SN/T 5872-2025 出口食品中诺如病毒和甲肝病毒检测方法 实时荧光逆转录重组酶介导链替换核酸扩增法（实时荧光RT-RAA法）

　　ICS 07. 100. 30 CCS X 04

　　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

　　SN/T 5872—2025

　　出口食品中诺如病毒和甲肝病毒检测方法

　　实时荧光逆转录重组酶介导链替换核酸扩增法(实时荧光RT‑RAA 法)

　　Qualitative detection of Norovirus and hepatitis A virus in food for export— Real‑time reverse transcription recombinase‑aid amplification method

　　( Real‑time RT‑RAA)

　　2025‑12 ‑ 11 发布 2026‑07‑01 实施

　　中华人民共和国海关总署 发 布

　　SN/T 5872—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

　　本文件起草单位：拱北海关技术中心、广东产品质量监督检验研究院、中国海关科学技术研究中心、珠海粤港食品安全检测有限公司。

　　本文件主要起草人：姚丽锋、张娟、张晴阳、王小玉、魏海燕、麻丽丹、冯家望、黎财慧、游淑珠、唐食明、曾俊洁、李清岚。

　　Ⅰ

　　SN/T 5872—2025

　　出口食品中诺如病毒和甲肝病毒检测方法

　　实时荧光逆转录重组酶介导链替换核酸扩增法(实时荧光RT‑RAA 法)

　　1 范围

　　本文件描述了出口食品中诺如病毒 GⅠ 、GⅡ 型和甲肝病毒的实时荧光 RT-RAA 检测方法。

　　本文件适用于贝类、生食蔬菜、软果、硬质表面食品中诺如病毒 GⅠ 、GⅡ 型和甲肝病毒的定性检测。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB 4789.42 食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB 19489 实验室 生物安全通用要求

　　GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　实时荧光 RAA real‑time RAA

　　重组酶介导链替换的恒温核酸快速扩增技术。利用从细菌或真菌中获得的重组酶，在恒温下(一般为 37 ℃ ~42 ℃),该重组酶可与引物紧密结合，形成酶和引物的聚合体，在单链 DNA 结合蛋白的帮助下，打开模板 DNA 的双链结构，当引物在模板上搜索到与之完全匹配的互补序列时，在 DNA 聚合酶的作用下，形成新的 DNA 互补链，扩增产物以指数级增长。利用荧光探针的标记，随着 RAA 反应进行， RAA 产物与荧光信号的增长呈现对应关系。

　　注：简称 RAA 技术。

　　3.2

　　实时荧光 RT‑RAA real‑time reverse transcription RAA

　　在 RAA 技术基础上，体系中加入逆转录酶，在同一管中完成逆转录和 RAA 试验，实现对 RNA 模板进行实时荧光逆转录检测的技术。

　　3.3

　　Ct 值 cycle threshold

　　每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。

　　3.4

　　T 值 time threshold

　　每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所需要的时间。

　　1

　　SN/T 5872—2025

　　3.5

　　过程控制物质 process control

　　通过添加与目的病毒类似的外源质控物质(如 MS2 噬菌体)来监测检测过程。

　　4 缩略语

　　下列缩略语适用于本文件。

　　BHQ1：黑洞淬灭基团 1(black hole quencher 1)

　　BS-recA：枯草芽孢杆菌重组酶(Bacillus subtilis recombinase)

　　Bsu：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)

　　DNA：脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid)

　　dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)

　　EDTA：乙二胺四乙酸( ethylene diaminetetraacetic acid)

　　Exo Ⅲ：核酸外切酶Ⅲ(Exonuclease Ⅲ)

　　FAM：6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein)

　　HAV：甲肝病毒(Hepatitis A virus)

　　NV：诺如病毒(Norovirus)

　　PEG：聚乙二醇(polyethylene glycol)

　　PFU：噬菌斑形成单位(plaque forming unit)

　　RT-RAA：逆转录-重组酶介导链替换核酸扩增(reverse transcription-recombinase-aid amplification)

　　SC-recA：天蓝色链霉菌重组酶(Streptomyces coelicolor recombinase)

　　THF：四氢呋喃(tetrahydrofuran)

