SN/T 5894-2025 禽蛋及制品中对羟基苯甲酸酯类残留量的测定 液相色谱-质谱 质谱法
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- 类 别：检验检疫
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资料介绍
ICS 67. 050 CCS X 04
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 5894—2025
禽蛋及制品中对羟基苯甲酸酯类
残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of p-hydroxybenzoate residues in poultry eggs and products —
LC-MS/MS method
2025-12-11发布 2026-07-01 实施
中华人民共和国海关总署 发 布
SN/T 5894—2025
前 言
本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国福州海关。
本文件主要起草人：陈舒奕、杨方、钟茂生、刘正才、朱品玲、翁才振、林毅、严飞、张悦琳。
Ⅰ
SN/T 5894—2025
禽蛋及制品中对羟基苯甲酸酯类
残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
1 范围
本文件描述了禽蛋及制品中对羟基苯甲酸酯类残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本文件适用于鸡蛋、松花蛋、咸蛋、蛋白粉中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的测定，其他禽蛋及制品参照使用。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。
3 术语与定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法提要
试样经乙腈超声提取，用亚铁氰化钾- 乙酸锌沉淀蛋白质，取上清液供液相色谱-质谱/质谱仪检测，内标法定量。
5 试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇(CH3OH)：色谱纯。
5.1.2 乙腈(CH3CN)：色谱纯。
5.1.3 氯化钠(NaCl)。
5.1.4 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6]。
5.1.5 乙酸锌[(CH3COO)2Zn]。
5.2 试剂配制
5.2.1 亚铁氰化钾溶液(106 g/L)：称取亚铁氰化钾 106 g，加水溶解并定容至 1 000 mL。
1
SN/T 5894—2025
5.2.2 乙酸锌溶液(219 g/L)：称取乙酸锌 219 g，加水溶解并定容至 1 000 mL。
5.3 标准物质
5.3.1 对羟基苯甲酸甲酯标准物质(C8H8O3，CAS 号：99-76-3)：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.3.2 对羟基苯甲酸乙酯标准物质(C9H10O3，CAS 号：120-47-8)：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.3.3 对羟基苯甲酸丙酯标准物质(C10H12O3，CAS 号：94-13-3)：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.3.4 对羟基苯甲酸丁酯标准物质(C11H14O3，CAS 号：94-26-8)：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.3.5 同位素内标物：氘代-对羟基苯甲酸甲酯 D4 标准物质(C8H4D4O3，CAS 号：362049-51-2，纯度≥99%)，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.4 标准溶液配制
