SN/T 2329-2025 进出口化妆品眼刺激性 腐蚀性 鸡胚绒毛尿囊膜试验

　　ICS 71.100.70 CCS Y 42

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/T 2329—2025代替 SN/T 2329— 2009

　　进出口化妆品眼刺激性 / 腐蚀性

　　鸡胚绒毛尿囊膜试验

　　Ocular irritation and corrosive HET-CAM test for

　　cosmetics of import and export

　　2025-12-11 发布 2026-07-01 实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1.1— 2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　本文件代替 SN/T 2329— 2009《化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验》，与 SN/T 2329— 2009 相比，除编辑性改动外，主要技术变化如下：

　　a) 修改表 1 中“强刺激性”的刺激评分和眼刺激性分类名称;

　　b) 修改表 2 中“强刺激性”的眼刺激性分类名称;

　　c) 修改“终点评价法”中终点评分的计算方式;

　　d) 删除了“附录 B 试验报告”。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

　　本文件起草单位：广州海关技术中心。

　　本文件主要起草人：温巧玲、乔栖梧、鲍佳生、潘芳、席静、潘丙珍、陈德明、黄丽霞、黄雄俊、张梓龙、刘慧智、潘素华、易蓉、陈文锐。

　　本文件所代替文件的历次版本发布情况为：

　　—— 2009 年首次发布为 SN/T 2329— 2009 ;

　　——本次为第一次修订。

　　I

　　进出口化妆品眼刺激性 / 腐蚀性 鸡胚绒毛尿囊膜试验

　　1 范围

　　本文件规定了化妆品原料和成品眼刺激性 / 腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验方法。

　　本文件适用于化妆品原料和成品眼刺激性 / 腐蚀性作用的筛选和检测。

　　本文件可作为毒性试验的一部分，结合其他替代试验方法用于受试物的眼刺激性 / 腐蚀性整体评价。

　　本文件也可作为制药、农业和工业化学物质、日化用品、消毒产品和污染物毒性测定的参考方法。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　眼睛刺激性 eye irritation

　　眼球表面直接接触受试样品后引起的可逆性炎性变化。

　　3.2

　　眼睛腐蚀性 eye corrosion

　　眼球表面直接接触受试样品后引起的不可逆性组织损伤。

　　3.3

　　绒毛尿囊膜 chorioallantoic membrane; CAM

　　鸡胚胚龄 4 日～ 5 日时，由绒毛膜体壁中胚层和尿囊膜脏层中胚层融合而成绒毛尿囊膜，其组织学结构有 3 层。

　　3.4

　　出血 hemorrhage

　　血液从 CAM 的血管内流出血管外，可以表现为血管外出现点状出血或絮状的弥漫性出血等多种形式。

　　3.5

　　凝血 coagulation

　　血管内和血管外蛋白的变性，表现为血管内血流变慢或血栓形成，血管呈现棕黑色，血管外出现混浊和不透明。

　　1

　　3.6

　　血管融解 blood vessel lysis

　　CAM 上血管壁破裂，血管融解消失。

　　4 缩略语

　　下列缩略语适应于本文件。

　　CAM：绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane)

　　ES：终点评分(endpoint score)

　　IS：刺激评分(irritation score)

　　sec C：凝血时间(coagulation time)

　　sec H：出血时间(hemorrhage time)

　　sec L：血管融解时间(vessel lysis time)

　　Texapon ASV：脂肪醇醚硫酸钠盐混合物(sodium magnesium laury-myristyl-6-ethoxy-sulphate)

　　5 试验基本原理

　　CAM 是一个呼吸性膜，血管丰富，包围在鸡胚周围，类似于人和哺乳动物的结膜。鸡胚绒毛尿囊膜试验(hen’s egg test-chorioallantoic membrane, HET-CAM)利用孵化的鸡胚中期CAM血管系统完整、清晰和透明的特点，将一定量受试物直接与 CAM作用一段时间后，观察 CAM毒性效应指标(如出血、血管融解和凝血)的变化并进行评分，以评估受试物的眼刺激性。

　　6 试剂、材料与设备

　　6.1 试剂

　　除非另有说明，本文件所使用的试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 6.1.1 0.9 % 氯化钠(0.9 % NaCl)(w/v)。

