SN/T 5889-2025 食品和保健品中益生菌种的检测方法 SYBR Green荧光PCR法

　　ICS 07. 100. 30 CCS X 04

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/T 5889—2025

　　食品和保健品中益生菌种的检测方法

　　SYBR Green 荧光 PCR 法

　　Detection of commercial probiotic strains in food and probiotic

　　product—SYBR Green real‑time PCR

　　2025‑12 ‑ 11 发布 2026‑07‑01 实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　SN/T 5889—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

　　本文件起草单位：中国海关科学技术研究中心、杭州海关技术中心、浙江迪谱诊断技术有限公司。

　　本文件主要起草人：汪琦、李可、李丹、曹嘉悦、郭悠然、魏海燕、胡慧静、徐蕾蕊、徐晶、马丹、魏咏新、赵晓娟、杨丽莉。

　　Ⅰ

　　SN/T 5889—2025

　　食品和保健品中益生菌种的检测方法

　　SYBR Green 荧光 PCR 法

　　1 范围

　　本文件描述了食品和保健品中常见益生菌种的 SYBR Green 荧光 PCR 检测方法。

　　本文件适用于食品和保健品中双歧杆菌属(Bifidobacterium spp.)、青春双歧杆菌(B. adolescentis)、动物双歧杆菌乳亚种(B. animalis subsp. lactis)、动物双歧杆菌动物亚种(B. animalis subsp. animalis)、两歧双歧杆菌(B. bifidum)、短双歧杆菌(B. breve)、长双歧杆菌长亚种(B. longum subsp. longum)、长双歧杆菌婴儿亚种(B. longum subsp. infantis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus cris- patus)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、短乳杆菌(Lactoba- cillus breve)、詹氏乳杆菌(Lactobacillus jensenii)、干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus casei)、副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)、鼠李糖乳酪杆菌(Lacticaseibacillus rhamnosus)、发酵黏液乳杆菌(Limosilac- tobacillus fermentum)、罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)、植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)、唾液联合乳杆菌(Ligilactobacillus salivarius)、清酒广布乳杆菌(Latilactobacillus sakei)、唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salivarius subsp. thermophilus)、乳酸乳球菌乳亚种(Lactococcus lactis subsp. lactis)和乳脂乳球菌(Lactococcus cremoris)的 SYBR Green 荧光 PCR 定性检测。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB 4789.35 食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB 19489 实验室 生物安全通用要求

　　GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　SYBR Green 实时荧光 PCR SYBR Green real‑time PCR

　　在 PCR 反应体系中加入 SYBR Green 荧光染料(该染料只与双链核酸分子结合)，PCR 扩增时，随着目标片段数量的增加，结合的染料分子数量也增加，从而利用荧光信号的积累实时监控整个 PCR 扩增过程。

　　3.2

　　Ct 值 cycle threshold value

　　每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。

　　1

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　　3.3

　　熔解曲线 melting curve

　　反应随温度升高 DNA 的双螺旋结构降解程度的曲线。

　　3.4

　　Tm 值 melting temperature

　　熔解温度(即总的 DNA 双螺旋结构降解一半的温度)。

　　4 缩略语

　　下列缩略语适用于本文件。

　　DNA：脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid)

　　dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)

　　PCR：聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)

　　5 方法提要

　　以样品中提取的 DNA 为模板，采用菌属、菌种或亚种特异性 PCR 引物，进行实时荧光 PCR 的扩增，检测其中是否含有目标菌属、菌种或亚种的特异性基因序列，实现对目标菌属、菌种或亚种定性检测的目的。