5.4.1 对羟基苯甲酸酯类标准储备液(1 000 μg/mL)：分别准确称取适量的对羟基苯甲酸酯类标准物质(精确至 0.1 mg)，用甲醇溶解稀释，配制成质量浓度为 1 000 μg/mL 的标准储备液，混匀，将溶液转移至棕色玻璃容器中，4 ℃下避光保存，有效期 12 个月。
5.4.2 同位素内标物标准储备液(1 000 μg/mL)：准确称取同位素内标物标准物质(精确至 0.1 mg)，用甲醇溶解稀释，配制成质量浓度为 1 000 μg/mL 的同位素内标物标准储备液，混匀，将溶液转移至棕色玻璃容器中，4 ℃下避光保存，有效期 12 个月。
5.4.3 对羟基苯甲酸酯类混合标准中间液(50 μg/mL)：准确吸取适量的对羟基苯甲酸酯类标准储备液(5.4.1)，用甲醇稀释，配制成 50 μg/mL 的混合标准中间液，混匀，将溶液转移至棕色玻璃容器中，4 ℃下避光保存，有效期 6 个月。
5.4.4 同位素内标物标准中间液(50 μg/mL)：准确吸取适量的同位素内标物标准储备液(5.4.2)，用甲醇稀释，配制成 50 μg/mL 的同位素内标物标准中间液，混匀，将溶液转移至棕色玻璃容器中，4 ℃下避光保存，有效期 6 个月。
5.4.5 对羟基苯甲酸酯类混合标准中间工作液(1 μg/mL)：准确吸取适量的对羟基苯甲酸酯类混合标准中间液(5.4.3)，用甲醇稀释，配制成 1 μg/mL 的混合标准中间工作液，混匀，临用时现配。
5.4.6 同位素内标物标准中间工作液(1 μg/mL)：准确吸取适量的同位素内标物标准中间液(5.4.4)，用甲醇稀释，配制成 1 μg/mL 的同位素内标物标准中间工作液，混匀，临用时现配。
5.4.7 标准系列工作液：分别准确吸取对羟基苯甲酸酯类混合标准中间工作液(5.4.5)12.5 μL 、25 μL 、 50 μL、125 μL、250 μL 和 500 μL 于 10 mL 容量瓶中，再分别加入同位素内标物标准中间工作液(5.4.6)
125 μL，用甲醇定容至刻度，摇匀。标准系列工作液中对羟基苯甲酸酯类质量浓度分别为 1.25 ng/mL、2.5 ng/mL 、
5.0 ng/mL 、12.5 ng/mL 、25 ng/mL 、50 ng/mL，同位素内标的质量浓度为 12.5 ng/mL，临用时现配。
5.5 材料
5.5.1 微孔滤膜：0.22 μm 聚四氟乙烯(PTFE)有机滤膜，或相当者。
5.5.2 塑料离心管：50 mL。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱-质谱/质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI)。
2
SN/T 5894—2025
6.2 超声波清洗器。
6.3 组织捣碎机。
6.4 涡旋混合器。
6.5 离心机：最大转速不低于 5 000 r/min。
6.6 分析天平：感量 0.000 1 g 和 0.01 g。
7 试样制备与保存
7.1 试样制备
7.1.1 带壳的禽蛋或蛋制品
选取有代表性的样品约 500 g，去壳后用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器，密封，做好标记。
7.1.2 不带壳的蛋制品
选取有代表性的样品约 500 g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器，密封，做好标记。
7.2 试样保存
将试样按照测试样和留存样分别存放，测试样置于 0 ℃~4 ℃条件下避光保存，留存样置于-20 ℃~ -16 ℃条件下避光保存。
8 测定步骤
8.1 提取和净化
8.1.1 鲜蛋、再制蛋、液蛋制品
称取试样 2.5 g(精确至 0.01 g)，置于 50 mL 离心管中，加入1 g 氯化钠，再加入0.125 mL 的 1 μg/mL同位素内标物标准中间工作液(5.4.6)和 10 mL 乙腈，涡旋混匀，置于30 ℃ 水浴超声提取 10 min，加亚铁氰化钾溶液(5.2.1)1 mL 和乙酸锌溶液(5.2.2)1 mL，混匀，于 5 000 r/min 离心 5 min，取上清液过微孔滤膜(5.5.1)后，供液相色谱-质谱/质谱测定。