　　6.1.2 1% 十二烷基硫酸钠(1 % sodium dodecyl sulfate , 1 % SDS)(w/v)。

　　6.1.3 0.1 mol/L 氢氧化钠(0.1 mol/L NaOH)。

　　6.1.4 橄榄油或花生油(使用经验证证实无眼刺激性反应的橄榄油或花生油)。

　　6.2 材料

　　6.2.1 玻璃器皿：小烧杯。

　　6.2.2 pH 计或 pH 试纸。

　　6.2.3 牙科锯齿弯镊或弯头镊。

　　6.2.4 一次性适配吸头。

　　6.3 设备

　　6.3.1 微量加样器。

　　6.3.2 电子计时器。

　　6.3.3 照蛋器。

　　6.3.4 带自动翻蛋装置的孵化器。

　　6.3.5 体视显微镜(最好带 CCD 摄像头)。

　　6.3.6 电子天平：感量 0.1 g。

　　2

　　7 试验准备

　　7.1 鸡胚

　　7.1.1 品系和来源

　　选用白莱杭鸡(White Leghorn chicken)等品种的受精鸡胚，优先选用 SPF 鸡胚，且来源于有资质的合格供应商，质量符合国家标准的要求。

　　7.1.2 运输与贮存

　　转移或运输鸡胚不能影响胚胎活性和发育。转移或运输时，应将鸡胚气室朝上贮存于蛋托上，尽量避免对鸡胚进行摇动、不必要的倾斜、敲打以及其他机械性刺激。

　　7.1.3 质量要求

　　购买 7 日龄以内的鸡胚。鸡胚应新鲜、干净、完好，重量 50 g ～ 60 g。孵化至 9 日龄时，应进行照蛋检查，舍弃未受精、无活性或有缺陷的鸡胚，也不能使用严重畸形、破壳或薄壳鸡胚。

　　7.1.4 孵化条件

　　室温 20 ℃~ 25 ℃,相对湿度 45 % ～ 70 %。孵化温度 37.5 ℃ ± 0.5 ℃,相对湿度 55 % ～ 70 %，翻蛋频率每 3 h ～ 6 h 一次。鸡胚孵化至 9 日龄时不必再翻蛋。

　　7.1.5 CAM 制备

　　7.1.5.1 鸡胚孵化至 9 日龄时，用照蛋器进行照蛋检查，在蛋壳表面标记气室位置。

　　7.1.5.2 用牙科锯齿弯镊剥去带标记的蛋壳部分，暴露白色蛋膜，小心操作避免破坏蛋膜完整性。

　　7.1.5.3 用吸管滴加 1 mL ～ 2 mL 0.9 % 氯化钠溶液使蛋膜湿润，然后立即进行下一步操作。如暂时无法操作，应将鸡胚置于孵化器或灯光下以防止鸡胚温度降低，但放置时间不应超过 20 min。

　　7.1.5.4 将 0.9 % 氯化钠溶液倾出或吸干，用镊子小心地除去内膜，确保不损伤血管膜。再次观察鸡胚血管系统的结构，选择血管系统完好、没有缺陷的鸡胚用于试验。

　　7.2 受试物及制备

　　7.2.1 液体受试物

　　透明液体受试物一般无需稀释，可直接使用原液，采用反应时间法进行试验;不透明液体受试物(如混浊和有颜色的悬浮液体)应采用终点评价法进行试验，不透明的浑浊液体受试物可用适当溶剂溶解 / 稀释成为最高浓度透明溶液，采用反应时间法进行试验。

　　7.2.2 固体受试物

　　7.2.2.1 固体受试物应采用终点评价法进行试验。膏状、微粒状或颗粒样受试物或产品无需稀释，应以原样进行试验;固体受试物试验前应研磨成细微的颗粒状(或粉状)，粉状受试物可在刻度容器中(如微量离心管)经轻度挤压至体积为 0.3 mL。

　　7.2.2.2 如有必要对固体受试物进行稀释，可选择一级水、0.9 % 氯化钠溶液、橄榄油或花生油作为稀释剂。如果使用其他的稀释剂 / 介质，应当证明不同稀释剂 / 介质的使用是合理的。固体受试物的稀释液应在试验当天制备。

