资料介绍
ICS 67. 050 CCS X 04
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 5879—2025
食品中二氢槲皮素的测定
Determination of dihydroquercetin in foods
2025‑12 ‑ 11 发布 2026‑07‑01 实施
中华人民共和国海关总署 发 布
SN/T 5879—2025
前 言
本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国汕头海关、中华人民共和国杭州海关、中华人民共和国成都海关、中华人民共和国广州海关、中华人民共和国江门海关、北京中认检测技术服务有限公司。
本文件主要起草人：陆奕娜、张林田、黄超群、刘俊、段建发、李冠斯、周广彪、陈建伟、侯建波、徐娟、程铁辕、蒋小良、杨少微、林文。
Ⅰ
SN/T 5879—2025
食品中二氢槲皮素的测定
1 范围
本文件描述了食品中二氢槲皮素的测定方法。本文件第一法为液相色谱法，第二法为液相色谱- 串联质谱法。
本文件适用于饮料、发酵乳、可可制品、巧克力和巧克力制品、牛奶、奶粉、芝士、肉制品及食用动物油等食品中二氢槲皮素的测定，其他食品可参照执行。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
第一法 液相色谱法
4 原理
试样中的二氢槲皮素经乙腈提取，高脂肪样品经正己烷脱脂、含蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用亲水亲脂平衡固相萃取柱净化，液相色谱仪进行测定，外标法定量。
5 试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 乙腈(CH3CN)。
5.1.2 乙酸(CH3COOH)。
5.1.3 正己烷(C6H14)。
5.1.4 甲醇(CH3OH)。
5.1.5 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6]：分析纯。
5.1.6 乙酸锌[(CH3COO)2Zn]：分析纯。
5.2 试剂配制
5.2.1 1% 乙酸溶液：取 10 mL 乙酸，用水定容至 1 000 mL 。
1
SN/T 5879—2025
5.2.2 乙腈饱和正己烷：量取正己烷 200 mL 于 250 mL 分液漏斗中，加入适量乙腈后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去下层乙腈层。
5.2.3 150 g/L 亚铁氰化钾溶液：称取 15 g 亚铁氰化钾，加水溶解定容至 100 mL 。
5.2.4 300 g/L 乙酸锌溶液：称取 30 g 乙酸锌，加水溶解定容至 100 mL 。
5.3 标准品
二氢槲皮素(C15H12O7，CAS 号：480-18-2)，纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
5.4 标准溶液配制
5.4.1 标准储备溶液(100 μg/mL)：准确称取适量二氢槲皮素标准品(精确到 0.000 1 g)，加入适量甲醇溶解，转移至 100 mL 容量瓶，用甲醇定容至刻度，混均，配制成 100 μg/mL 标准储备溶液，-18 ℃以下避光保存，保存期 6 个月。
5.4.2 标准中间溶液(10 μg/mL)：准确吸取 1.0 mL 标准储备溶液(5.4.1)于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混均，配制成质量浓度为 10 μg/mL 的标准中间溶液，保存期 3 个月。
5.4.3 标准系列溶液：准确吸取适量二氢槲皮素标准中间溶液(5.4.2)，用甲醇配得质量浓度为 0 μg/mL、 0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL 标准系列溶液，现用现配。
5.5 材料
5.5.1 固相萃取柱：N-乙烯吡咯烷酮和二乙烯基苯共聚物填料，HLB，500 mg/6 mL 或等效柱。
5.5.2 微孔滤膜：0.45 μm 。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱仪：带二极管阵列检测器或紫外检测器。
6.2 涡旋振荡器：转速≥3 000 r/min。
6.3 超声波振荡仪。
6.4 组织捣碎机。
6.5 高速离心机：转速≥4 000 r/min。
6.6 固相萃取装置。
6.7 分析天平：感量 0.001 g 及 0.000 1 g。
7 分析步骤
7.1 试样制备
7.1.1 固体样品
可可制品、巧克力、巧克力制品、奶酪及食用动物油，取可食部分，必要时经组织捣碎机粉碎均匀， 0 ℃~8 ℃冷藏保存;肉制品，取可食部分，用组织捣碎机将肉绞碎均匀，-18 ℃以下冷冻保存。
7.1.2 半固态样品
