1 μg/mL的标准工作液 , 当天配制 。
5. 12 尼古丁同位素标准品 :尼古丁-D3 (nicotine-D3 ),CAS号 :1173021-00-5;纯度 ≥99.5% 。
5. 13 尼古丁同位 素 标 准 储 备 液 : 准 确 称 取 适 量 的 尼 古 丁 同 位 素 标 准 品 (5.12),置 于 50 mL 容 量 瓶中 ,用乙腈溶解并定容配制成 100 μg/mL的同位素标准储备液 。该溶液于 -18 ℃密封避光保存 ,有效期 12个月 。
5. 14 尼古丁同位素标准中间液(1.0μg/mL):吸取适量的尼古丁同位素标准储备液(5.13)至 50mL容量瓶中 ,用乙腈稀释并定容至刻度 ,摇匀 ,配制成质量浓度为 1.0 μg/mL的同位素标准中间液 。该溶液于 -18℃密封避光保存 ,有效期 3个月 。
5. 15 尼古 丁 同 位 素 标 准 工 作 液 (0.0125 μg/mL):准 确 吸 取 适 量 的 尼 古 丁 同 位 素 标 准 中 间 液(1.0μg/mL)(5.13) 至 10 mL 容 量 瓶 中 , 用 提 取 液 稀 释 并 定 容 至 刻 度 , 摇 匀 , 配 制 成 质 量 浓 度 为0.0125 μg/mL的同位素标准工作液 , 当天配制 。
5. 16 尼古丁标准工作 液 : 准 确 吸 取 一 定 量 的 尼 古 丁 标 准 工 作 液(5.11) 和 尼 古 丁 同 位 素 标 准 工 作 液(5.15),用 提 取 液 (5.6) 配 制 成 质 量 浓 度 为 0 μg/mL、0.002 μg/mL、0.005 μg/mL、0.01 μg/mL、 0.02 μg/mL、0.05 μg/mL的标准工作溶液 , 内标质量浓度均为 0.00125 μg/mL, 当天配制 。
5. 17 滤膜 :0.2 μm ,尼龙膜 。
5. 18 离心管 :具塞 ,50mL。
6 仪器和设备
6. 1 液相色谱-质谱/质谱仪 :三重四级杆串联质谱仪 ,配电喷雾离子源(ESI)。
6.2 超声波清洗仪 。
6.3 漩涡振荡器 。
6.4 高速离心机 。
7 测定步骤
7. 1 试样的处理
称取试样约 0.5 g(精确至 0.001 g),置于 50mL 离心管中 ,加入 25 μL尼古丁同位素标准中间液(5.14),加入 20 mL 正 己 烷 (5.3), 涡 旋 分 散 均 匀 后 , 准 确 加 入 20 mL 提 取 液 (5.6),超 声 提 取20min,4000r/min离心 5min。 弃 去 上 层 正 己 烷 , 下 层 清 液 经 滤 膜 (5.17) 过 滤 后 , 供 液 相 色 谱-质谱/质谱仪测定 。
7.2 测定
7.2. 1 液相色谱-质谱/质谱参考测定条件
液相色谱-质谱/质谱参考测定条件如下 :
a) 色谱柱 : HILLIC柱 ,2.7 μm ,3.0mm(内径) ×100mm ,或相当者 ;
b) 流动相 : 乙腈 +5mmol/L乙酸铵-0.01%甲酸溶液 ,梯度洗脱 ,洗脱程序见表 1;
c) 流速 :0.35mL/min;
d) 柱温 :40 ℃ ;
e) 进样量 :10 μL;
f) 离子源 : 电喷雾离子源 ;
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g) 扫描方式 :正离子 ;
h) 检测方式 :多反应监测(MRM);
i) 质谱参考条件 :气帘气压力 :275kPa;电喷雾电压 :4500V; 离子源温度 :600 ℃;雾化器压力 : 310kPa;辅助气压力 :448kPa;多反应监测条件见附录 A 中表 A.1。
表 1 流动相梯度洗脱程序
梯度时间/min
乙腈/%
5mmol/L乙酸铵-0.01%甲酸溶液/%
0
90
10
4
45
55
7
45
55
7.1
90
90
12
90
90
7.2.2 液相色谱-质谱/质谱测定和确证
按照 7.2.1 液相色谱-质谱/质谱条件测定尼古丁标准工作液(5.16) 和样液,作单点或多点校准,按内标法定量样液中的尼古丁含量 。试样溶液中待测物含量应在标准曲线的线性范围之内 ,超出线性范围则应稀释后再进行分析 。在该条件下 ,尼古丁的多反应监测总离子流图见附录 B 中图 B.1。
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试样和尼古丁标准工作液 ,如果试样中待测物质的保留时间与标准工作液的一致(偏差在 ±2.5%之内),定性离子对的相对丰度 ,是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示 ,应与浓度 相 当 标 准 工 作 液 的 相 对 丰 度 一 致 , 相 对 丰 度 最 大 允 许 偏 差 不 超 过 表 2 规 定 的 范围 ,则可判断试样中存在对应的待测物 。
