GB/T 34550.3-2017 海水冷却水处理药剂性能评价方法 第3部分：菌藻抑制性能的测定

　　ICS 07 . 060;77 . 060 A 29

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 34550 . 3—2017

　　海水冷却水处理药剂性能评价方法第 3 部分：菌藻抑制性能的测定

　　Methodforevaluationofcoolingseawatertreatmentagents—

　　part3：Determinationofinhibitingmicrobesperformance

　　2017-09-29 发布 2018-01-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　发

　　布

　　GB/T 34550 . 3—20 17

　　GB/T 34550 . 3—20 17

　　前 言

　　GB/T 34550《海水冷却水处理药剂性能评价方法》分为四个部分：

　　— 第 1 部分：缓蚀性能的测定;

　　— 第 2 部分：阻垢性能的测定;

　　— 第 3 部分：菌藻抑制性能的测定;

　　— 第 4 部分：动态模拟试验。

　　本部分为 GB/T 34550 的第 3 部分。

　　本部分按照 GB/T 1 . 1—2009 给出的规则起草。

　　本部分由国家海洋局提出。

　　本部分由全国海洋标准化技术委员会(SAC/TC 283)归口 。

　　本部分起草单位：国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所、浙江国华浙能发电有限公司。

　　本部分主要起草人：李亚红、陈尚兵、赵小芳、张益、周筝、吴彭杰、元昊。

　　GB/T 34550 . 3—20 17

　　海水冷却水处理药剂性能评价方法

　　第 3 部分：菌藻抑制性能的测定

　　1 范围

　　GB/T 34550 的本部分规定了海水冷却水处理药剂菌藻抑制性能的测定方法。

　　本部分适用于海水冷却水处理药剂菌藻抑制性能的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注 日期的引用文件，仅注 日期的版本适用于本文件 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T 12763 . 6—2007 海洋调查规范 第 6 部分：海洋生物调查

　　GB 17378 . 7—2007 海洋监测规范 第 7 部分：近海污染生态调查和生物监测

　　HY/T 176—2014 海水中铁细菌的测定 MPN 法

　　HY/T 177—2014 海水中硫酸盐还原菌的测定 MPN 法

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　海水冷却水处理药剂 coolingseawatertreatmentagent

　　海水冷却水处理过程中所使用的化学品。

　　注：一般包括海水缓蚀剂、阻垢分散剂、菌藻抑制剂等。

　　3.2

　　菌藻抑制剂 microbicide

　　抑制或杀死细菌营养细胞、真菌营养细胞和孢子、单细胞藻类和原生动物的化学品。

　　3.3

　　生物膜 biofilm

　　微生物在冷却系统内部固液界面的固体表面生长繁殖而形成的薄膜。

　　3.4

　　微生物粘泥 microbialbiofouling

　　微生物及其分泌的粘液与其他有机和无机的杂质混合在一起的粘浊物质。

　　3.5

　　陈海水 agedseawater

　　取天然海水避光保存 3 个月以上，使用时取其清液或经 0.45 μm 滤膜过滤的滤液。

　　[GB/T 12763 . 6—2007,定义 6 . 3 . 2 . 1 . 1]

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　　3.6

　　菌落 colony

　　在固体培养基表面或内部由单个微生物细胞或孢子繁殖形成的肉眼可见的细胞群体。

　　3.7

　　菌落形成单位 colony-formingunit;CFU

　　采用平皿计数法测定的菌落数量。

　　4 方法原理

　　向海水冷却水样中，定量投加待测菌藻抑制剂，作用一定时间后，测定水样中的微生物量，并与水样中的初始微生物量进行比较，以确定菌藻抑制剂的最低有效浓度。

　　5 试剂和材料

　　除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和 GB/T 6682 规定的三级水。

　　5 . 1 稀释剂：水、无水乙醇、丙酮、丙二醇或聚乙二醇等。

　　5 . 2 氢氧化钠溶液：40 g/L。

　　5.3 盐酸溶液：1+11。

　　5 . 4 细菌培养基：异养菌培养基选用 2216E 培养基，可按照 GB/T 12763 . 6—2007 的 6 . 3 . 2 . 1 . 3 方法配制;铁细菌培养基按照 HY/T 176—2014 的 7 . 1 方法配制;硫酸盐还原菌培养基按照 HY/T 177—2014的 7 . 2 方法配制。