　　7.2.2.3 如受试物为膏状物，应将受试物涂布于塑料薄膜(如封口膜)表面成薄层，再将其覆盖在CAM 上使受试物能与 CAM 直接接触，作用时间结束后除去薄膜。

　　3

　　7.2.2.4 固体受试物也可用一级水溶解，以其能达到的最大溶解度的透明溶液采用反应时间法进行试验。

　　7.3 对照物质及制备

　　7.3.1 阴性对照

　　7.3.1.1 0.9 % 氯化钠溶液通常用于作为阴性对照和受试物作用后冲洗。

　　7.3.1.2 每次受试物测试均应设置 0.9 % 氯化钠溶液作为阴性对照，确保试验条件不会导致发生刺激性反应。

　　7.3.2 溶剂 / 载体对照

　　7.3.2.1 如果受试物用橄榄油(或花生油)进行稀释，应设置橄榄油(或花生油)作为溶剂对照。

　　7.3.2.2 如果使用一级水、0.9 % 氯化钠溶液、橄榄油或花生油以外的其他溶剂或载体，则选择这种溶剂 / 载体作为溶剂 / 载体对照物质。

　　7.3.3 阳性对照

　　7.3.3.1 阳性对照物的选择应基于有效、可信的体内试验资料。

　　7.3.3.2 每次试验都应设置一个已知眼刺激物作为阳性对照物质，阳性对照物应当是一种在体内和对 HET-CAM 都能产生严重反应的物质，如 1 % SDS、0.1 mol/L NaOH 溶液。

　　7.3.3.3 为了评估受试物眼刺激性的严重程度，也可选用反应变化过程不过于剧烈的阳性物质作为对照，如不同浓度的乙酸等。

　　7.3.4 基准物质对照

　　7.3.4.1 基准对照的设置主要用于证明试验方法的有效性，特别是用于检查每批鸡胚的反应性，检测浑浊受试物，分类比较特殊的或具有特殊眼刺激性反应的受试物，或评价一种眼刺激物的相对刺激能力等。

　　7.3.4.2 基准对照物质应当具有以下特性：稳定可靠的来源、结构和功能与受试物的化学分类相似、物理/化学特性已知、体内兔眼刺激性试验结果已知、预期的反应程度已知，如脂肪醇醚硫酸钠盐混合物(Texapon ASV：sodium magnesium laury-myristyl-6-ethoxy-sulphate)。

　　8 试验过程

　　8.1 预试验

　　8.1.1 预试验目的

　　确定受试物是否适合用本方法进行试验，及确定正式试验是采用反应时间法还是采用终点评价法进行试验，参见附录 A。

　　8.1.2 预试验过程

　　8.1.2.1 预试验使用 3 只鸡胚。取 0.3 mL 未稀释的液体受试物，固体受试物的使用量应确保能覆盖至少 50 % 的 CAM 表面。

　　8.1.2.2 液体受试物作用后立即观察 CAM 反应情况，作用 5 min，记录观察结果。固体或浑浊液体受试物，作用一定时间后(如 3 min)，用 0.9 % 氯化钠溶液冲洗，记录观察结果。

　　8.1.2.3 预试验前应检查每批鸡胚的反应性，每次每一浓度至少用 2 只鸡胚进行测试，作用时间限定

　　4

　　5 min 内。参考浓度：0.5 % Texapon ASV 产生轻度出血和轻度血管融解;1.0 % Texapon ASV 产生中度出血和中等血管融解;5.0 % Texapon ASV 产生重度出血和重度血管融解。

　　8.1.3 受试物局限性

　　如果预试验结果表明受试物的物理特性，既不能用反应时间法也不能用终点评价法进行试验，则无需再进行正式试验，这些情况包括：对血管具有药理作用的血管活性物质;对 CAM 具有不可逆染色作用的染料;对 CAM 具有粘附作用的粘性物质。