　　6 试剂

　　除另有特殊说明外，所有试验用试剂均为分析纯，试验用水符合 GB/T 6682 中一级水的要求。所有试剂均用无 DNA 酶污染的容器分装。

　　6.1 细菌 DNA 提取试剂盒。

　　6.2 引物：按附录 A 。

　　6.3 溶菌酶。

　　6.4 荧光定量预混试剂(SYBR Green)。

　　6.5 TE 缓冲液(Tris-HCl、EDTA 缓冲液)：10 mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，1 mmol/L EDTA(pH8.0)。

　　7 主要仪器和设备

　　7.1 恒温水浴锅或加热装置：100 ℃ 。

　　7.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃ 。

　　7.3 离心机：最大转速 13 000 r/min 以上。

　　7.4 天平：感量 0.1 g。

　　7.5 冰箱：-20 ℃~4 ℃ 。

　　7.6 涡旋振荡器。

　　7.7 可调移液器：1 µL~1 000 µL 。

　　7.8 荧光 PCR 仪。

　　2

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　　8 检测步骤

　　8.1 样品 DNA 的提取

　　直接称取 1 g 或吸取 1 mL 样品，加入 9 mL 生理盐水，涡旋振荡混匀后放置 10 min~15 min，从贴近液面处取 1 mL 稀释液，13 000 r/min 离心 5 min。沉淀充分重悬于 150 μL TE 溶液，加入 30 μL 溶菌酶(50 mg/mL)，36℃孵育 1 h 后按照细菌 DNA 提取试剂盒的说明书进行 DNA 提取。酸奶、米精华等不溶成分比较多的样品，取 1.5 mL 稀释液，2 000 r/min 离心 5 min 后取上清液 1 mL，13 000 r/min 离心 5 min，沉淀用于 DNA 提取。对于果冻类或胶质糖果类样品，应将样品液氮研磨成粉末后称取 1 g 用于 DNA提取。经特殊技术(如包埋技术)处理的样品，应在相应技术/工艺要求下进行有效前处理后提取 DNA 。

　　8.2 DNA 浓度和纯度的测定

　　使用核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计分别检测 260 nm 和 280 nm 处的吸光度值。 DNA 的质量浓度按式(1)计算，当 OD260 /OD280 比值在 1.5~2.1 之间时，适宜于 PCR 扩增。扩增前将样品 DNA 浓度调至约 10 ng/μL~50 ng/μL 。

　　C = A × N × 50/1 000 ……………………………( 1 )

　　式中：

　　C ——DNA 质量浓度，单位为纳克每微升(ng/μL);

　　A——260 nm 处的吸光度值;

　　N——核酸稀释倍数。

　　8.3 荧光 PCR 检测

　　8.3.1 荧光 PCR 反应体系

　　荧光 PCR 反应所用引物按附录 A，荧光 PCR 反应体系见表 1。也可采用其他等效商品化的 PCR 扩增体系。

　　表 1 荧光 PCR 反应体系

　　组分

　　加样量/µL

　　终浓度

　　荧光定量预混试剂(SYBR Green)(2×)

　　10

　　1×

　　上游引物(10 µmol/L)

　　0.2

　　100 nmol/L

　　下游引物(10 µmol/L)

　　0.2

　　100 nmol/L

　　DNA 模板

　　1

　　—

　　去离子水

　　8.6

　　—

　　8.3.2 阳性对照、阴性对照和空白对照设置

　　检测过程中分别设阳性对照、阴性对照和空白对照。阳性对照采用含有检测序列的 DNA(或质粒)作为荧光 PCR 反应的模板，阴性对照采用不含有检测序列的 DNA(或质粒)作为荧光 PCR 反应的模板，空白对照用无菌水代替荧光 PCR 反应的模板。

　　8.3.3 荧光 PCR 反应程序

　　荧 光 PCR 反 应 循 环 参 数 为 ：95 ℃ 10 min;95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，30 个 循 环 ;熔 解 程 序 95 ℃ 15 s，

　　3

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　　60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。

　　注：因不同 PCR 仪的性能差异，通过条件优化适当调整 PCR 循环的退火温度及时间。

　　9 结果判断及表述

　　9.1 质控标准

　　以下要求应在同一次试验中同时满足：

　　——空白对照：熔解曲线除二聚体峰外无信号峰;

　　——阴性对照：熔解曲线无目标菌特异峰;

　　——阳性对照：Ct 值≤20，出现典型的扩增曲线且熔解曲线仅出现目标菌特异峰。

　　当空白对照或阴性对照出现目标菌特异峰，或阳性对照的 Ct 值>20，或阳性对照熔解曲线没有出现目标菌特异峰时，试验视为无效。

　　9.2 结果判断

　　在符合 8.1 的情况下，检测结果按以下进行判定。

　　——Ct 值<20.0 且熔解曲线图中待测样品的 Tm 值与阳性对照的 Tm 值一致(Tm 值差值≤2，如检测双歧杆菌属，Tm 值差值标准可适当放宽)，判定结果阳性。