发酵乳等半固态样品搅拌均匀，0 ℃~8 ℃冷藏保存。
2
SN/T 5879—2025
7.1.3 液态样品
饮 料 、牛 奶 、食 用 植 物 油 等 液 态 样 品 摇 匀 ，含 二 氧 化 碳 饮 料 超 声 去 除 二 氧 化 碳 ，0 ℃ ~8 ℃ 冷 藏保存。
7.2 提取
7.2.1 乳制品、饮料等含蛋白样品
发酵乳、牛奶、饮料等半固体或液状试样称取 5.0 g(精确到 0.001 g)或量取 5 mL;奶粉等固体试样称取 2.0 g(精确到 0.001 g)，加入 5 mL 热水溶解均匀;奶酪样品称取 2.0 g(精确到 0.001 g)，加入 5 mL 热水涡旋至稠状。加入 15 mL 乙腈(5.1.1)，涡旋混匀后超声提取 15 min，加入亚铁氰化钾溶液(5.2.3)及乙酸锌溶液(5.2.4)各 0.5 mL，涡旋混匀后 4 000 r/min 离心 3 min，移取乙腈层;再加入 10 mL 乙腈(5.1.1)，重复提取 1 次，合并乙腈层提取液，用去离子水定容至 25 mL。取 1 mL 提取液，用去离子水定容至 10 mL，待净化。
7.2.2 可可制品、巧克力、巧克力制品、食用动植物油及肉制品等高脂肪样品
可可制品、巧克力和巧克力制品及食用动植物油等称取 2.0 g(精确到 0.001 g);肉制品称取 2.0 g(精确到 0.001 g)，加入 5 mL 热水涡旋至稠状。加入 10 mL 乙腈饱和正己烷(5.2.2)涡旋混匀，加入 10 mL乙腈(5.1.1)，涡旋混匀后超声提取 15 min，加入亚铁氰化钾溶液(5.2.3)及乙酸锌溶液(5.2.4)各 0.5 mL，涡旋混匀后 4 000 r/min 离心 3 min，转移乙腈层;再加入 10 mL 乙腈(5.1.1)，重复提取 1 次，合并乙腈层提取液，用去离子水定容至 25 mL。取 1 mL 提取液，用去离子水定容至 10 mL，待净化。
7.2.3 不含蛋白饮料
量取饮料 5 mL，加入 10 mL 乙腈(5.1.1)，涡旋混匀后超声提取 15 min，4 000 r/min 离心 3 min，移取乙腈层;再加入 10 mL 乙腈(5.1.1)，重复提取 1 次，合并乙腈层提取液，用去离子水定容至 25 mL。取 1 mL提取液，用去离子水定容至 10 mL，待净化。
7.3 净化
7.3.1 柱活化：依次加入 3 mL 甲醇、3 mL 去离子水进行活化。
7.3.2 净化：10 mL 样液上柱，用少量去离子水润洗离心管，一并转移上柱，弃去流出液;用 3 mL 去离子水冲洗柱子，弃去流出液;用 5 mL 甲醇洗脱，收集流出液，并用甲醇定容至 5 mL，过 0.45 μm 微孔滤膜，待测。
7.4 测定
7.4.1 液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a) 色谱柱：C18 柱，柱长 150 mm，内径 4.6 mm，粒度 5 μm，或等效柱;
b) 流动相：甲醇-1%乙酸溶液(40∶60)(体积比)，等度洗脱;
c) 流速：1.0 mL/min;
d) 检测波长：290 nm;
e) 进样量：10 μL;
f) 柱温：35 ℃ 。
3
SN/T 5879—2025
7.4.2 标准曲线的制作
将二氢槲皮素标准系列溶液按浓度从低到高依次注入液相色谱仪，得到相应的峰面积。以标准系列溶液的浓度为横坐标，以相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。二氢槲皮素标准溶液的液相色谱图见附录 A 中图 A.1。
7.4.3 试样溶液的测定
将待测试样溶液注入液相色谱仪，得到相应的峰面积。由标准曲线得到试样溶液中二氢槲皮素的质量浓度。
8 分析结果的表述
试样中二氢槲皮素含量按式(1)计算：
C × V × 1 000
m × 1 000
X= ×f ……………………………( 1 )
式中：
X ———试样中二氢槲皮素的含量，单位为毫克每千克或毫克每升(mg/kg 或 mg/L);
C ———试样溶液中二氢槲皮素的质量浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);
V ———试样测定液最终定容体积，单位为毫升(mL);
ƒ ———稀释系数;
m ———试样称取质量或吸取体积，单位为克或毫升(g 或 mL);
1 000———换算系数。
注：以两次测得结果平均值为测定结果，结果保留 3 位有效数字。
9 回收率和精密度
见附录 B 中表 B.1。
10 检出限和定量限
牛奶、发酵乳、饮料中二氢槲皮素的检出限为 0.5 mg/kg(或 mg/L)，定量限为 2 mg/kg(或 mg/L);奶粉、可可制品、巧克力和巧克力制品、芝士、肉制品、食用动植物油中二氢槲皮素的检出限为 1 mg/kg，定量限为 5 mg/kg。
第二法 液相色谱-串联质谱法
11 原理