　　8.2 正式试验

　　8.2.1 试验分组

　　受试物每组至少使用 6 只鸡胚，此外，应另外设置阴性对照、阳性对照和溶剂 / 载体对照(如试验使用了溶剂 / 载体时需设置)各 1 只鸡胚。

　　8.2.2 反应时间法

　　8.2.2.1 反应时间法用于评价透明液体受试物。

　　8.2.2.2 对于浑浊液或固体受试物，可选用适当溶剂将受试物溶解 / 稀释成最高浓度透明溶液进行试验。

　　8.2.2.3 取上述透明液体 0.3 mL 直接滴加于 CAM 表面，观察 CAM 反应情况，并记录作用 5 min 内每种毒性效应出现的时间。

　　8.2.3 终点评价法

　　8.2.3.1 终点评价法用于评价膏状、微粒状、颗粒状粉状等固体和浑浊液体受试物。

　　8.2.3.2 取 0.3 mL 经挤压的固体、微粒或颗粒物受试物(已经研磨成细微颗粒状或粉状)直接作用于 CAM 表面，确保至少 50 % 的 CAM 表面被受试物覆盖;或直接将涂布膏状受试物的薄膜与 CAM接触。

　　8.2.3.3 作用 3 min 后，用 0.9 % 氯化钠溶液轻轻冲洗 CAM 30 s，以去除受试物。

　　8.2.3.4 冲洗操作可能很快将 CAM 上轻度的出血变化掩盖，因此在 30 s 冲洗完成后应立即观察试验结果，按 8.3 观察和记录每种毒性效应的变化程度。

　　8.2.3.5 如果观察表明全部 6 只鸡胚至少 1 种反应的评分为中度以上(总评分≥ 12)，应重复试验一次。

　　8.2.3.6 为进一步了解固体和浑浊刺激性物质在溶解状态下的刺激程度，可将受试物溶解 / 稀释成最高浓度透明溶液采用反应时间法进行评价。但最终结果评价应以未稀释的受试物原剂型的终点评价法试验结果为准。

　　8.3 结果观察

　　8.3.1 出血指血液从 CAM 的血管和(或)毛细血管流出，出血可以表现为多种形式，如以菜花状、平滑状、弥散的纱状或点状出血(由于血液从血管膜的不同区域有选择性地流出所致)。根据严重程度不同，对出血进行分级和记分：

　　a) 无出血(0 分);

　　b) 轻度出血(1 分)：仅见细小血管出血和少量出血(如 0.5 % TexaponASV，作用 5 min);

　　c) 中度出血(2 分)：小血管和大血管出血，并有明显量的血液流出(如 1.0 % Texapon ASV，作用 5 min);

　　d) 重度出血(3 分)：几乎所有血管都出血，大量血液流出(如 5 % TexaponASV，作用 5 min)。

　　5

　　应当注意，出血可能是短暂的，前 30s 观察到的大量出血可能会覆盖随后发生的出血反应。

　　8.3.2 凝血指血管内和血管外蛋白的变性，通常仅见于大和中等大的血管，不包括毛细血管发生的变化。血栓：即血管内凝血，因不同原因(如血管压力的改变、管壁肿胀等)引起的血管内血流的中断，表现为血管内深色的凝血点。血管外凝血：可表现为血管外深色的凝血点;还可表现为浑浊(不透明)，出现于膜的全部或一部分，可能是近似于乳白色薄纱样，或者呈乳浊状。需要仔细检查血管变化，不要将凝血与受试物在水溶液中理化性质的变化相混淆(如形成胶体、沉淀等)。按严重程度不同对凝血进行分级和记分：

　　a) 无凝血(0 分);

　　b) 轻度凝血(1 分)： 血管内和 / 或血管外轻度凝血，和 / 或 CAM 轻度浑浊(如 0.2 % NaOH作用 5 min，轻度浑浊如 0.3 % 乙酸作用 5 min);

　　c) 中度凝血(2 分)：血管内和 / 或血管外中度凝血，和 / 或 CAM 中度浑浊(如 0.3 % NaOH作用 5 min，中度浑浊如 3 % 乙酸作用 5 min);

　　d) 重度凝血(3 分)： 血管内和 / 或血管外重度凝血，和 / 或 CAM 重度浑浊(如 0.5 % NaOH作用 5 min，重度浑浊如 30 % 乙酸作用 5 min)。