　　5 . 5 真菌培养基：庆大霉素马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA) ,可按照 GB/T 12763 . 6—2007 的 6 . 3 . 2 . 1 . 5方法配制。

　　5 . 6 藻类培养基：f/2 培养基，配方及配制方法见附录 A。

　　5 . 7 陈海水。

　　5.8 人工海水：将 31.8 g NaCl、7.74 g MgSO4 、6.0 g MgCl2 、1.53 g CaCl2 、0.07 g KCl 和 2.0 g NaHCO3加入到 1 000 mL水中，混匀后备用。

　　5 . 9 无菌稀释水：将陈海水或人工海水，分装到玻璃瓶(6 . 14)或试管(6 . 16) 中，分装体积 99 mL±2 mL或 9 mL±1 mL。经蒸汽压力灭菌器(6.4)在 121 ℃ ± 1 ℃下灭菌 20 min,冷却后备用。

　　5 . 10 菌藻抑制剂：应选择稀释剂(5 . 1)稀释，稀释成浓度为 5 . 0 mg/mL 和 0 . 5 mg/mL 的贮备液，现配现用。

　　5. 1 1 微孔滤膜：醋酸纤维或硝化纤维材质，直径 50 mm,孔径 0.22 μm、0.45 μm 和 0.65 μm。使用前需浸泡于蒸馏水中，经蒸汽压力灭菌器(6 . 4)在 121 ℃ ± 1 ℃下灭菌 20 min,冷却后备用。

　　5. 12 针式过滤器：混合纤维素材质，直径 25 mm,孔径 0.22 μm 和 0.45 μm。

　　5 . 13 医用注射器：聚丙烯塑料或硅硼铝玻璃材质，容量 1 mL~ 100 mL, 与针式过滤器(5 . 12) 配套使用。

　　6 仪器与设备

　　6. 1 天平：称量范围 0~200 g,感量 0.01 g。

　　6 . 2 菌落计数仪。

　　6.3 恒温振荡器：恒温范围(25 ℃ ~70 ℃ ) ±0.2 ℃,振荡频率 50 r/min~220 r/min。

　　6.4 蒸汽压力灭菌器：(110 ℃ ~126 ℃ ) ± 1 ℃。

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　　6.5 电热干燥箱：温度控制范围(50 ℃ ~300 ℃ ) ±2 ℃。

　　6 . 6 磁力搅拌器或电动搅拌器。

　　6 . 7 无菌箱(室)或超净工作台。

　　6.8 恒温培养箱：(20 ℃ ~60 ℃ ) ± 1 ℃。

　　6.9 电热恒温水浴锅：恒温范围(37 ℃ ~100 ℃ ) ± 1 ℃。

　　6 . 10 冰箱 。

　　6 . 1 1 无油真空泵。

　　6. 12 量筒：100 mL、500 mL、1 000 mL。

　　6. 13 烧杯：1 000 mL。

　　6. 14 玻璃瓶：100 mL、250 mL、500 mL,带螺旋盖。经蒸汽压力灭菌器 121 ℃ ± 1 ℃灭菌 20 min 后， 50 ℃ ~60 ℃烘干冷却备用。

　　6. 15 刻度锥形瓶：250 mL、500 mL,配硅胶塞。经蒸汽压力灭菌器 121 ℃ ± 1 ℃灭菌 20 min后，50 ℃ ~ 60 ℃烘干冷却备用。

　　6 . 16 试管：直径 18 mm, 长度 180 mm, 配硅胶塞或试管帽。 经蒸汽压力灭菌器 121 ℃ ± 1 ℃灭菌20 min 后，50 ℃ ~60 ℃烘干冷却备用。

　　6. 17 培养皿：直径 90 mm。经蒸汽压力灭菌器 121 ℃ ± 1 ℃灭菌 20 min 后，50 ℃ ~60 ℃烘干冷却备用。

　　6. 18 刻度吸管或移液器和枪头：20 μL~200 μL、200 μL~1 000 μL、1 mL~10 mL。经蒸汽压力灭菌器 121 ℃ ± 1 ℃灭菌 20 min后，50 ℃ ~60 ℃烘干冷却备用。

　　6 . 19 刮刀：耐高温硅胶。 经蒸汽压力灭菌器 121 ℃ ± 1 ℃灭菌 20 min后，50 ℃ ~60 ℃烘干冷却备用。

　　6 . 20 采样瓶：2 000 mL~5 000 mL广口玻璃瓶或聚丙烯塑料瓶。 经蒸汽压力灭菌器 121 ℃ ± 1 ℃灭菌 20 min后，50 ℃ ~60 ℃烘干冷却备用。

