SN/T 5885-2025 出口保健食品中维生素K1、K2的测定 液相色谱法

　　ICS 67. 040 CCS X 83

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/T 5885—2025

　　出口保健食品中维生素 K1、K2 的测定

　　液相色谱法

　　Determination of vitamin K 1、K2 in health foods for export—Liquid

　　chromatography

　　2025‑12 ‑ 11 发布 2026‑07‑01 实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　SN/T 5885—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

　　本文件起草单位：广 州 海 关 技 术 中 心、广 州 白 云 机 场 海 关 综 合 技 术 服 务 中 心、深 圳 海 关 技 术 中 心、上海海关动植物与食品检验检疫技术中心。

　　本文件主要起草人：徐 娟 、赵 勇 、钟 钰 、张 美 金 、翁 文 川 、柏 建 山 、何 淑 华 、康 海 宁 、姚 宇 星 、赵 惠 如 、伊雄海。

　　Ⅰ

　　SN/T 5885—2025

　　出口保健食品中维生素 K1、K2 的测定

　　液相色谱法

　　1 范围

　　本文件描述了片剂、颗粒剂、软胶囊和软糖类保健食品中维生素 K1 和维生素 K2(七烯甲萘醌)的液相色谱检测方法。

　　本文件适用于片剂、颗粒剂、软胶囊和软糖类保健食品中维生素 K1 和维生素 K2(七烯甲萘醌)的测定，其他保健食品参照执行。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注明日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 方法提要

　　片剂、颗粒剂样品经淀粉酶酶解，采用正己烷和二氯甲烷提取维生素 K1、K2;软胶囊样品采用乙醇提取维生素 K1、K2;软糖样品采用正己烷和二氯甲烷提取维生素 K1、K2;提取液经反相液相色谱分离，锌还原柱柱后衍生，高效液相色谱‑荧光检测器检测，外标法定量。

　　5 试剂和材料

　　除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。

　　5.1 试剂

　　5.1.1 无水乙醇：色谱纯。

　　5.1.2 甲醇：色谱纯。

　　5.1.3 四氢呋喃：色谱纯。

　　5.1.4 正己烷：色谱纯。

　　5.1.5 二氯甲烷：色谱纯。

　　5.1.6 冰乙酸：色谱纯。

　　5.1.7 氯化锌。

　　5.1.8 无水乙酸钠。

　　1

　　SN/T 5885—2025

　　5.1.9 淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。

　　5.1.10 流动相：称取 1.5 g 氯化锌(5.1.7)、0.5 g 无水乙酸钠(5.1.8)于 1 000 mL 烧杯中，加入 500 mL 甲醇(5.1.2)、100 mL 四氢呋喃(5.1.3)、0.3 mL 冰乙酸(5.1.6)，转移至 1 000 mL 容量瓶中，超声溶解后，加入甲醇定容至刻度，混匀，用 0.22 μm 有机相滤膜过滤。

　　5.1.11 维生素 K1 标准品(Vitamin K1，C31H46O2，CAS 号：84-80-0)：纯度≥98%，或具有有证标准证书的标准物质。

　　5.1.12 维生素 K2 标准品七烯甲萘醌(Menlaquinone 7，C46H64O2，CAS 号：2124-57-4)：纯度≥98%，或具有有证标准证书的标准物质。

　　注：标准物质能使用满足溯源要求的商品化标准溶液。

　　5.1.13 标准储备液：分别准确称取维生素 K1、维生素 K2 各 10 mg(精确到 0.1 mg)于 10 mL 棕色容量瓶中 ，用无水乙醇(5.1.1)溶解并定容至刻度 ，摇匀 ，配制成浓度均为 1 000 mg/L 的维生素标准储备溶液(维生素 K1 标准储备液临用前进行浓度校正，浓度校正方法见附录 A)，于-18 ℃ 以下避光保存，有效期 6 个月。