8.1.2 干蛋制品
称取试样 2.5 g(精确至 0.01 g)，置于 50 mL 离心管中，加入 2.5 mL~5.0 mL 水，加入 1 g 氯化钠，之后的操作同 8.1.1。
8.2 测定
8.2.1 液相色谱参考条件
8.2.1.1 色谱柱：C18 柱，3.0 mm×100 mm，粒径 1.8 μm，或相当者。
8.2.1.2 流动相：水∶乙腈，梯度洗脱。详见表 1。
表 1 流动相条件
时间/min
流速/(mL/min)
水/%
乙腈/%
0.0
0.30
85
15
3
SN/T 5894—2025
表 1 流动相条件(续)
时间/min
流速/(mL/min)
水/%
乙腈/%
2.0
0.30
85
15
2.1
0.30
40
60
9.0
0.30
40
60
9.1
0.30
85
15
8.2.1.3 进样量：10 μL。
8.2.1.4 柱温：30 ℃ 。
8.2.2 质谱参考条件
8.2.2.1 离子源：电喷雾离子源。
8.2.2.2 扫描方式：负离子扫描。
8.2.2.3 检测方式：多反应监测(MRM)。
8.2.2.4 质谱/质谱参考条件见附录 A。
8.2.3 定性测定
按照上述条件测定样品和标准工作溶液，样品中待测物质的保留时间与标准工作溶液的保留时间偏差在±2.5% 之内;定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 2 规定的范围，则可判定为样品中存在相应的待测物。
表 2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/%
>50
>20~50
>10~20
≤10
最大允许偏差/%
±20
±25
±30
±50
8.2.4 定量测定
取待测试样溶液和相应的标准溶液进行测定，作单点或多点校准，按内标法以色谱峰面积比定量。标准溶液及试样溶液中目标待测组分与内标物的峰面积比均应在仪器测定的线性范围内。对于超出仪器线性范围的，在提取时根据其浓度相应增加内标工作液添加量，使试样溶液稀释后目标待测物浓度在曲线范围之内。标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见附录 B。
8.3 空白试验
除不称取试样外，均按 8.1~8.2 进行。
9 结果计算和表述
试样中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯含量按标准曲线或公式(1)计算。
Xi
4
SN/T 5894—2025
式中：
Xi ——试样中对羟基苯甲酸酯类的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);
Cs ——标准溶液中对羟基苯甲酸酯类的含量，单位为纳克每毫升(ng/mL);
Cis ——试样溶液中对羟基苯甲酸酯类的含量，单位为纳克每毫升(ng/mL); Ai ——试样溶液中对羟基苯甲酸酯类的峰面积;
A'is ——标准溶液中对羟基苯甲酸酯类内标物的峰面积;
V ——试样中提取溶液体积，单位为毫升(mL);
C'is——标准溶液中对羟基苯甲酸酯类内标物的含量，单位为纳克每毫升(ng/mL);
As ——标准溶液中对羟基苯甲酸酯类的峰面积;
Ais ——试样溶液中对羟基苯甲酸酯类内标物的峰面积;
m ——试样质量，单位为克(g)。
按式(2)计算试样中对羟基苯甲酸的含量：
X = ∑Xi ×fi ……………………………( 2 )
式中：
X ——试样中对羟基苯甲酸的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);
Xi——试样中对羟基苯甲酸酯类的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);
fi ——对羟基苯甲酸酯类转换为对羟基苯甲酸的换算系数。
对羟基苯甲酸酯类转换为对羟基苯甲酸的换算系数见附录 C 中表 C.1。
计算结果保留 3 位有效数字。
10 方法灵敏度、准确度
10.1 灵敏度
对羟基苯甲酸甲酯 、对羟基苯甲酸乙酯 、对羟基苯甲酸丙酯 、对羟基苯甲酸丁酯的方法检出限( LOD)均为 0.003 mg/kg，方法定量限(LOQ)均为 0.01 mg/kg。