　　6 . 2 1 采样袋：60 mL~ 250 mL 聚乙烯塑料袋，可蒸汽灭菌。 经蒸汽压力灭菌器 121 ℃ ± 1 ℃灭菌20 min 后，50 ℃ ~60 ℃烘干冷却备用。

　　6 . 22 溶剂过滤器：玻璃或 316L 卫生级不锈钢材质，直径 47 mm 过滤基座，300 mL~ 500 mL 滤杯， 1 000 mL~2 000 mL滤瓶，与 50 mm直径微孔滤膜配套使用。 经蒸汽压力灭菌器 121 ℃ ± 1 ℃灭菌 20 min后，50 ℃ ~60 ℃烘干冷却备用。

　　6.23 容量瓶：50 mL、100 mL、250 mL、500 mL、1 000 mL。

　　6 . 24 漩涡混匀器。

　　6 . 25 相差或暗视野显微镜：放大倍数 400~1 000 。

　　6 . 26 试管架。

　　6.27 温度计：(0~100 ℃ ) ±0.1 ℃。

　　6.28 pH 计或精密 pH 试纸：pH 计，(0~14.00 pH) ±0.02 pH;精密 pH 试纸，6.4~8.0。

　　7 采样

　　7 . 1 海水冷却水的采集

　　7 . 1 . 1 采样前应先测定冷却塔集水池的水温和 pH,并做记录。

　　7 . 1 . 2 用采样瓶(6 . 20)直接从单塔海水冷却水系统中选取至少 3 个采样点，或从多塔海水冷却水系统的每个冷却塔相同位置选取至少 1 个采样点，分别采集 2 L~5 L海水冷却水。

　　7 . 1 . 3 在海水冷却水系统停加菌藻抑制剂 4 h后采样，并将采集到的海水冷却水混合，作为样品 A,待测 。若需在停加菌藻抑制剂 4 h 内采样，则在采集海水冷却水后立即加入一种菌藻抑制剂的中和剂(或在采样前向采样瓶中预先加入一种菌藻抑制剂的中和剂)，然后混合，作为样品 A,待测。 中和剂的选择

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　　见附录 B。

　　7 . 1 . 4 在运输中应将样品 A 保存在集水池水温± 5 ℃ 。 如果在采样和实验时样品 A 的 pH 值出现± 1 . 0 的波动，实验水样应被丢弃。 采样后应在 24 h 内开始实验。

　　7 . 2 海水冷却系统生物膜或微生物黏泥的采集

　　7 . 2 . 1 用刮刀(6 . 19)从单塔海水冷却水系统中选取至少 3 个附着菌藻的区域，或从多塔海水冷却水系统的每个冷却塔相同位置选取至少 1 个附着菌藻的区域，分别采集约 100 g~500 g 生物膜或微生物黏泥样，放入采样袋(6 . 21)中混合，作为样品 B,待用。

　　7 . 2 . 2 在运输中应将样品 B保存在集水池水温 ±5 ℃ 。

　　8 试样的制备和分装

　　8 . 1 试样的制备

　　8 . 1 . 1 海水冷却水系统中的异养菌、铁细菌、硫酸盐还原菌、真菌和藻类均可作为评价海水冷却水处理剂菌藻抑制性能的代表菌。 当采用异养菌、铁细菌或硫酸盐还原菌作为评价的代表菌时，试样初始含菌数应达到 105 CFU/mL;当采用真菌或藻类作为评价的代表菌时，试样初始含菌数应达到 103 CFU/ mL。

　　8 . 1 . 2 若样品 A 的初始含菌量满足 8 . 1 . 1 的要求，可直接作为试样 Ⅰ 使用;若样品 A 中的初始含菌量不能满足 8 . 1 . 1 的要求，应按附录 C对样品 A进行增菌培养以获得试样 Ⅰ 。

　　8 . 1 . 3 按 GB 17378 . 7—2007 的 10 . 1 测定样品 A 中异养菌的含量，按 HY/T 176—2014 测定样品 A 中铁细菌的含量，按 HY/T 177—2014 测定样品 A 中硫酸盐还原菌的含量，按 GB/T 12763 . 6—2007 的