　　——Ct 值<20.0，但熔解曲线图中待测样品的 Tm 值与阳性对照的 Tm 值不一致(Tm 值差值>2)，判定结果阴性。

　　——Ct 值≥25.0，判定结果阴性。

　　——Ct 值介于 20~25 之间，如熔解曲线未出现目标菌特异峰，判定结果阴性。

　　——Ct 值介于 20~25 之间，且熔解曲线图中待测样品的 Tm 值与阳性对照的 Tm 值一致(Tm 值差值≤2，如检测双歧杆菌属，Tm 值差值标准可适当放宽)，则将 PCR 产物用琼脂糖凝胶电泳检测。凝胶电泳检测程序详见附录 B。如凝胶电泳检测后无特异性扩增条带，则判定结果阴性。如凝胶电泳检测后有特异性扩增条带，可以对扩增产物进行测序，将测序结果与附录 C 中目标益生菌种的DNA 序列进行比较。测序结果符合程度在 90% 以上(含 90%)，则判定结果阳性;如测序结果符合程度在 90% 以下，则判定结果阴性。

　　9.3 结果表述

　　9.3.1 结果为阴性者，表述为“未检出×××(目标益生菌)”。

　　9.3.2 结果为阳性者，表述为“检出×××(目标益生菌)成分”。

　　9.3.3 结果为阳性者，可按照 GB 4789.35 分离单菌落，单菌落依照第 8 章检测后再次判定为阳性者，表述为“检出×××(目标益生菌)”。

　　10 生物安全和防污染措施

　　10.1 生物安全措施

　　为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员进行操作，所有培养物和废弃物按照 GB 19489的有关规定执行。

　　10.2 防污染措施

　　防污染措施应符合 GB/T 27403 的规定。

　　4

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　　附 录 A

　　(规范性)

　　荧光 PCR 所用引物、产物长度、产物参考 Tm 值及引物参考文献

　　表 A.1 列出了荧光 PCR 所用引物、产物长度、产物参考 Tm 值及引物参考文献。

　　表 A.1 荧光 PCR 所用引物、产物长度、产物参考 Tm 值及引物参考文献

　　序号

　　菌属名称

　　引物序列(5'-3')

　　产物长度bp

　　参考 Tm 值℃

　　参考文献

　　1

　　双歧杆菌属

　　GTCCGTGACCTCCTCGAC

　　339

　　91

　　[1]

　　GTGGAAGGTCTCGATGGAG

　　2

　　青春双歧杆菌

　　CTCCAGTTGGATGCATGTC

　　279

　　90

　　[2]

　　CGAAGGCTTGCTCCCAGT

　　3

　　动物双歧杆菌乳亚种

　　CACCAATGCGGAAGACCAG

　　184

　　89

　　[3]

　　GTTGTTGAGAATCAGCGTGG

　　4

　　动物双歧杆菌动物亚种

　　CAGCGTCACCACCTGTAGTT

　　328

　　89

　　自设计

　　GCGCACATTGCACTACTACG

　　5

　　两歧双歧杆菌

　　CCACATGATCGCATGTGATTG

　　278

　　90

　　[4]

　　CCGAAGGCTTGCTCCCAAA

　　6

　　短双歧杆菌

　　CCGGATGCTCCATCACAC

　　288

　　90

　　[4]

　　ACAAAGTGCCTTGCTCCCT

　　7

　　长双歧杆菌长亚种

　　AAAACGTCCATCCATCACA

　　145

　　87

　　[5]

　　ACGACCAGGTTCCACTTGAT

　　8

　　长双歧杆菌婴儿亚种

　　TTCCAGTTGATCGCATGGTC

　　828

　　90

　　[4]

　　GGAAACCCCATCTCTGGGAT

　　9

　　嗜酸乳杆菌

　　CCTTTCTAAGGAAGCGAAGGAT

　　129

　　79

　　[6]

　　ACGCTTGGTATTCCAAATCGC

　　10

　　卷曲乳杆菌

　　GTACCAAGCCAAAGCAAGAC

　　386

　　84

　　[7]