　　Tricine：三(羟甲基)甲基甘氨酸{N-[Tristan(hydroxymethyl)methyl]glyine｝

　　Tris：三(羟甲基)氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane]

　　5 技术原理

　　以提取的病毒 RNA 为模板，采用 GⅠ 、GⅡ 型诺如病毒和甲肝病毒各自的特异性片段，设计实时荧光 RT-RAA 引物和 exo 探针，进行实时荧光 RT-RAA 扩增，根据规定时间内实时荧光 RT-RAA 的荧光增幅情况，实现对食品中 GⅠ 、GⅡ 型诺如病毒和甲肝病毒的快速检测。

　　6 试剂和材料

　　除有特殊说明外，所有试验用试剂均为分析纯，试验用水符合 GB/T 6682 一级水的要求。所有试剂均用无 RNase 污染的容器分装。

　　6.1 试剂

　　6.1.1 20% PEG 。

　　6.1.2 280 mmol/L 乙酸镁。

　　6.1.3 实时荧光 RT-RAA 扩增预混液：2.5 mmol/L dNTP、225 ng/μL 单链结合蛋白、300 ng/μL recA 重组酶蛋白(SC-recA/BS-recA)、75 ng/μL Bsu DNA 聚合酶、75 ng/μL ExoⅢ 核酸外切酶，150 ng/μL 逆转录酶、250 mmol/L Tricine、12.5 mmol/L 二硫苏糖醇、250 ng/μL 肌酸激酶。也可采用等效的商品化试剂盒代替。

　　2

　　SN/T 5872—2025

　　6.1.4 Trizol 试剂：见附录 A 的 A.2.2。

　　6.1.5 75% 乙醇：见 A.2.3。

　　6.1.6 过程控制物质：制备及定量方法见附录 B 。

　　6.2 检测用引物和探针序列

　　过程控制物质和待检病毒引物探针序列见表 1，扩增序列见附录 C 。

　　表 1 检测用引物和探针序列

　　病毒名称

　　引物和探针序列(5 ’→ 3 ’')

　　扩增片段大小/bp

　　参考毒株基因序

　　列号及扩增序列

　　位置

　　GⅠ 型 NV

　　F：CTRTCWGAAGTCACWGGCTTAKCMCCYGATG

　　R：GTGGGTTTTGAKCCATAYTCTYTTAGAACTTG

　　P：CTTAYTTYTCMTTYTATGGTGATGATGARA-(FAM-dT) -(THF)-G-(BHQ1-dT)-CTCAACAGATATT-C3 Spacer

　　149

　　GenBank 登录号： MZ022025.1

　　(361-509)

　　GⅡ 型 NV

　　F：CCAGACAAGAGCCAATGTTCAGATGGATGAG

　　R：CATTGTTGACCTCTGGGACGAGGTTGGCTGC

　　P：GATCTGAGCACGTGGGAGGGCGATCGCAA-(FAM-dT) -(THF)-(BHQ1-dT)-GGCTCCCAGTTTTG-C3 Spacer

　　160

　　GenBank 登录号： MW686657.1

　　(159-318)

　　HAV

　　F：ATTAGCATGGAGCTGTAGGAGTCTAAATTG

　　R：CACCCGTAGCCTACCYCTTGTGGAAGATCA

　　P：ACRCAGATGTTKGGRACGTCACCTTGCAG-(FAM-dT) -( THF)-(BHQ1-dT)-TAACTTGGCTYTCA-C3 Spacer

　　119

　　GenBank 登录号： AM910900.1

　　(135-253)

　　MS2 噬菌体

　　F：CAGGTGGTTGGAGTTGCAGTTCGGTTGGTTAC

　　R：CTGACGTACGGCTCTCATAGGAAGAAACTC

　　P：CAGTTCGGTTGGTTACCACTAATGAGTGA(FAM-dT) ( THF)(BHQ1-dT)CCAGGGTGCATATGA-C3 Spacer

　　118

　　GenBank 登录号： JF719743.1

　　(680-797)

　　注 1：简并引物：核苷酸链中除出现正常的 A、T、C、G 4 种碱基符号外还出现如 R、Y、M 等其他字母，其中R=A/G;