　　6 . 3 . 4 . 1 . 2 测定样品 A 中真菌和藻类的含量。

　　8 . 1 . 4 将样品 B在无菌操作下，接种到过滤除菌或蒸汽灭菌的样品 A 中得到试样 Ⅱ 。样品 B在试样 Ⅱ中的接种量不得超过 100 g/L。

　　8 . 2 试样的分装

　　8 . 2 . 1 将试样 Ⅰ 和试样 Ⅱ放在搅拌器(6 . 6)上分别混匀后，再分别定量移取 100 mL±2 mL(或 100 g± 2 g)试样 Ⅰ 和试样 Ⅱ 到 250 mL玻璃瓶(6 . 14)或刻度锥形瓶(6 . 15) 中 。 每一供试菌藻抑制剂浓度都应制备 3 个平行样。 另外制备不加菌藻抑制剂的 3 个平行阴性对照样。

　　8 . 2 . 2 当使用溶剂而不是水来制备菌藻抑制剂的贮备液时，还应制备 3 个平行溶剂对照样，即将不含菌藻抑制剂的溶剂加入到试样 Ⅰ 和试样 Ⅱ 中，溶剂的加入量应与投加菌藻抑制剂时引入的溶剂等量。

　　8 . 2 . 3 试样 Ⅰ 和试样 Ⅱ分装后，应测定阴性对照样的含菌量记为初始含菌量。

　　9 试样的杀菌处理

　　9 . 1 按 1 . 5 min~2 . 0 min 的时间间隔，依次向分装后的试样 Ⅰ 和试样 Ⅱ 中投加菌藻抑制剂贮备液。 每100 mL试样中分别加入 0 . 2 mL、0 . 5 mL 和 1 . 0 mL菌藻抑制剂贮备液(5 . 10),每一菌藻抑制剂浓度均应制备 3 个平行样。

　　9 . 2 将投加菌藻抑制剂后的试样置于转速为 100 r/ min 的恒温振荡器(6 . 3)中混匀 3 min~5 min,恒温振荡器的温度宜设定为采集样品时的集水池水温 ±5 ℃ 。

　　9 . 3 将混匀后的试样置于恒温培养箱(6 . 8) 中，于集水池水温 ±5 ℃下静置培养 3 h±5 min,取样测菌。

　　9 . 4 按 8 . 1 . 3 中所列的测菌方法测定试样含菌量。 测菌前应使用合适的中和剂对试样中的菌藻抑制剂进行灭活处理。

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　　10 结果计算

　　10 . 1 菌藻抑制性能以作用 3 h 时的对数减少值 R 表示，按式(1)计算：

　　R=logA- logB …………………………( 1 )

　　式中：

　　A —空白样的初始微生物量，单位为菌落形成单位每毫升(CFU/mL) ;

　　B —实验水样中的微生物量，单位为菌落形成单位每毫升(CFU/mL)。

　　其中：

　　R= 1 相当于 90%的杀菌率;

　　R= 2 相当于 99%的杀菌率;

　　R= 3 相当于 99 . 9%的杀菌率;

　　R=4 相当于 99 . 99%的杀菌率。

　　10 . 2 阴性和溶 剂 对 照 样 ( 8 . 2 . 1 , 8 . 2 . 2) 的 初 始 微 生 物 量 在 指 定 试 验 时 间 内 的 对 数 减 少 值 若 超 过

　　0.5 log,则本次试验结果应被舍弃，并改变试验条件，重新实验。

　　10 . 3 报告结果取所有平行样的平均值。 如果平行样的计数结果相差超过 1 个数量级，则应重做实验。

　　10 . 4 当 R≥1 时，表明菌藻抑制剂有效，并以达到 R= 1 时的加药浓度作为最低有效浓度。

　　1 1 质量保证与控制

　　1 1 . 1 一般采用海水冷却水样制备试样，但当冷却水样不可得时，可采用陈海水(5 . 8) 或配制人工海水(5 . 9)制备试样。

　　1 1 . 2 采集硫酸盐还原菌时采样瓶内要灌满海水冷却水。

　　1 1 . 3 若试样 Ⅰ 和试样 Ⅱ 的初始细菌数少于 10 5 CFU/mL、初始藻类或真菌数少于 10 3 CFU/ mL 时，应按照 8 . 1,向水样中接种细菌、藻类、真菌或生物膜达到要求。