　　5.1.14 混 合 标 准 中 间 溶 液 ：分 别 准 确 吸 取 适 量 的 标 准 储 备 液 于 25 mL 棕 色 容 量 瓶 中 ，用 无 水 乙 醇(5.1.1)定容至刻度，配成混合标准中间溶液，维生素 K1、维生素 K2 浓度均为 10.0 mg/L。于-18 ℃以下避光保存，有效期 3 个月。

　　5.1.15 混合标准使用液：准确吸取混合标准中间液 2.5 mL 于 25 mL 棕色容量瓶中，用无水乙醇(5.1.1)定容至刻度，配成混合标准使用液，维生素 K1、维生素 K2 浓度均为 1.00 mg/L 。摇匀。

　　5.1.16 混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准使用液 0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、 5.00 mL 于 10 mL 棕色容量瓶中，用无水乙醇(5.1.1)定容至刻度，得到混合标准工作溶液质量浓度分别为 0.01 mg/L 、0.02 mg/L 、0.05 mg/L 、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L 。

　　5.2 材料

　　5.2.1 具塞比色管：25 mL 。

　　5.2.2 聚丙烯离心管：50 mL 。

　　5.2.3 棕色容量瓶：10 mL 、25 mL、100 mL、1 000 mL 。

　　5.2.4 有机相微孔滤膜：0.22 µm 。

　　6 仪器和设备

　　6.1 高效液相色谱仪：配荧光检测器。

　　6.2 分析天平：感量 1 mg 和 0.1 mg。

　　6.3 紫外可见分光光度计。

　　6.4 高速离心机：最大转速不低于 6 000 r/min。

　　6.5 涡旋振荡器。

　　6.6 恒温水浴振荡器。

　　6.7 氮吹仪。

　　6.8 超声波发生器。

　　7 测定步骤

　　7.1 试样制备

　　7.1.1 片剂：取 20 片试样，研磨，混匀，避光保存，制样后尽快测定。

　　2

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　　7.1.2 颗粒剂：取 10 袋试样，倾出内容物，研磨，混匀，避光保存，制样后尽快测定。

　　7.1.3 软胶囊：取 20 粒胶囊，倾出内容物，混匀，避光保存，制样后尽快测定。

　　7.1.4 软糖：取 10 颗软糖，去除包装纸，剪碎或粉碎，混匀，避光保存，制样后尽快测定。

　　7.2 样品预处理

　　警示：操作过程应避光进行。

　　7.2.1 片剂、颗粒剂试样

　　称取经混匀的试样 0.5 g(精确到 0.001 g)于 50 mL 离心管中，加入 5 mL 温水溶解，混匀，加入 0.3 g淀粉酶(5.1.9)(不含淀粉的样品可以不加淀粉酶)，加盖，涡旋 10 min，混匀后，置于 40 ℃ ±2 ℃恒温水浴振荡器中振荡 3 h 以上，使其充分酶解。取出酶解好的试样，加入 10 mL 无水乙醇(5.1.1)，混匀后再加入10 mL 正己烷(5.1.4)，涡旋或振荡提取 15 min，6 000 r/min 离心 5 min，转移上清液至 25 mL 比色管中，向下层溶液再加入 10 mL 二氯甲烷(5.1.5)，涡旋或振荡提取 15 min，6 000 r/min 离心 5 min，取下层合并至上述比色管中，用二氯甲烷(5.1.5)定容，涡旋摇匀。移取上述提取液 1 mL 40 ℃条件下氮气轻吹至干，加 1 mL 无水乙醇(5.1.1)涡旋 5 min 溶解，经 0.22 μm 有机相微孔滤膜后供高效液相色谱仪测定。

　　7.2.2 软胶囊试样

　　称取经混匀的试样 0.5 g(精确至 0.001 g)于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 无水乙醇(5.1.1)，摇匀，涡旋提取 15 min，6 000 r/min 离心 5 min，将上清液转移至 25 mL 比色管中。向下层溶液再加入 10 mL 无水乙醇(5.1.1)，重复操作一次，合并上清液至上述比色管中，用无水乙醇(5.1.1)定容，摇匀。经 0.22 μm 有机系微孔滤膜后供高效液相色谱仪测定。