　　Y=C/T，M=A/C;K=G/T;W=A/T。

　　注 2：F 为上游引物，R 为下游引物，P 为探针，FAM-dT、THF、BHQ1-dT 和 C3 spacer 均为探针修饰基团。

　　7 仪器和设备

　　7.1 荧光检测仪：具有恒温(39 ℃±1 ℃)扩增功能的荧光检测仪(恒温荧光检测仪或实时荧光 PCR 仪)。

　　7.2 微量移液器：100 μL~1 000 μL，20 μL~200 μL，10 μL~100 μL，0.5 μL~10 μL，并配备与移液器匹配的吸头。

　　7.3 冷冻离心机：离心力≥12 000g。

　　7.4 天平：感量 0.1 g。

　　7.5 振荡摇床。

　　7.6 pH 计(精密度为 0.01)或精密 pH 试纸(pH 5.0~10.0)。

　　7.7 离心管：50 mL 、15 mL 、2 mL、1.5 mL 。

　　3

　　SN/T 5872—2025

　　8 检测方法

　　8.1 过程控制物质

　　选 择 MS2 噬 菌 体 或 其 他 等 效 物 质 作 为 检 测 过 程 的 过 程 控 制 物 质 。 体 外 培 养 获 得 其 效 价(浓 度)，达 到 108 PFU/mL~1011 PFU/mL ，分 装 后 保 存 于 -80 ℃ 。 使 用 时 稀 释 至 108 PFU/mL~ 109 PFU/mL 。

　　8.2 样品制备

　　按照 GB 4789.42 进行贝类、生食蔬菜、软果、硬质表面食品中病毒提取的样品制备。过程控制病毒用过程控制物质代替。

　　8.3 病毒 RNA 提取和纯化

　　8.3.1 病毒裂解

　　将病毒提取液加入离心管，加入等体积 Trizol 试剂，振荡混匀，室温放置 5 min，加入 0.2 倍体积三氯甲烷，颠倒混匀 30 s，12 000 g 离心 5 min，取上层水相移入新离心管中。

　　8.3.2 病毒 RNA 提取

　　离心管中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置 5 min，12 000g 离心 5 min，弃上清液。

　　8.3.3 病毒 RNA 纯化

　　8.3.3.1 加入等体积 75% 乙醇，颠倒洗涤 RNA 沉淀，4 ℃ , 12 000g 离心 5 min，弃上清液。

　　8.3.3.2 重复 8.3.3.1 操作。

　　8.3.3.3 4 ℃ , 12 000g 离心 10 min，小心吸弃上清液，室温干燥 3 min。

　　8.3.3.4 加入 50 μL 无 RNase 超纯水，轻轻混匀，溶解管壁上的 RNA，2 000g 离心 5 s，冰上保存备用。

　　注： 病毒 RNA 可手工提取和纯化，也可使用等效的商品化病毒 RNA 提取纯化试剂盒。病毒 RNA 提取完成后，为延长 RNA 保存时间可选择性的加入 RNase 抑制剂。操作过程中需佩戴一次性橡胶或乳胶手套，并经常更换。提取出来的 RNA 立即进行反应，或保存在 4 ℃小于 8 h，如果长期储存建议-80 ℃保存。

　　8.4 实时荧光 RT‑RAA 扩增

　　8.4.1 实时荧光 RT‑RAA 反应体系

　　实时荧光 RT-RAA 检测的反应体系见表 2。分别对食品样品 RNA 和 10 倍稀释的食品样品 RNA进行检测，各设置 2 个平行反应。

　　表 2 实时荧光 RT‑RAA 反应体系

　　组分名称

　　体积/µL

　　实时荧光 RT-RAA 扩增预混液

　　20

　　20% PEG

　　12.5

　　上游引物(10 µmol/L)

　　2.0

　　下游引物(10 µmol/L)

　　2.0

　　4

　　SN/T 5872—2025

　　表 2 实时荧光 RT-RAA 反应体系(续)

　　组分名称

　　体积/µL

　　探针(10 µmol/L)

　　0.6

　　RNA 模板

　　5.0

　　无 RNase 超纯水

　　5.4

　　乙酸镁(280 mmol/L)