　　GTTTGAAGCCTTTACGTAAGTC

　　11

　　德氏乳杆菌

　　CATGTGCAGACATGCTATCCTT

　　192

　　83

　　[6]

　　CTCTGAAGTGCCATGTCTCAGT

　　12

　　德氏乳杆菌保加利亚亚种

　　GGAAGACTCCGTTTTGGTCA

　　395

　　87

　　[8]

　　AGTTCAAGTCTGCCCCATTG

　　13

　　格氏乳杆菌

　　AGCGACCGAGAAGAGAGAGA

　　360

　　85

　　[9]

　　TGCTATCGCTTCAAGTGCTT

　　14

　　瑞士乳杆菌

　　CTACTTCGCAGGCGTTAACT

　　133

　　79

　　[6]

　　GTACTTGATGCTCGCATACC

　　5

　　SN/T 5889—2025

　　表 A.1 检测用引物、产物长度、产物参考 Tm 值及引物参考文献 (续)

　　序号

　　菌属名称

　　引物序列(5'-3')

　　产物长度bp

　　参考 Tm 值℃

　　参考文献

　　15

　　短乳杆菌

　　GGGCAACGAAGCAAGATCGC

　　260

　　85

　　[6]

　　TTCCAATCGTGTGCACACCA

　　16

　　詹氏乳杆菌

　　AGTTCTTCGGAATGGACATAG

　　148

　　81

　　[6]

　　GCCGCCTTTTAAACTTCTT

　　17

　　干酪乳酪杆菌

　　CCACAATCCTTGGCTGTTCT

　　116

　　83

　　[6]

　　GCTTGAGGCGATTGTAATCC

　　18

　　副干酪乳酪杆菌

　　CAATGCCGTGGTTGTTGGAA

　　106

　　81

　　[6]

　　GCCAATCACCGCATTAATCG

　　19

　　鼠李糖乳酪杆菌

　　GCCGATCGTTGACGTTAGTTGG

　　137

　　79

　　[6]

　　CAGCGGTTATGCGATGCGAAT

　　20

　　发酵黏液乳杆菌

　　GACCAGCGCACCAAGTGATA

　　129

　　89

　　[6]

　　AGCGTAGCGTTCGTGGTAAT

　　21

　　罗伊氏黏液乳杆菌

　　CTTTCGCAGCCTGATAGTGG

　　184

　　82

　　[10]

　　TCCGAAGAGCCTGAGACATC

　　22

　　植物乳植杆菌

　　GCTGGCAATGCCATCGTGCT

　　148

　　82

　　[6]

　　TCTCAACGGTTGCTGTATCG

　　23

　　唾液联合乳杆菌

　　CGAAACTTTCTTACACCGAATGC

　　332

　　86

　　[11]

　　GTCCATTGTGGAAGATTCCC

　　24

　　清酒广布乳杆菌

　　AGGCGCTTCAATGTTATCGG

　　161

　　82

　　[12]

　　TCGCTGGTTGCTTGATGCTA

　　25

　　唾液链球菌嗜热亚种

　　GCTTGTGTTCTGAGGGAAGC

　　578

　　82

　　[8]

　　CTTTCTTCTGCACCGTATCCA

　　26

　　乳酸乳球菌乳亚种

　　GGTTCGTACTTGTACCGACTGGAT

　　792

　　87

　　[13]

　　TGCGATACAGTGAACTATAGCTCC

　　27

　　乳脂乳球菌

　　GATGAAGATTGGTGCTTGACTTT -

　　GAAGAG

　　240

　　83

　　[14]

　　CCTCTCAGGTCGGCTATGTA

　　6

　　SN/T 5889—2025

　　附 录 B

　　(资料性)

　　PCR 产物的凝胶电泳检测

　　B. 1 称取 1.5 g 琼脂糖，放入三角锥形瓶中，加入100 mL 1×TAE 电泳缓冲液，加热使其充分熔化，配制成质量分数为 1.5% 的琼脂糖溶液。待胶液冷却至 65 ℃ 左右时加入3 μL GelRed 染料(10 000× ),充分混匀后倒入已放入合适梳子的胶槽内，制成约 5 mm厚的胶块。

