GB/T 39665-2020 含植物提取物类化妆品中55种禁用农药残留量的测定

　　ICS 7 1 . 100 . 70 CCS Y 42

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 39665—2020

　　含植物提取物类化妆品中

　　55 种禁用农药残留量的测定

　　Determinationof55 bannedpesticidesresiduesincosmeticscontainingplantextracts

　　2020-12-14 发布 2021-07-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　发

　　布

　　GB/T 39665—2020

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　本文件由全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会(SAC/TC 374)提出并归口 。

　　本文件起草单位：上海市质量监督检验技术研究院、中检华纳(北京)质量技术中心有限公司、通标标准技术服务(上海)有限公司、华纳通标(北京)认证有限公司、御家汇股份有限公司、无限极(中国)有限公司、欧诗漫生物股份有限公司、广东丸美生物技术股份有限公司、广州锦同生物科技有限公司、东莞市容大生物科技有限公司、谱尼测试集团股份有限公司。

　　本文件主要起草人：葛宇、郁琼花、杨晋青、胡守江、顾宇翔、孟杰、聂磊、张玉柱、吕庆、李想、戴跃锋、孙红梅、周示玉、孙怀庆、孔令超、杨平顺、宋薇、郑存哲。

　　GB/T 39665—2020

　　含植物提取物类化妆品中

　　55 种禁用农药残留量的测定

　　1 范围

　　本文件规定了含植物提取物类化妆品中 55 种禁用农药残留量的液相色谱-串联质谱(20 种)和气相色谱-质谱(35 种)测定方法。

　　本文件适用于含植物提取物的化妆水、乳液、膏霜和面膜类化妆品。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注 日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 原理

　　试样经乙腈涡旋振荡，超声提取，用凝胶渗透色谱净化，采用液相色谱-串联质谱仪和气相色谱-质谱仪测定，外标法定量。

　　5 试剂和材料

　　除非另有规定，仅使用色谱纯试剂。

　　5 . 1 水，GB/T 6682,一级 。

　　5 . 2 乙腈 。

　　5 . 3 丙酮 。

　　5 . 4 环己烷。

　　5 . 5 乙酸乙酯。

　　5 . 6 氯化钠：分析纯，使用前于 140 ℃ ± 10 ℃烘烤 4 h,贮于干燥器中，冷却备用。

　　5 . 7 甲酸 。

　　5 . 8 甲醇 。

　　5 . 9 正己烷。

　　5 . 10 环己烷/乙酸乙酯溶液：按环己烷+乙酸乙酯 =1+1(体积比)混合配制成的溶液。

　　5 . 1 1 乙腈溶液：按乙腈+水 =3+2(体积比)混合配制成的溶液。

　　5 . 12 甲酸溶液，0 . 1%：移取 1 mL 甲酸(5 . 7)于 1 L容量瓶中，用水稀释并定容至刻度。

　　GB/T 39665—2020

　　5 . 13 标准品：纯度大于或等于 95%,见附录 A。

　　5. 14 标准储备溶液，1 000 mg/L：准确称取 0.01 g(精确至 0.000 1 g) 标准品(5.13) 于 10 mL 容量瓶中，用丙酮(5 . 3)或甲醇(5 . 8)溶解并定容至刻度。 标准储备溶液避光- 18 ℃保存，有效期为 6 个月。

　　5 . 15 混合标准溶液：移取适量标准储备溶液(5 . 14)于 100 mL容量瓶中，用丙酮(5 . 3)或甲醇(5 . 8)稀释并定容至刻度。 55 种农药混合标准溶液浓度参见附录 B。 混合标准溶液避光- 18 ℃保存，有效期为3 个月。

　　5 . 16 标准工作曲线溶液：精确吸取一定量的混合标准溶液(5 . 15),用乙腈溶液(5 . 11) 或正己烷(5 . 9) 稀释成不同浓度的标准工作曲线溶液(标准工作曲线溶液浓度参见附录 B) 。标准工作曲线溶液应现用现配。

　　5 . 17 空白样品基质溶液：分别称取 1 g(精确至 0 . 001 g)化妆水、乳液、膏霜和面膜类空白样品，按照7 . 1 和 7 . 2 进行样品前处理，操作到 7 . 2 . 2 中“合并至平底烧瓶中”步骤，分别制得不同种类空白样品基质溶液。