　　2.5

　　总量

　　50

　　注 1：将除乙酸镁和模板 RNA 以外的所有成分涡旋混匀，短暂离心，打开反应单元，向每个反应单元的管盖上加入

　　2.5 μL 乙酸镁，然后向各反应单元加入模板 RNA，充分混匀并离心。

　　注 2：也能使用等效的商品化实时荧光 RT-RAA 试剂盒按照其说明书进行检测。

　　8.4.2 反应程序

　　8.4.2.1 可选用恒温荧光检测仪或实时荧光 PCR 仪之一进行检测 ，反应程序分别按 8.4.2.2 和 8.4.2.3设置。

　　8.4.2.2 恒温荧光检测仪：39 ℃ , 30 s;39 ℃ , 20 min。第二阶段开始收集荧光。

　　8.4.2.3 实时荧光 PCR 仪：39 ℃ , 30 s，1 个循环;39 ℃ , 30 s，40 个循环，并收集荧光。

　　注：使用两种仪器时反应体系均按 8.4.1 配制。如选用恒温荧光检测仪，按第 9 章进行质量控制和扩增结果判定;如选用实时荧光 PCR 仪，按第 10 章进行质量控制和扩增结果判定。

　　8.5 试验对照

　　8.5.1 空白对照

　　以无 RNase 超纯水作为空白对照。

　　8.5.2 阴性对照

　　以不含有诺如病毒的贝类提取的 RNA，作为诺如病毒检测的阴性对照;以不含有甲肝病毒的贝类提取的 RNA，作为甲肝病毒检测的阴性对照。

　　8.5.3 阳性对照

　　以 诺 如 病 毒 RNA 或 含 有 GⅠ 型 和 GⅡ 型 诺 如 病 毒 检 测 目 的 片 段 的 RNA 作 为 诺 如 病 毒 检 测 的阳 性 对 照 ;以 甲 肝 病 毒 RNA 或 含 有 甲 肝 病 毒 检 测 目 的 片 段 的 RNA 作 为 甲 肝 病 毒 检 测 的 阳 性对照 。