　　1 1 . 4 菌藻抑制剂称量时，不应使用铝质称重盘，因为铝较活泼，易与菌藻抑制剂发生反应。

　　1 1 . 5 投加菌藻抑制剂时，菌藻抑制剂母液的加入量不得超过试样 Ⅰ 和试样 Ⅱ分装后体积的 1%,特别是在用溶剂而不是用水来制备菌藻抑制剂贮备液时。

　　1 1 . 6 试样 Ⅰ 和试样 Ⅱ经菌藻抑制剂处理后，若 R<1 时，应调整菌藻抑制剂的投加浓度。

　　1 1 . 7 以叶绿素的含量来计量藻生物量时，应确定本底值。

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　　附 录 A

　　(规范性附录)

　　f/2 培养基

　　A.1 贮备液的制备

　　A.1 . 1 微量元素贮备液

　　A.1 . 1 . 1 成分

　　成分如下(每升中的含量)：

　　a) Na2 EDTA 4 160 mg;

　　b) FeCl3 ·6H2 O 3 150 mg;

　　c) CuSO4 ·5H2 O 10 mg;

　　d) ZnSO4 ·7H2 O 22 mg;

　　e) CoCl2 ·6H2 O 10 mg;

　　f) MnCl2 ·4H2 O 180 mg;

　　g) Na2 Mo4 ·2H2 O 6 mg。

　　A.1 . 1 . 2 制法

　　将上述各成分溶于 1 L水中，混匀，制得微量元素贮备液。

　　A.1 . 2 复合维生素贮备液

　　A.1 . 2 . 1 成分

　　成分如下(每升中的含量)：

　　a) 氰钴维生素(维生素 B12) 0 . 5 mg;

　　b ) 硫胺素(维生素 B1) 100 mg;

　　c) 生物素(维生素 H) 0 . 5 mg。

　　A.1 . 2 . 2 制法

　　将上述各成分溶于 1 L水中，混匀，制得复合维生素贮备液。

　　A.2 培养基的制备

　　A.2 . 1 成分

　　成分如下(每升中的含量)：

　　a) NaNO3 75 mg;

　　b) NaH2 PO4 ·2H2 O 5.65 mg;

　　c) 微量元素贮备液 1 . 0 mL;

　　d) 复合维生素贮备液 1 . 0 mL。

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　　A.2 . 2 制法

　　将上述各成分移入 1 L 陈海水(5 . 7)中，混匀。 用氢氧化钠溶液(5 . 2) 或盐酸溶液(5 . 3) 调节培养基的 pH 值至 8 . 0,并分装于刻度锥形瓶(6 . 15)中，用蒸汽压力灭菌器(121 ℃ ± 1 ℃)灭菌 20 min,冷却后备用。

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　　附 录 B

　　(规范性附录)

　　部分菌藻抑制剂的常用中和剂

　　部分菌藻抑制剂的常用中和剂见表 B. 1 。

　　表 B.1 部分菌藻抑制剂的常用中和剂

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　　附 录 C

　　(规范性附录)

　　试样的增菌培养方法

　　C.1 异养菌的增菌培养方法

　　C.1 . 1 配制液体培养基

　　将 5 . 0 g蛋白陈、1 . 0 g酵母膏和 0 . 1 g磷酸高铁加入到 1 000 mL 陈海水(5 . 7)或人工海水(5 . 8) 中，混匀。 用氢氧化钠溶液(5 . 2) 或盐酸溶液(5 . 3) 调节 pH 值至 7 . 6±0 . 2,并分装于刻度锥形瓶(6 . 15) 中 ，于 121 ℃ ± 1 ℃下蒸汽压力灭菌 20 min,冷却后备用。

　　C.1 .2 富集菌种的制备

　　取 1 mL样品 A(7 . 1 . 2),接种到 100 mL液体培养基(C. 1 . 1) 中，在采集样品时的集水池水温 ±5 ℃下培养 48 h~72 h,得到异养菌富集菌种。

　　C.1 .3 试样 Ⅰ 的制备

　　将富集菌种(C. 1 . 2)在无菌操作下，接种到经 0 . 22 μm 滤膜过滤除菌或 121 ℃ ± 1 ℃下蒸汽灭菌20 min 的样品 A 中，得到试样 Ⅰ 。 富集菌种在试样 Ⅰ 中的接种量不得超过 100 mL/L,且接种后的试样 Ⅰ 中异养菌的含菌量控制在 10 5 CFU/mL数量级。