10.2 准确度
本方法分别以鸡蛋、松花蛋、咸蛋、蛋白粉为空白样品基质进行添加回收试验，测得不同基质的回收率范围在 80%~105%，不同基质添加浓度水平和回收率范围见附录 D 。
5
SN/T 5894—2025
附 录 A (资料性)
参考质谱条件
参考质谱条件1) ：
a) 毛细管电压：4 000 V;
b) 碰撞气：氮气;
c) 碰撞气温度：350 ℃ ;
d) 碰撞气流速：8 L/min;
e) 雾化器压力：45 psi;
f) 其他质谱参数见表 A.1。
表 A.1 主要参考质谱参数
化合物
母离子
子离子
碎裂电压V
碰撞能量eV
对羟基苯甲酸甲酯
151.0
92.1a
88
16
136.0
88
8
对羟基苯甲酸乙酯
165.1
92.1 a
82
20
137.0
82
8
对羟基苯甲酸丙酯
179.1
92.1 a
85
24
136.0
85
12
对羟基苯甲酸丁酯
193.1
92.0 a
85
24
136.0
85
12
氘代-对羟基苯甲酸甲酯 D4
155.1
96.1
88
20
注：质谱条件仅供参考，当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化至最佳。
a 定量离子。
1) 附录 A 所列参考质谱条件是在 Agilent 1260-6410 型液相色谱-质谱/质谱联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器 。
6
SN/T 5894—2025
附 录 B
(资料性)
标准品的多反应监测(MRM)色谱图
对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、氘代-对羟基苯甲酸甲酯 D4 标准溶液多反应监测(MRM)色谱图见图 B.1~图B.5。
7
-MRM(151.0->92.1) -.d
×103 6.064 min
响应值
3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0
5.5 6 6.5
采集时间/min
a)
151.0->92.1,151.0->136.0
×102 Ratio=29.6(106.2% )
1
0.8
相对丰度
0.6
0.4
0.2 - I l
I
0
I I I I
5.5 6 6.5
采集时间/min
b )
图 B.1 对羟基苯甲酸甲酯标准溶液(2.5 ng/mL)多反应监测(MRM)色谱图
-MRM(165.1->92.1) -.d
6.578 min
×103
2
响应值
1.75 1.5
1.25 1
0.75 0.5
0.25 0
6 6.5 7
采集时间/min
a)
165.1->92.1,165.1->137.0
×102
Rati0=44.3(105.0% )
1
相对丰度
0.8
0.6
0.4
0.2
0
6 6.5 7
采集时间/min
b )
图 B.2 对羟基苯甲酸乙酯标准溶液(2.5 ng/mL)多反应监测(MRM)色谱图
179.1->92.1,179.1->136.0
×102 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0
Rati0=23.7(111.7% )
-MRM(179.1->92.1) -.d 7.309 min
响应值
相对丰度
×103 2 1.5 1 0.5 0
6.5 7 7.5 8
8
6.5 7 7.5
采集时间/min
a)
采集时间/min
b )
图 B.3 对羟基苯甲酸丙酯标准溶液(2.5 ng/mL)多反应监测(MRM)色谱图
SN/T 5894—2025
8
-MRM(193.1->92.0) -.d
8.316 min
×103
响应值
1.75 1.5
相对丰度
1.25 1
0.75 0.5
0.25 0
7.5 8 8.5 9
采集时间/min
a)
193.1->92.0,193.1->136.0
Rati0=23.4(116.7% )
×102
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
7.5 8 8.5 9
采集时间/min
b )