试样中的二氢槲皮素经乙腈提取，高脂肪样品经正己烷脱脂、含蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用亲水亲脂平衡固相萃取柱净化，液相色谱- 串联质谱仪进行测定，外标法定量。
12 试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
4
SN/T 5879—2025
12.1 试剂
12.1.1 乙腈(CH3CN)。
12.1.2 正己烷(CH3COOH)。
12.1.3 甲醇(CH3OH)。
12.1.4 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6]：分析纯。
12.1.5 乙酸锌[(CH3COO)2Zn]：分析纯。
12.2 试剂配制
12.2.1 乙腈饱和正己烷：同 5.2.2。
12.2.2 150 g/L 亚铁氰化钾溶液：同 5.2.3。
12.2.3 300 g/L 乙酸锌溶液：同 5.2.4。
12.3 标准品同 5.3。
12.4 标准溶液配制
12.4.1 标准储备溶液(100 μg/mL)：同 5.4.1。
12.4.2 标 准 中 间 溶 液( 1 000 μg/L)：取 二 氢 槲 皮 素 标 准 储 备 溶 液(12.4.1)，用 甲 醇 配 制 成 质 量 浓 度 为
1 000 μg/L 标准中间溶液，保存期 3 个月。
12.4.3 标准系列溶液：准确移取适量的标准中间溶液(12.4.2)，用甲醇配得质量浓度为 0 μg/L、5.0 μg/L、 10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L、100 μg/L 标准系列溶液，现用现配。
12.5 材料
12.5.1 固相萃取柱：同 5.5.1。
12.5.2 微孔滤膜：0.22 μm，聚四氟乙烯(PTFE)或其他等效膜。
13 仪器和设备
13.1 液相色谱-质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI)。
13.2 涡旋振荡器：同 6.2。
13.3 超声波振荡仪。
13.4 组织捣碎机。
13.5 高速离心机：同 6.5。
13.6 固相萃取装置。
13.7 分析天平：同 6.7。
14 分析步骤
14.1 试样制备
同 7.1。
5
SN/T 5879—2025
14.2 提取及净化
按照 7.2 提取，按照 7.3 净化，过 0.22 μm 滤膜，待测。
注：样品含量较高时，将洗脱液用甲醇稀释 10 倍后上机检测。
14.3 测定
14.3.1 液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a) 色谱柱：C18，柱长 50 mm，内径 2.1 mm，粒径 2.0 μm，或等效柱;
b) 流速：0.25 mL/min;
c) 进样量：10 μL;
d) 柱温：38 ℃ ;
e) 流动相：A 为水，B 为甲醇，梯度洗脱程序见表1。
表 1 梯度洗脱程序
时间/min
A 水(体积分数)/%
B 甲醇(体积分数)/%
0
98
2
0.5
98
2
1
10
90
4
10
90
4.5
98
2
5
98
2
14.3.2 质谱参考条件
见附录 C 。
14.3.3 定性测定
在同样试验条件下，试样溶液与基质标准系列溶液中二氢槲皮素的保留时间相对应，误差为±0.1min，对于保留时间低于 2 min 的色谱，保留时间的相对标准偏差在 ±5% 以内。根据表 2 选择的定性离子对，且检测到的离子相对丰度，应当与质量浓度相当的基质标准溶液离子相对丰度一致。其最大允许偏差应符合表 2 的要求。
表 2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/%
>50
20~50
10~20
≤10
最大允许偏差/%
±20
±25
±30
±50
14.3.4 标准曲线的制作
按质量浓度由小到大的顺序，依次分析标准系列溶液，得到相应的峰面积。以标准系列溶液的质量浓度为横坐标，以相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。二氢槲皮素标准溶液的液相色谱-质谱图见附
6
SN/T 5879—2025
录 A 中图 A.2。
14.3.5 定量测定
将试样溶液注入液相色谱- 串联质谱仪中，得到相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶液中二氢槲皮素的质量浓度。
15 分析结果的表述
试样中二氢槲皮素含量按式(2)计算：
C × V × 1 000
m × 1 000 × 1 000
X= ׃ ……………………………( 2 )
式中：
X ———试样中二氢槲皮素的含量，单位为毫克每千克或毫克每升(mg/kg 或 mg/L);
C ———试样溶液中二氢槲皮素的质量浓度，单位为微克每升(μg/L);
V ———试样测定液最终定容体积，单位为毫升(mL);
ƒ ———稀释倍数;