　　B.2 在电泳槽中加入 1×TAE 电泳缓冲液，使液面没过凝胶 2 mm~3 mm。在 20 μL PCR 扩增产物中加入 4 μL 6× 上样缓冲液，混匀后取6 μL 点样。分子质量标准可选 DL 2 000，上样量为4 μL。以 5 V/cm电压降恒压电泳，直至溴酚蓝指示剂迁移至凝胶 3/4 处，用成像仪进行凝胶成像。

　　7

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　　附 录 C

　　(规范性)

　　扩增产物的 DNA 序列

　　C.1 双歧杆菌属扩增产物的 DNA 序列

　　GTCCGCGACCTCCTCGACGAGAACGGCTTCGACCGCGACTGCCCGGTCATCCACACCT CCGCTTACGGTGCTCTGCACGACGACGCTCCGGACCACGAGAAGTGGGTCCAGTCCGTTA AGGACCTCATGGACGCCGTCGACGACTACATCCCGACCCCGGTCCACGACCTCGACAAGC CGTTCCTGATGCCGATCGAGGACGTCTTCACCATCTCCGGCCGTGGTACCGTTGTCACCG GTCGTGTTGAGCGTGGCCAGCTGGCCGTCAACACTCCGGTCGAGATCGTTGGTATCCGTC CGACCCAGACCACCACCGTCACCTCCATCGAGACCTTCCAC

　　C.2 青春双歧杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CGAAGGCTTGCTCCCAGTCAAAAGCGGTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCCCGCACG CGGCGTCGCTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTA GGAGTCTGGGCCGTATCTCAGTCCCAATGTGGCCGGTCGCCCTCTCAGGCCGGCTACCCG TCGAAGCCATGGTGGGCCGTTACCCCGCCATCAAGCTGATAGGACGCGACCCCATCCCAT ACCGATGAATCTTTCCCAGAAGGACATGCATCCAACTGGAG

　　C.3 动物双歧杆菌乳亚种扩增产物的 DNA 序列

　　CACCAATGCGGAAGACCAGACGGCCGTGCTCGACGACCCGTACATTCTGCTCACCTC

　　GAGCAAGGTCTCCTCGCAGCAGGATGTGGTCCACATCGCCGAACTGGTGATGAAGACCGG CAAGCCGTTGCTGATCGTGGCCGAGGATGTCGATGGCGAGGCACTGCCCACGCTGATTCT

　　CAACAAC

　　C.4 动物双歧杆菌动物亚种扩增产物的 DNA 序列

　　CAGCGTCACCACCTGTAGTTCGGTGTGGGTGAGCCGTCTGCAGACCGCGAGGCGCTG CTGCAGCGTCTGCAGTACTGTCCGCATCCGTTGCAGGCTGCGTATGCGCGCATCGATGTC ATCTAGATTGCGCGTGAACAGCCCGTTCAATTCGTCTGGGTCAGGATGTGAGCGGTAGT CGATGATCTCCTGATTGCTCAATCCCAAGTCTTTGAGCATCATGATGTATTCGAATTCG

　　AGGTCCTGCCGTTGCGCGTAGTAGCGGTATCCGTTCGCTGTCTTGTATGCGGGGGAGAAC AGTCCGATGTCATCGTAGTAGTGCAATGTGCGC

　　C.5 两歧双歧杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CCGAAGGCTTGCTCCCAAACAAAAGAGGTTTACAACCCGAAGGCCTCCATCCCTCAC GCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGT AGGAGTCTGGGCCGTATCTCAGTCCCAATGTGGCCGGTCGCCCTCTCAGGCCGGCTACCC GTCGAAGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACAAGCTGATAGGACGCGACCCCATCCCA CGCCGATAGAATCTTTCCCACAATCACATGCGATCATGTGG

　　8

　　SN/T 5889—2025

　　C.6 短双歧杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CCGGATGCTCCATCACACCGCATGGTGTGTTGGGAAAGCCTTTGCGGCATGGGATGG GGTCGCGTCCTATCAGCTTGATGGCGGGGTAACGGCCCACCATGGCTTCGACGGGTAGCC GGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAGG CAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGG ATGGAGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTTGTTAGGGAGCAAGGCACTTTGT