　　8.3.3 血管融解指 CAM 上血管融解消失，可能是由于出血、血管壁张力变化等多因素变化所致。按严重程度不同对血融解进行分级和记分：

　　a) 无血管融解(0 分);

　　b) 轻度血管融解(1 分)：仅小血管融解(如 0.5 % TexaponASV，作用 5 min);

　　c) 中度血管融解(2 分)：小血管和大血管融解(如 1 % TexaponASV，作用 5 min);

　　d) 重度血管融解(3 分)：大血管和全部血束都融解(如 5 % TexaponASV，作用 5 min)。

　　8.3.4 观察并记录受试物作用鸡胚后，鸡胚出现出血、凝血和血管融解反应的时间和毒性效应变化的程度，精确到秒。

　　8.3.5 如需要，可收集记录其他 CAM 的变化信息以作进一步分析和回顾性研究。

　　8.3.6 必要时应拍照并保存试验图片，并将观察结果与实验室历史资料或有关参考图片作对比。

　　9 结果评价

　　9.1 刺激评分(irritation score，IS)的计算和结果评价

　　9.1.1 IS 的计算

　　采用反应时间法进行的试验，应用公式(1)计算刺激评分(IS)，计算结果保留小数点后两位：

　　IS = + + …………………(1)

　　式中：

　　sec H—— CAM 上观察到开始发生出血的时间，单位为秒(s);

　　sec L—— CAM 上观察到开始发生血管融解的时间，单位为秒(s);

　　sec C—— CAM 上观察到开始出现凝血的时间，单位为秒(s)。

　　9.1.2 结果评价

　　根据计算所得的 IS 数值，按表 1 对受试物眼刺激性分类进行评价。

　　6

　　表 1 反应时间法结果评价

　　刺激评分(IS)

　　眼刺激性分类

　　IS<1

　　无刺激性

　　1 ≤ IS<5

　　轻刺激性

　　5 ≤ IS<9

　　中等刺激性

　　9 ≤ IS<21

　　强刺激性 / 严重刺激性

　　9.2 终点评分(end pointscore，ES)的计算和结果评价

　　9.2.1 ES 的计算

　　9.2.1.1 采用终点评价法进行的试验，应计算终点评分(ES)：计算 6 只鸡胚各个试验终点(出血、凝血和血管融解程度)得分的数学总和，以最高的试验终点得分总和作为受试物的终点评分(ES)。

　　9.2.1.2 受试物的最高 ES 值为 18。

　　9.2.2 结果评价

　　根据 ES 值，按表 2 对受试物眼刺激性分类进行评价。

　　表 2 终点评价法结果评价

　　终点评分(ES)

　　眼刺激性分类

　　ES ≤ 12

　　无 / 轻刺激性

　　12

　　中度刺激性

　　ES ≥ 16

　　严重刺激性

　　10 试验可接受标准

　　如果试验设定的阴性对照和阳性对照产生的反应结果正好分别在无刺激性和强刺激性的分类范围内，则试验结果是可接受的。历史对照研究表明，采用0.9 % 氯化钠溶液作为阴性对照，IS值为0.0。采用 1 % SDS 和 0.1 mol/L NaOH 作为阳性对照，IS 值的范围在 10 到 19 之间。

　　11 试验报告

　　试验报告应包括以下内容：

　　a) 受试物及制备：包括受试物名称、CAS 登记号(如有)、纯度及组成、理化特性、试验前处理、溶剂 / 赋形剂使用、阳性对照和参考物质等;

　　b) 试验条件：包括鸡胚品系、日龄、来源、质量证明、培养条件等;

　　c) 试验方法：包括预试验过程和结果、试验方法选择理由、试验可接受的标准、试验过程描述等;

　　d) 试验结果：包括每个样品的试验数据、其他观察结果描述，必要的试验图片等;

　　e) 试验结论。

　　7

　　附 录 A

　　(资料性)

　　鸡胚绒毛尿囊膜试验程序

　　鸡胚绒毛尿囊膜试验程序见图 A.1。

　　受试物

　　固体

　　液体

　　透明

　　浑浊

　　适当溶剂溶解,稀释

　　(最高浓度透明溶液)

　　反应时间法 终点评价法 反应时间法 终点评价法

　　试验评价

　　图 A.1 鸡胚绒毛尿囊膜试验程序

　　8