　　7.2.3 软糖试样

　　称取经混匀的试样 2.0 g(精确到 0.001 g)于 50 mL 离心管中，加入 5 mL 温水溶解，混匀，加入 10 mL无水乙醇(5.1.1)，混匀后加入 10 mL 正己烷(5.1.4)，涡旋或振荡提取 15 min，6 000 r/min 离心 5 min，转移上清液至 25 mL 比色管中，向下层溶液再加入 10 mL 二氯甲烷(5.1.5)，涡旋或振荡提取 15 min，6 000 r/min离心 5 min，取下层合并至上述比色管中，用二氯甲烷(5.1.5)定容，摇匀。取上述提取液 1 mL 40 ℃条件下氮气轻吹至干，加 1 mL 无水乙醇(5.1.1)涡旋 5 min 溶解，经 0.22 μm 有机相微孔滤膜后供高效液相色谱仪测定。

　　7.3 测定

　　7.3.1 液相色谱参考条件

　　液相色谱参考条件如下。

　　a) 色谱柱：C18 柱，250 mm×4.6 mm(内径)，5 μm，或性能相当者。

　　b) 锌还原柱：4.6mm×50 mm(锌粉平均粒径 70 μm 。此锌还原柱连接于色谱柱后)。

　　c) 柱温：35 ℃ 。

　　d) 流动相：按 5.1.10 配制，等度洗脱。

　　e) 流速：1.0 mL/min。

　　f) 荧光检测器：激发波长为 243 nm，发射波长为 430 nm 。

　　g) 进样量：10 μL 。

　　3

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　　7.3.2 测定

　　对标准系列工作溶液和试样溶液分别进行色谱分析，试样溶液中待测物的响应值应在仪器线性响应范围内，超出线性范围则应稀释后再进行分析。在上述液相色谱条件下维生素 K1 和维生素 K2 标准溶液的液相色谱图见附录 B 图 B.1。

　　7.3.3 空白试验

　　除不加试样外，均按上述步骤进行。

　　8 结果计算和表述

　　试样中维生素 K1 和维生素 K2 的含量 X，以毫克每千克(mg/kg)表示，单点校正按式(1)计算：

　　X n …………………………( 1 )

　　式中：

　　A ——试样溶液对应的色谱峰面积响应值;

　　Cs ——标准工作液中维生素 K1 和维生素 K2 的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);

　　V ——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL);

　　As ——维生素 K1 和维生素 K2 标准溶液对应的色谱峰面积响应值;

　　m ——试样质量，单位为克(g);

　　n ——稀释倍数。

　　多点校准可用式(2)：

　　X n …………………………( 2 )

　　式中：

　　V ——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL);

　　Cx ——由标准曲线而得的样液中维生素 K1 和维生素 K2 的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);

　　m ——试样质量，单位为克(g);

　　n ——稀释倍数。

　　结果保留三位有效数字。

　　9 定量限、回收率和精密度

　　9.1 定量限

　　本方法中片剂、颗粒剂维生素 K1 的定量限为 0.300 mg/kg;维生素 K2 的定量限为 0.900 mg/kg。

　　软胶囊维生素 K1 的定量限为 0.300 mg/kg;维生素 K2 的定量限为 0.900 mg/kg。

　　软糖维生素 K1 的定量限为 0.300 mg/kg;维生素 K2 的定量限为 0.800 mg/kg。

　　9.2 回收率和精密度

　　本方法对片剂、颗粒剂、软胶囊和软糖基质保健品进行添加回收率试验，不同基质的回收率和精密度数据见附录 C，回收率范围为 82.0%~108% ，RSD 为 1.00%~4.35% 。

　　4

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　　附 录 A

　　(资料性)