　　C.2 铁细菌的增菌培养方法

　　C.2. 1 配制浓缩培养基

　　按照 HY/T 176—2014 的 7 . 1 方法配制 1 . 5 倍浓缩液体培养基，于 110 ℃ ± 1 ℃下蒸汽压力灭菌30 min,冷却后备用。

　　C.2.2 富集菌种的制备

　　取 33 mL样品 A(7 . 1 . 2),接种到 67 mL液体培养基(C. 2 . 1) 中，在采集样品时的集水池水温 ±5 ℃下培养 48 h~72 h,得到铁细菌富集菌种。

　　C.2.3 试样 Ⅰ 的制备

　　将富集菌种(C. 2 . 2)在无菌操作下，接种到经 0 . 22 μm 滤膜过滤除菌或 121 ℃ ± 1 ℃下蒸汽灭菌20 min 的样品 A 中，得到试样 Ⅰ 。 富集菌种在试样 Ⅰ 中的接种量不得超过 100 mL/L,且接种后的试样 Ⅰ 中铁细菌的含菌量控制在 10 5 CFU/mL数量级。

　　C.3 硫酸盐还原菌的增菌培养方法

　　C.3. 1 配制浓缩培养基

　　按照 HY/T 177—2014 的 7 . 2 方法配制 1 . 5 倍浓缩液体培养基，于 110 ℃ ± 1 ℃下蒸汽压力灭菌30 min,冷却后备用。

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　　C.3.2 富集菌种的制备

　　取 33 mL样品 A(7 . 1 . 2),接种到 67 mL液体培养基(C. 3 . 1) 中，在采集样品时的集水池水温 ±5 ℃下培养 48 h~72 h,得到硫酸盐还原菌富集菌种。

　　C.3.3 试样 Ⅰ 的制备

　　将富集菌种(C. 3 . 2)在无菌操作下，接种到经 0 . 22 μm 滤膜过滤除菌或 121 ℃ ± 1 ℃下蒸汽灭菌20 min 的样品 A 中，得到试样 Ⅰ 。 富集菌种在试样 Ⅰ 中的接种量不得超过 100 mL/L,且接种后的试样 Ⅰ 中硫酸盐还原菌的含菌量控制在 10 5 CFU/mL数量级。

　　C.4 真菌的增菌培养方法

　　C.4. 1 配制液体培养基

　　按照 GB/T 12763 . 6—2007 的 6 . 3 . 2 . 1 . 5 方法配制庆大霉素马铃薯葡萄糖液体培养基。

　　C.4.2 富集菌种的制备

　　取 1 mL样品 A(7 . 1 . 2),接种到 100 mL液体培养基(C. 4 . 1) 中，在采集样品时的集水池水温 ±5 ℃下培养 48 h~72 h,得到真菌富集菌种。

　　C.4.3 试样 Ⅰ 的制备

　　将富集菌种(C. 4 . 2)在无菌操作下，接种到经 0 . 22 μm 滤膜过滤除菌或 121 ℃ ± 1 ℃下蒸汽灭菌20 min 的样品 A 中，得到试样 Ⅰ 。 富集菌种在试样 Ⅰ 中的接种量不得超过 100 mL/L,且接种后的试样 Ⅰ 中真菌的含菌量控制在 10 3 CFU/mL数量级。

　　C.5 藻类的增殖培养方法

　　C.5. 1 配制浓缩培养基

　　按照附录 A配制 1 . 5 倍浓缩 f/ 2 培养基。

　　C.5.2 富集菌种的制备

　　取 33 mL样品 A(7 . 1 . 2),接种到 67 mL浓缩培养基(C. 5 . 1) 中，在采集样品时的集水池水温 ±5 ℃下培养 48 h~72 h,得到藻类富集菌种。

　　C.5.3 试样 Ⅰ 的制备

　　将富集菌种(C. 5 . 2)在无菌操作下，接种到经 0 . 22 μm 滤膜过滤除菌或 121 ℃ ± 1 ℃下蒸汽灭菌20 min 的样品 A 中，得到试样 Ⅰ 。 富集菌种在试样 Ⅰ 中的接种量不得超过 100 mL/L,且接种后的试样 Ⅰ 中藻类的含菌量控制在 10 3 CFU/mL数量级。

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　　参 考 文 献

　　[1] ASTM E645-07 Standard Test Method forEfficacy of Microbicides Used in Cooling Water

　　Systems