　　8.5.4 过程控制物质

　　8.5.4.1 以含过程控制物质(MS2)样品 RNA 的检测结果评估检测过程的有效性。

　　8.5.4.2 按 8.4 的实时荧光 RT-RAA 反应体系和参数，加入过程控制物质(MS2)引物探针，检测含过程控制物质(MS2)的样品 RNA 。

　　8.5.4.3 将过程控制物质(MS2)按 8.3 步骤提取和纯化 RNA，作为阳性对照。以无 RNase 超纯水作为空白对照。

　　5

　　SN/T 5872—2025

　　9 恒温荧光检测仪质量控制和扩增结果判定

　　9.1 质量控制

　　以下条件均满足时，试验结果有效。

　　——空白对照：无扩增曲线，相应的无报告 T 值(时间)。

　　——阴性对照：无扩增曲线，相应的无报告 T 值(时间)。

　　——阳性对照：有典型的扩增曲线，相应的 T 值(时间)≤15min。

　　——过程控制物质：有典型的扩增曲线，相应的 T 值(时间)≤15min。

　　9.2 结果判定

　　9.2.1 如 T 值(时间)≤15 min，则判定扩增结果为阳性。

　　9.2.2 如 15 min

　　9.2.3 如无报告 T 值(时间)或无扩增曲线，则判定扩增结果为阴性。

　　9.2.4 食品样品 RNA 和 10 倍稀释的食品样品 RNA 的检测结果，只要其中一个结果为阳性，则判定样品扩增结果为阳性。

　　10 实时荧光 PCR 仪质量控制和扩增结果判定

　　10.1 质量控制

　　以下条件均满足时，试验结果有效。

　　——空白对照：无扩增曲线，相应的无报告 Ct 值。

　　——阴性对照：无扩增曲线，相应的无报告 Ct 值。

　　——阳性对照：有典型的扩增曲线，相应的 Ct 值≤30.0。

　　——过程控制物质：有典型的扩增曲线，相应的 Ct 值≤30.0。

　　10.2 结果判定

　　10.2.1 如 Ct 值≤35.0，则判定扩增结果为阳性。

　　10.2.2 如 35.0

　　10.2.3 如无报告 Ct 值或无扩增曲线，则判定扩增结果为阴性。

　　10.2.4 食品样品 RNA 和 10 倍稀释的食品样品 RNA 的检测结果，只要其中一个结果为阳性，则判定样品扩增结果为阳性。

　　11 结果报告

　　11.1 样品扩增结果阳性，报告“ ×× g(或×× cm2)样品检出诺如病毒基因或检出甲肝病毒基因”。

　　11.2 样品扩增结果阴性，报告“ ×× g(或×× cm2)样品未检出诺如病毒基因或未检出甲肝病毒基因”。

　　6

　　SN/T 5872—2025

　　12 生物安全和防污染措施

　　为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测，所有培养物和废弃物应按照 GB 19489中的有关规定执行。

　　防污染措施应符合 GB/T 27403 的规定。

　　7

　　SN/T 5872—2025

　　附 录 A (规范性)溶液的配制

　　A.1 RNase 的去除

　　A. 1.1 配制溶液用的酒精、异丙醇等应采用未开封的新品。配制溶液所用的超纯水、玻璃容器、移液器吸嘴、药匙等用具应无 RNase。操作过程中应自始自终佩戴抛弃式橡胶或乳胶手套，并经常更换，以避免将皮肤上的细菌、真菌及人体自身分泌的 RNase 污染用具或带入溶液。

　　A.1.2 玻璃容器应在 240 ℃烘烤 4 h 以去除 RNase。

　　A. 1.3 离心管、移液器吸嘴、药匙等塑料用具使用 DEPC 水(0.1%，体积分数)室温浸泡过夜，然后灭菌，烘干;或直接购买无 RNase 的相应用具。

　　A.2 溶液的配制

　　A.2.1 无 RNase 超纯水

　　超纯水 100 mL

　　焦炭酸二乙酯(DEPC) 50 μL

　　室温过夜，121 ℃ , 15 min 灭菌，或直接购买无 RNA 酶超纯水。

　　A.2.2 Trizol 试剂

　　异硫氰酸胍

　　250 g

　　0.75 mol/L 柠檬酸钠溶液(pH≥7)

　　17.6 mL

　　10% 十二烷基肌氨酸钠(Sarcosy)溶液

　　26.4 mL

　　2 mol/L NaAc 溶液(pH≥4)

　　50 mL

　　无 RNase 超纯水

　　293 mL

　　重蒸苯酚

　　500 mL

　　在 2 000 mL 的烧杯中加入无 RNase 超纯水，然后依次异硫氰酸胍、柠檬酸钠溶液、十二烷基肌氨酸钠溶液、NaAc 溶液，混合均匀;加入重蒸苯酚 ,混合均匀。 Trizol 试剂需 4 ℃低温保存，保质期约一年。也可使用商业化的试剂。

　　A.2.3 75% 乙醇

　　无水乙醇 7.5 mL

　　无 RNase 超纯水 2.5 mL

　　现配现用。

　　8

　　SN/T 5872—2025

　　附 录 B

　　(规范性)

　　过程控制物质的制备

　　B.1 概要

　　本文件使用 MS2 噬菌体作为过程控制物质，也可使用其他等效，不与 NV 和 HAV 交叉反应的病毒作为过程控制物质。 MS2 噬菌体为正义单链 RNA 病毒，基因组含有3 569 个核苷酸。 MS2 噬菌体能够感染 F+(雄株)大肠杆菌埃希氏菌属，具有可培养和纯化，抗 Dnase 或 Rnase消化等特点，并可通过计数噬菌斑的方式，确定其效价水平。也可使用商业化 MS2 噬菌体试剂或试剂盒中的过程控制物质。

　　B.2 试剂和仪器

　　B.2.1 MS2 噬菌体(ATCC15597-B1)。

　　B.2.2 埃希氏大肠杆菌(ATCC15597)：埃希氏大肠杆菌(ATCC15597)是 MS2 菌体(ATCC15597-B1)

　　的宿主菌，推荐使用营养肉汤和营养琼脂进行复苏、分离纯化和增殖。

　　B.2.3 培养基：

　　a) 底层营养琼脂：普通营养琼脂;

　　b) 上 层 营 养 琼 脂 ：胰 蛋 白 胨 10 g，NaCl 5.0 g，葡 萄 糖 1.0 g，琼 脂 粉 6.0 g，2.5 mol/L CaCl2 储 备 液