　　维生素 K1 标准溶液浓度校正方法

　　A.1 维生素 K1 标准溶液配制后，需对其浓度进行校正。操作如下：

　　取维生素 K1 标准储备溶液 1.00 mL，吹干甲醇后，用正己烷定容至 100 mL 容量瓶中，按给定波长测定吸光值，以正己烷为空白，用 1 cm 的石英比色皿在 248 nm 波长下测定吸收值，测定条件如下：波长为248 nm，E(1% 比吸光系数)为 419。

　　A.2 标准储备液的质量浓度按式(A.1)计算：

　　A × 104 × 100

　　X = E ( A.1 )

　　式中：

　　X ——维生素 K1 标准储备溶液质量浓度，单位为毫克每升(mg/L);

　　A ——标准校正测试液在 248 nm波长下的吸收值;

　　E ——维生素 K1 1% 比吸光系数;

　　100 ——稀释因子。

　　5

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　　附 录 B

　　(资料性)

　　维生素 K1、K2 的液相色谱图

　　维生素 K1、K2 标准溶液液相色谱图如图 B.1 所示。

　　6

　　200

　　150

　　响应值

　　100

　　50

　　0

　　

　　mv

　　维生素K1

　　检测器A Ex:243 nm,Em:430 nm

　　维生素K2

　　0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 t/min

　　图 B.1 维生素 K1、K2 标准溶液液相色谱图

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　　附 录 C

　　(资料性)

　　出口保健食品中维生素 K1、K2 的测定回收率及精密度

　　出口保健食品中维生素 K1、K2 的添加水平、回收率和精密度见表 C.1~表 C.4。

　　表 C.1 片剂保健品中维生素 K1 和维生素 K2 的添加水平、回收率和精密度(n=6)

　　化合物名称

　　添加水平/(mg/kg)

　　回收率范围/%

　　RSD/%

　　维生素 K1

　　0.3

　　90.3~98.7

　　3.10

　　0.6

　　92.7~101

　　3.22

　　3.0

　　94.0~102

　　3.82

　　维生素 K2

　　0.9

　　84.1~92.6

　　3.51

　　1.8

　　90.0~95.6

　　2.05

　　9.0

　　91.1~100

　　4.21

　　表 C.2 颗粒剂保健品中维生素 K1 和维生素 K2 的添加水平、回收率和精密度(n=6)

　　化合物名称

　　添加水平/(mg/kg)

　　回收率范围/%

　　RSD/%

　　维生素 K1

　　0.3

　　88.3~96.3

　　3.75

　　0.6

　　82.7~90.5

　　3.22

　　3.0

　　91.0~98.7

　　3.26

　　维生素 K2

　　0.9

　　85.1~93.2

　　3.21

　　1.8

　　90.0~94.4

　　1.98

　　9.0

　　90.1~98.3

　　3.41

　　表 C.3 软胶囊保健品中维生素 K1 和维生素 K2 的添加水平、回收率和精密度(n=6)

　　化合物名称

　　添加水平/(mg/kg)

　　回收率范围/%

　　RSD/%

　　维生素 K1

　　0.3

　　101~107

　　2.57

　　0.6

　　102~108

　　1.96

　　3.0

　　98.7~102

　　1.37

　　维生素 K2

　　0.9

　　99.4~107

　　3.12

　　1.8

　　98.9~106

　　2.28

　　9.0

　　97.4~100

　　1.00

　　7

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　　表 C.4 软糖保健品中维生素 K 1 和维生素 K2 的添加水平、回收率和精密度(n=6)

　　化合物名称

　　添加水平/(mg/kg)

　　回收率范围/%

　　RSD/%

　　维生素 K1

　　0.3

　　82.0~90.0

　　3.63

　　0.6

　　84.2~92.7

　　4.01

　　3.0

　　93.0~97.3

　　1.86

　　维生素 K2

　　0.8

　　85.5~93.6

　　3.32

　　1.6

　　91.9~101

　　4.35

　　8.0

　　91.9~95.4

　　1.42

　　8