　　C.7 长双歧杆菌长亚种扩增产物的 DNA 序列

　　AAAACGTCCATCCATCACAGTGGAAAGGAAAACCAATAATGGCAACTTTGGCTGAT TACGGCCCCGAGGTTCGCGCCGAGGTCAAGCAGGTTCGTGAGGTCGTCTCCAACCTGCAC CAGCAGCTGATCAAGTGGAACCTGGTCGT

　　C.8 长双歧杆菌婴儿亚种扩增产物的 DNA 序列

　　TTCCAGTTGATCGCATGGTCTTCTGGGAAAGCTTTCGCGGTATGGGATGGGGTCGCG TCCTATCAGCTTGACGGCGGGGTAACGGCCCACCGTGGCTTCGACGGGTAGCCGGCCTGA GAGGGCGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGT GGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGGAGG CCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTTATCGGGGAGCAAGCGTGAGTGAGTTTACCCGTTGAA TAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTATCC GGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGTAGGCGGTTCGTCGCGTCCGGTGTGAAAGTCCAT CGCTTAACGGTGGATCCGCGCCGGGTACGGGCGGGCTTGAGTGCGGTAGGGGAGACTGG AATTCCCGGTGTAACGGTGGAATGTGTAGATATCGGGAAGAACACCAATGGCGAAGGCA GGTCTCTGGGCCGTTACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGA TACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGATGCTGGATGTGGGGCCCGTTCCACGGGTT CCGTGTCGGAGCTAACGCGTTAAGCATCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAAC TCAAAGAAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAA CGCGAAGAACCTTACCTGGGCTTGACATGTTCCCGACGATCCCAGAGATGGGGTTTCC

　　C.9 嗜酸乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CCTTTCTAAGGAAGCGAAGGATATGGAGAGTAGAAATACTAAGAGAAGTATCCAGA GCAAGCGGAAGCACACTAAGAAACTTTGTTTAGTTTTGAGGGTAGTACCTCAGCGATTT GGAATACCAAGCGT

　　C.10 卷曲乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　GTACCAAGCCAAAGCAAGACTATTATGCACAACGCTTACTTCTACGACAAGAACGCT AAGCGTGTTGGTACTGACAAGCTTACCCGTTACAAGTCAGTAACTGTTGCTATGAACAC TACTACTATCAACGGTAAGGCTTACTACGAAGTAATCGAAAACGGTAAGGCTACTGGCA AGTTCATCAACGCAGACAACATTACTGGTACTAAGCGTACTTTGAAGCACAACGCATAC GTTTACAAGACTTCAAAGAAGCGTGCTAACAAGGTTACCTTGAAGAAGGGTACTGAAGT AATTACTTACGGTGGTACTTACACATTCAAGAACGGCAAGCAATACTACAAGATCGGTG

　　9

　　SN/T 5889—2025

　　ACAACACTGAAAAGACTTACGTAAAGGCTTCAAAC

　　C.11 德氏乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CATGTGCAGACATGCTATCCTTAAGTGAATACATAGCTTAAGGAAGGAACACGCAGC GAACTGAAACATCTAAGTAGCTGCAGGAAGAGAAAGAAATATCGATTTCCCAAGTAGCG GCGAGCGAACAGGAAAGAGCCCAAACCGGCAGATTTATCTGCCGGGGTTGTAGGACTGA GACATGGCACTTCAGAG

　　C.12 德氏乳杆菌保加利亚亚种扩增产物的 DNA 序列

　　GGAAGACTCCGTTTTGGTCAAGACTGCCTTTACGTTGCCTGTCGCCTTAAAGGGTGA TTTAACTGTGACCTATGAAGTCGATGGACGGGGCAAGATTGCTGTAACAGCTGACTTCC CAGGCGCGGAAGAAGCCGGTCTCTTGCCAGCCTTTGGCTTGAACCTGGCCCTGCCAAAAG AACTGACCGATTACCGCTACTATGGTCTGGGACCTAATGAGAGCTACCCAGACCGCTTGG AAGGTAATTACCTGGGCATCTACCAGGGAGCGGTAAAAAAGAACTTTAGCCCATACCTG CGTCCGCAGGAAACGGGCAACCGGAGCAAGGTTCGCTGGTACCAGCTCTTTGATGAAAA GGGCGGCTTGGAATTTACGGCCAATGGGGCAGACTTGAACT