　　10 mL，蒸馏水 1 000 mL，调节 pH 至7.2。

　　B.2.4 试剂及仪器：生物安全柜、恒温培养箱等。

　　B.3 MS2 噬菌体培养及效价测定

　　B.3.1 MS2 噬菌体的扩增培养

　　埃希氏大肠杆菌(ATCC15597)冻干粉接种于 5.0 mL 营养肉汤，37 ℃培养 18 h~24 h，划线接种于普通 营 养 琼 脂 平 板 ，37℃ 培 养 18 h~24 h，挑 取 单 个 菌 落 划 线 接 种 于 普 通 营 养 琼 脂 平 面 ，37 ℃ 培 养 18 h~ 24 h，再挑取单个菌落接种于 5.0 mL 营养肉汤，37 ℃ 培养18 h~24 h 备用。采用双层琼脂培养方法，将0.4 mL 埃希氏大肠杆菌(ATCC15597)悬液与 0.1 mL MS2 噬菌体溶液混匀，37 ℃孵育5 min，加入 4 mL冷却至 50 ℃左右的上层营养琼脂，混匀后倒入已铺好的下层营养琼脂上铺平，上层营养琼脂凝固，37 ℃倒置培养 17 h~24 h 后观察噬菌斑。刮下上层琼脂，捣碎加入5.0 mL PBS 转入无菌离心管，加数滴三氯甲烷，37 ℃ , 220 r/min 孵育 1 h，5 000 r/min，离心 15 min，上清液即为 MS2 噬菌体悬液。重复以上方法，实现 MS2 噬菌体大量增殖，经 0.22 μm 的滤膜过滤后，分装为1 mL/支，-80 ℃保存。

　　B.3.2 噬菌体效价测定

　　10 倍梯度稀释 MS2 噬菌体悬液，各稀释度接种 3 个平板，按 B.3.1 双层琼脂培养方法培养 17 h~24 h,取噬菌斑数在 30 个~300 个之间的平板计算 MS2 噬菌体效价：效价 = 平均 PFU 数÷接种体积(mL)× 稀释倍数。

　　9

　　SN/T 5872—2025

　　附 录 C (资料性)扩增序列

　　C.1 G Ⅰ 型 NV扩增序列(GenBank 登录号：MZ 022025. 1)

　　5 ’‑CTATCAGAAGTCACTGGCTTAGCCCCTGATGTAATACAATCACAAT CTTATTTCT CATTTTATGGTGATGATGAGATAGTCTCAACAGATATT GAATTTGACCCAAACCGGTTA

　　ACACAAGTTCTAAGAGAGTATGGCTCAAAATCCAC‑3 ’

　　C.2 GⅡ型 NV扩增序列(GenBank 登录号：MW 686657. 1)

　　5 ’‑CCAGACAAGAGCCAATGTTCAGATGGATGAGATTCTCAGATCTGAGCACGTGGGA GGGCGATCGCAATCTGGCTCCCAGTTTTGTGAATGAAGATGGCGTCGAGTGACGCCAACC CATCTGATGGGTCCGCAGCCAACCTCGTCCCAGAGGTCAACAATG‑3 ’

　　C.3 HAV 扩增序列(GenBank 登录号：AM 910900. 1)

　　5 ’‑ATTAGCATGGAGCTGTAGGAGTCTAAATTGGGGACACAGATGTTTGGGACGTCAC CTTGCAGTGTTAACTTGGCTTTCATGAATCTCTTTGATCTTCCACAAGGGGTAGGCTAC GGGTG‑3 ’

　　C.4 MS2 扩增序列(GenBank 登录号：JF719743. 1)

　　5 ’‑CAGGTGGTTGGAGTTGCAGTTCGGTTGGTTACCACTAATGAGTGATATCCAGGGT GCATATGAGATGCTTACGAAGGTTCACCTTCAAGAGTTTCTTCCTATGAGAGCCGTACG TCAG‑3 ’

　　注：阴影部分为引物结合区域，加下划线部分为探针结合区域。

　　10