图 B.4 对羟基苯甲酸丁酯标准溶液(2.5 ng/mL)多反应监测(MRM)色谱图-MRM(155.1->96.1) -.d
×104
1.4
1.2
响应值
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
6.055 min
5.5 6 6.5采集时间/min
图 B.5 氘代-对羟基苯甲酸甲酯 D4 标准溶液(12.5 ng/mL)多反应监测(MRM)色谱图
SN/T 5894—2025
附 录 C
(资料性)
对羟基苯甲酸酯类转换为对羟基苯甲酸的换算系数
对羟基苯甲酸酯类转换为对羟基苯甲酸的换算系数见表 C.1。
表 C.1 对羟基苯甲酸酯类转换为对羟基苯甲酸的换算系数
序号
对羟基苯甲酸酯类
fi
1
对羟基苯甲酸甲酯
0.907 8
2
对羟基苯甲酸乙酯
0.831 2
3
对羟基苯甲酸丙酯
0.766 5
4
对羟基苯甲酸丁酯
0.711 2
注：fi 为对羟基苯甲酸酯类转换为对羟基苯甲酸的换算系数。
9
SN/T 5894—2025
附 录 D
(资料性)
添加浓度水平和回收率
不同添加浓度水平的回收率实验室验证数据见表 D.1。
表 D.1 不同添加浓度水平的回收率实验室验证数据
基质
添加水平/(mg/kg)
化合物名称
回收率范围/%
相对标准偏差/%
鸡蛋
0.01
对羟基苯甲酸甲酯
98.0~101.2
1.6
对羟基苯甲酸乙酯
80.4~84.8
2.1
对羟基苯甲酸丙酯
81.1~87.4
3.1
对羟基苯甲酸丁酯
80.3~90.7
4.8
0.02
对羟基苯甲酸甲酯
87.4~91.3
1.7
对羟基苯甲酸乙酯
83.4~87.9
1.9
对羟基苯甲酸丙酯
82.3~88.4
3.1
对羟基苯甲酸丁酯
81.2~96.2
6.5
0.10
对羟基苯甲酸甲酯
95.7~99.5
1.6
对羟基苯甲酸乙酯
93.0~96.1
1.2
对羟基苯甲酸丙酯
89.2~101.0
5.4
对羟基苯甲酸丁酯
86.1~101.5
5.9
松花蛋
0.01
对羟基苯甲酸甲酯
95.1~104.5
3.4
对羟基苯甲酸乙酯
92.9~102.6
3.4
对羟基苯甲酸丙酯
80.4~85.0
2.1
对羟基苯甲酸丁酯
84.9~95.1
4.0
0.02
对羟基苯甲酸甲酯
93.4~100.8
3.0
对羟基苯甲酸乙酯
91.2~101.7
4.4
对羟基苯甲酸丙酯
80.9~89.2
3.8
对羟基苯甲酸丁酯
90.0~98.2
3.4
0.10
对羟基苯甲酸甲酯
91.2~102.1
5.0
对羟基苯甲酸乙酯
91.7~102.7
3.8
对羟基苯甲酸丙酯
83.1~97.3
6.1
对羟基苯甲酸丁酯
88.1~102.3
6.0
咸蛋
0.01
对羟基苯甲酸甲酯
96.1~105.0
3.2
对羟基苯甲酸乙酯
95.7~103.9
2.9
对羟基苯甲酸丙酯
90.9~100.0
3.7
对羟基苯甲酸丁酯
88.0~95.1
3.0
10
SN/T 5894—2025
表 D.1 回收率实验室验证数据(续)
基质
添加水平/(mg/kg)
化合物名称
回收率范围/%
相对标准偏差/%
咸蛋
0.02
对羟基苯甲酸甲酯
95.2~104.8
3.9
对羟基苯甲酸乙酯
91.2~103.6
5.4
对羟基苯甲酸丙酯
85.0~97.8
6.4
对羟基苯甲酸丁酯
82.5~92.8
4.6
0.10
对羟基苯甲酸甲酯
96.8~98.8
0.8
对羟基苯甲酸乙酯
91.8~99.5
3.2
对羟基苯甲酸丙酯
82.6~103.2
8.7
对羟基苯甲酸丁酯
82.2~93.1
4.5
蛋白粉
0.01
对羟基苯甲酸甲酯
89.7~94.1
1.8
对羟基苯甲酸乙酯
86.1~104.0
7.7
对羟基苯甲酸丙酯
84.1~103.2
7.8
对羟基苯甲酸丁酯
92.4~102.4
4.1
0.02
对羟基苯甲酸甲酯
82.2~94.2
5.8
对羟基苯甲酸乙酯
89.9~95.9
2.6
对羟基苯甲酸丙酯
88.4~97.7
4.0
对羟基苯甲酸丁酯
93.6~98.1
1.8
0.10
对羟基苯甲酸甲酯
92.2~94.6
0.9
对羟基苯甲酸乙酯
85.6~100.2
6.0
对羟基苯甲酸丙酯
82.3~102.5
9.7
对羟基苯甲酸丁酯
85.4~103.9
8.3
11