　　C.13 格氏乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　AGCGACCGAGAAGAGAGAGAAACTCAACTTGAAATAGGTCAAGTAGAAAAGGGCGC ATGGTGAATGCCTAGGCACTAGAAGCCGATGAAGGACGTGACGAACCACGAAAGGCTTC GGGGAGCAGTAAGTAAGCGATGATCCGGAGATATCCGAATGGGGGAACCCAATACCGCG AGGTATTATCAAGAGCTGTTAAGGCTGTTGAAGGAAGACGCAGTGAACTGAAACATCTA AGTAGCTGCAGGAAGAGAAAGAAAAATCGATTTCCCAAGTAGCGGCGAGCGAACAGGAA AGAGCCCAAACCAGCTGGCTTGCCAGTTGGGGTAGTAGGACTGCAATAAAGTACTTGAA GCGATAGCA

　　C.14 瑞士乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CTACTTCGCAGGCGTTAACTTCAATTAGAGACCATCAAGAATCGCTTAAGAATGTAA CTTTAGCACAACAAATCGTTTCATTCTTTCCCAAAAATATATTTGCAGATTTTGCAGGT ATGCGAGCATCAAGTAC

　　C.15 短乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　GGGCAACGAAGCAAGATCGCAAGGACTTGTGGAGCGCTTAGAAGTGAGAATGCCGG TATGAGTAGCGAAAGATCAGTGAGAATCTGATCCACCGAATGACTAAGGTTTCCTGGGG AAGGCTCGTCCTCCCAGGGTTAGTCGGGACCTAAGCCGAGGCCGCAAGGCGTAGGCGATG GATAACAGGTTGATATTCCTGTACTAGTTAATCATGTTTGAACGATGGAGGGACGCAGG AGGCTATGGTGTGCACACGATTGGAA

　　C.16 詹氏乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　AGTTCTTCGGAATGGACATAGATACAAGCTAGCGGCGGATGGGTGAGTAACGCGTG GGTAACCTGCCCTTAAGTCTGGGATACCATTTGGAAACAGATGCTAATACCGGATAAAA

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　　SN/T 5889—2025

　　GCTACTTTCGCATGAAAGAAGTTTAAAAGGCGGC

　　C.17 干酪乳酪杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CCACAATCCTTGGCTGTTCTACATCCTGATTGGGATTGTCATGACGCTTGCCGGCGC GCAATTTGTTCCGGCTAACCTGATCATCATGGAGACAATGGATTACAATCGCCTCAAGC C.18 副干酪乳酪杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CAATGCCGTGGTTGTTGGAATTGGCGATTGTACTGACCTTGATTTTAGGCCATGAC ACTGAAAGCATCATCATCTTCGTATTGCTGACGATTAATGCGGTGATTGGC

　　C.19 鼠李糖乳酪杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　GCCGATCGTTGACGTTAGTTGGCGATTCTTTGTTCTTTGAAAACTGGATATCATTG TTGTAAATGTTTTAAATTGCCGAGAACACAGCGTATTTGTATGAGTTTCTAATAATAGA AATTCGCATCGCATAACCGCTG

　　C.20 发酵黏液乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　GACCAGCGCACCAAGTGATAGCGGGGATGAACAGGCAGCACCGGCGGAATCGCTCAG CAACGGGAGCGCAGTGGCTAGCCAAGCCGAGGCAACGGTCGCCCTGGCGGCCGATTACCA CGAACGCTACGCT

　　C.21 罗伊氏黏液乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CTTTCGCAGCCTGATAGTGGTGAAGAAGGATTAGAAATTGCTGATGCATTGATTTC AAGTGGAGCAGTTGACTTAGTAATTGTTGATTCGGTTGCAGCATTAGTTCCTCGTGCTG AAATTGATGGTGATATGGGTGATACCCATGTTGGATTACAAGCTCGTTTGATGTCTCAG GCTCTTCGGA

　　C.22 植物乳植杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　GCTGGCAATGCCATCGTGCTTGATGCGAATGGCAAACCCGTTACTGACACAAGTACG TTGAATGATAAGGCTGGCTACCAATTAACGTATCATTGGAGTATTCCAGATTCTGAAGT GATTAAAGCCGGCGATACAGCAACCGTTGAGA