表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度
>50%
>20%~50%
>10%~20%
≤10%
最大允许偏差
±20%
±25%
±30%
±50%
7.2.3 空白试验
除不称取试样外 ,其他均按 7.2.2 步骤进行 。
8 结果计算和表述
单点校正,结果按式(1)计算 ,计算结果须扣除空白值 :
X
式中 :
X ———试样中尼古丁含量的数值 ,单位为毫克每千克(mg/kg);
Cs ———标准工作溶液中尼古丁浓度的数值 ,单位为微克每毫升(μ/mL);
Cis ———试样溶液中同位素内标浓度的数值 ,单位为微克每毫升(μ/mL);
Ai ———试样溶液中尼古丁的峰面积 ;
As ———标准工作溶液中同位素内标的峰面积 ;
V ———定容体积的数值 ,单位为毫升(mL);
Cs ———标准工作溶液中同位素内标浓度的数值 ,单位为微克每毫升(μ/mL);
As ———标准工作溶液中尼古丁的峰面积 ;
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SN/T 5709—2025
Ais ———试样溶液中同位素内标的峰面积 ;
m ———供试试样质量的数值 ,单位为克(g);
f ———稀释倍数 ;
1000———换算系数 。
多点校正,结果按式(2)计算 ,计算结果须扣除空白值 :
X …………………………( 2 )
式中 :
X ———试样中尼古丁含量的数值 ,单位为毫克每千克(mg/kg);
C ———从标准工作曲线上查出的试样溶液中尼古丁浓度的数值 ,单位为微克每毫升(μg/mL); V ———试样定容体积的数值 ,单位为毫升(mL);
m ———供试试样质量的数值 ,单位为克(g);
f ———稀释倍数 ;
1000———换算系数 。
注 : 含量小于或等 于 1 mg/kg时 , 计 算 结 果 保 留 2 位 有 效 数 字 ; 含 量 大 于 1 mg/kg时 , 计 算 结 果 保 留 3 位 有 效数字 。
9 检出限和定量限
本方法的检出限为 0.03mg/kg,定量限为 0.1mg/kg。
10 回收率
尼古丁的添加浓度及其回收率数据见附录 C 中表 C.1。
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附 录 A
(资料性)
尼古丁及其同位素内标的多反应监测(MRM)条件
尼古丁及其同位素内标的多反应监测(MRM)条件见表 A.1。
表 A. 1 尼古丁及其同位素内标的多反应监测(MRM)条件
化合物
离子对m/≈
去簇电压DP/V
碰撞室入口电压EP/V
碰撞室出口电压CXP/V
碰撞能量CE/V
尼古丁
163/130a
135
11
14
27
163/117
135
11
14
33
尼古丁-D3
166/130
120
11
14
27
a 为定量离子对 。
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附 录 B
(资料性)
尼古丁及其同位素内标标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测总离子流图
尼古丁及其同位素内标标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测总离子流图见图 B.1。
图 B. 1 尼古丁及其同位素内标标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测总离子流图
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SN/T 5709—2025
附 录 C
(资料性)
化妆品中尼古丁的添加回收试验数据
化妆品中尼古丁的添加回收试验数据见表 C.1。
表 C. 1 化妆品中尼古丁的添加回收试验数据(n=6)
基质
添加水平/(mg/kg)
回收率范围/%
相对标准偏差/%
化妆水
0.1
91.5~104.3
4.7
0.2
89.4~102.4
5.1
1.0
88.9~96.2
2.6
润肤乳
0.1
89.0~93.9
2.5
0.2
89.0~99.1
4.2
1.0
95.1~99.9
1.8
面霜
0.1
92.3~105.0
5.2
0.2
86.4~101.2
5.5
1.0
89.9~95.1
2.5
粉饼
0.1
88.7~101.3
4.8
0.2
91.4~103.0
4.0
1.0
94.0~102.2
3.7
唇膏
0.1
93.0~106.2
5.6
0.2
91.2~95.9
1.9
1.0
94.8~97.1
1.1
7