m ———试样称取质量或吸取体积，单位为克或毫升(g 或 mL);
1 000———换算系数。
注：以两次测得结果平均值为测定结果，结果保留 3 位有效数字。
16 回收率和精密度
见表 B.2。
17 检出限和定量限
牛奶、发酵乳、饮料中二氢槲皮素的检出限为 0.05 mg/kg(或 mg/L)，定量限为 0.2 mg/kg(或 mg/L);奶粉、可可制品、巧克力和巧克力制品、芝士、肉制品、食用动植物油中二氢槲皮素的检出限为 0.2 mg/kg，定量限为 0.5 mg/kg。
7
SN/T 5879—2025
附 录 A
(资料性)
二氢槲皮素标准溶液谱图
A.1 二氢槲皮素标准溶液的液相色谱图见图 A.1。
3.067
mAU
50
40
30
20
10
0
2 4 6 min
图 A.1 二氢槲皮素标准溶液(5 μg/mL)的液相色谱图
A.2 二氢槲皮素标准溶液的液相色谱-质谱图见图A.2。
2.82 100
Relative Abundance
二氢槲皮素 303.0>285.0
50
3.13 3.21
0.65 0.98 1.94 2.68 3.85 4.45 5.45
0
100
2.84
50
0
二氢槲皮素 303.0>125.0
0.66 1.35 1.66 2.57 3.29 3.52 4.63 4.91 5.54
0 1 2 3 4 5
Time/min
图 A.2 二氢槲皮素标准溶液(50 μg/L)的液相色谱-质谱图
8
SN/T 5879—2025
附 录 B
(资料性)
二氢槲皮素回收率试验数据
回收率试验数据见表 B.1~表 B.2。
表 B.1 液相色谱法测定二氢槲皮素的添加回收率试验数据(n = 6)
基质
添加水平
mg/kg 或 mg/L
回收率范围/%
相对标准偏差/%
橙汁
2
84.5~96.5
4.39
10
87.1~98.0
4.54
20
95.0~100.0
1.91
酸奶
2
88.5~99.5
4.93
10
86.3~97.1
4.02
20
97.0~99.0
0.780
巧克力
5
85.2~99.8
5.42
35
95.4~99.1
1.67
70
95.7~99.6
1.45
牛奶
2
82.0~106
9.17
4
72.6~78.4
3.16
20
95.5~100.0
1.86
奶粉
5
82.2~101.0
7.34
10
91.6~103.0
4.36
50
95.4~99.6
1.85
芝士(起司)
5
80.2~96.8
8.30
10
89.2~99.1
4.27
50
95.8~98.2
1.18
牛油
5
82.6~100.0
8.56
10
93.3~99.1
2.27
50
95.0~99.2
1.63
培根
5
81.4~100.0
8.36
10
85.6~98.6
6.05
50
98.2~99.6
1.54
9
SN/T 5879—2025
表 B.2 液相色谱串联质谱法测定二氢槲皮素的添加回收率试验数据(n = 6)
基质
添加水平
mg/kg 或 mg/L
回收率范围/%
相对标准偏差/%
橙汁
0.2
84.5~96.5
10.4
2
87.1~98.0
6.52
20
95.0~100
2.49
酸奶
0.2
75.0~96.0
10.3
2
83.0~96.0
6.52
20
92.0~96.5
2.21
巧克力
0.2
76.2~98.4
9.50
7
84.1~99.4
5.43
70
92.9~99.3
2.69
牛奶
0.2
71.5~96.0
11.5
0.4
80.5~91.3
4.38
2
91.0~99.5
3.76
奶粉
0.5
72.0~98.0
11.3
1
83.3~99.5
7.52
5
90.2~97.0
2.96
芝士(起司)
0.5
72.0~99.0
11.6
1
83.9~98.7
5.82
5
90.8~99.4
3.71
牛油
0.5
72.8~96.6
10.8
1
85.1~98.7
6.40
5
93.6~99.6
2.68
培根
0.5
75.2~91.0
7.65
1
85.5~99.1
6.06
5
91.8~99.2
3.40
10
SN/T 5879—2025
附 录 C
(资料性)
二氢槲皮素质谱参考条件
质谱参考条件：
a) 电离方式：电喷雾电离(ESI-);
b) 扫描方式：负离子扫描;
c) 检测方式：多反应监测(MRM);
d) 离子源温度：350 ℃ ;
e) 喷雾电压：2.8 kV;
f) 鞘气、辅助气均为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气;
g) 定性离子对、定量离子对、透镜电压及碰撞能量等参数见表 C.1。表 C.1 多反应监测条件
中文名称
英文名称
定性离子对(m/≈)
定量离子对(m/≈)
透镜电压/V
碰撞能量/eV
二氢槲皮素
dihydroquercetin
303.0/285.0
303.0/285.0
42
24
303.0/125.0
11
11