　　C.23 唾液联合乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　CGAAACTTTCTTACACCGAATGCTTGCATTCACCGTAAGAAGTTGAGTGGCGGACGG GTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTAAAAGAAGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCT AATACCGTATATCTCTAAGGATCGCATGATCCTTAGATGAAAGATGGTTCTGCTATCGC TTTTAGATGGACCCGCGGCGTATTAACTAGTTGGTGGGGTAACGGCCTACCAAGGTGAT GATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAAC TCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGAC

　　C.24 清酒广布乳杆菌扩增产物的 DNA 序列

　　AGGCGCTTCAATGTTATCGGCGCGGGCGGAAAAGAAGTCTGATGCTGGTAAAGCAA

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　　CAATTTTAGGATTAGTGAGTTTACTAGCCATTTATATCTTAGCGTCTGTTTTACCTTAT GGGTATTTAACGCAAGATCAATTAGCTAGCATCAAGCAACCAGCGA

　　C.25 唾液链球菌嗜热亚种扩增产物的 DNA 序列

　　GCTTGTGTTCTGAGGGAAGCAACTGAATGGGCTCCTAAAGGTCATGAAATTGTTCG TGGTCAATATGTTGTTGAAAAGATTAGCACTGAAACACCAGTTAAAGCACCTTTGAATG TTGTTGAAGGCGACTTCAACATCGGTATTCAAGGACAAAACTTCTCAATCTTGCTTTCA CGTGCACAAAATACTTTAGTATCTGCTAAGTATAATGGTGTTGAATTCATTGAGAAAGG TCCTAAACTTAGCTTCACTCGTGCTTACACTGACAACGATCGTGGTGCTGGATATCCATT CGAAATGGCAGGCTGGAAGGTTGCTGGAAACTATAGTAAAGTTACAGATACTCAAATTC AAATCGAAGACGACTCTGTTAAAGTGACTTATGTTCATGAATTGCCAGGCTTGTCTGAT GTCGAAGTTAAGGTAACTTATCAAGTTGATTACAAGGGTCGAATCTTTGTTACTGCAAA CTATGATGGTAAAGCAGGTTTGCCAAACTTCCCTGAATTTGGTCTAGAATTTGCTATCG GTTCACAATTTACAAACCTTAGCTATTATGGATACGGTGCAGAAGAAAG

　　C.26 乳酸乳球菌乳亚种扩增产物的 DNA 序列

　　GGTTGGTACTTGTACCGACTGGATGAGCAGCGAACGGGTGAGTAACGCGTGGGGAA

　　TCTGCCTTTGAGCGGGGGACAACATTTGGAAACGAATGCTAATACCGCATAAAAACTTT AAACACAAGTTTTAAGTTTGAAAGATGCAATTGCATCACTCAAAGATGATCCCGCGTTG TATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCGATGATACATAGCCGACCTGAGA GGGTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAG GGAATCTTCGGCAATGGACGAAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTT TTCGGATCGTAAAACTCTGTTGGTAGAGAAGAACGTTGGTGAGAGTGGAAAGCTCATCA AGTGACGGTAACTACCCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACG TAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGTGGTTTATTAA GTCTGGTGTAAAAGGCAGTGGCTCAACCATTGTATGCATTGGAAACTGGTAGACTTGAG TGCAGGAGAGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGA ACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGCCTGTAACTGACACTGAGGCTCGAAAGCGTGGG GAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGATGTA GGGAGCTATAAGTTCTCTGTATCGCA

　　C.27 乳脂乳球菌扩增产物的 DNA 序列

　　GATGAAGATTGGTGCTTGCACCAATTTGAAGAGCAGCGAACGGGTGAGTAACGCGT GGGGAATCTGCCTTTGAGCGGGGGACAACATTTGGAAACGAATGCTAATACCGCATAAT AACTTTAAACATAAGTTTTAAGTTTGAAAGATGCAATTGCATCACTCAAAGATGATCCC GCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCGATGATACATAGCCGAC CTGAGAGG

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　　参 考 文 献

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　　[10] GB 4789.35—2023 食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验

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