　　5 . 18 基质混合标准工作溶液：空白样品基质溶液(5 . 17) 氮气吹干，加入 0 . 5 mL 的标准工作曲线溶液(5 . 16)复溶，经有机相滤膜(5 . 19) 过滤，得到基质混合标准工作溶液。 基质混合标准工作溶液应现用现配。

　　5. 19 有机相滤膜：孔径 0.45 μm。

　　6 仪器和设备

　　6 . 1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI) 。

　　6 . 2 气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源(EI) 。

　　6 . 3 凝胶渗透色谱仪。

　　6 . 4 旋转蒸发仪。

　　6.5 分析天平(感量为 0.000 1 g 和 0.001 g)。

　　6 . 6 超声振荡器。

　　6.7 离心机：转速 ≥8 000 r/min。

　　6 . 8 涡旋振荡器。

　　6 . 9 氮气浓缩装置。

　　6 . 10 凝胶渗透 色 谱 净 化 柱：400 mm(柱 长)× 25 mm( 内 径)，内 装 聚 苯 乙 烯 凝 胶 填 料 ( 200 目 ~ 400 目)。

　　7 分析步骤

　　7 . 1 提取

　　称取 1 g试样(精确至 0 . 001 g)于 50 mL具塞离心管中，加入 10 mL 乙腈(5 . 2)(对于膏霜类等黏稠状样品建议先加入 5 mL水分散混匀后再加入乙腈)，用涡旋振荡器涡旋混合 1 min 后，放入超声振荡器超声 10 min,加入 5 g~7 g氯化钠(5.6), 涡旋 1 min后，8 000 r/min离心 2 min。将上层清液移入新的 50 mL具塞离心管中，残渣再用 10 mL 乙腈(5 . 2) 重复提取一次后，上层清液合并于同一离心管中，在 40 ℃ ±2 ℃水浴温度下，用氮气浓缩装置浓缩至近干，待净化。

　　7 . 2 净化

　　7 . 2 . 1 洗脱条件

　　凝胶渗透洗脱条件如下：

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　　a) 洗脱溶剂：环己烷/乙酸乙酯溶液(5 . 10) ;

　　b ) 预洗脱时间：15 min;

　　c) 采集时间：15 min ;

　　d) 柱冲洗时间：10 min;

　　e) 进样体积：5 mL;

　　f) 流速：5 mL/min。

　　7 . 2 . 2 净化

　　向离心管内加入约 10 mL环己烷/乙酸乙酯溶液(5 . 10)溶解残留物，然后转移至 10 mL 容量瓶中并定容，经有机相滤膜过滤于凝胶渗透色谱仪进样瓶中。 按照 7 . 2 . 1 凝胶渗透色谱条件净化，收集于凝胶渗透色谱仪收集瓶中，转移收集液于 250 mL平底烧瓶中，收集瓶用 10 mL~20 mL 的环己烷/乙酸乙酯溶液(5 . 10)清洗两次，合并至平底烧瓶中，在 40 ℃ ±2 ℃水浴温度下，用旋转蒸发仪蒸发近干。 用液相色谱-串联质谱仪分析时，加入 0 . 5 mL 乙腈溶液(5 . 11) 溶解残渣，混匀，经有机相滤膜(5 . 19) 过滤，供液相色谱-串联质谱测定;用气相色谱-质谱仪分析时，加入 0 . 5 mL 正己烷(5 . 9) 溶解残渣，混匀，经有机相滤膜(5 . 19)过滤，供气相色谱-质谱测定。

　　7 . 3 测定

　　7 . 3 . 1 液相色谱-串联质谱法仪器条件

　　7 . 3 . 1 . 1 液相色谱仪器条件

　　由于仪器设备的多样性，因此不可能给出测试条件的普遍参数，采用下列测试条件已被证明对检测是合适的：

　　a) 色谱柱：C18 , 100 mm×2.1 mm(粒径 1.8 μm), 或相当者;

　　b ) 流动相：A 相为 0 . 1%甲酸水溶液(5 . 12) , B 相为乙腈(5 . 2),梯度洗脱条件见表 1 ;

　　c) 流速：0.3 mL/min;

　　d) 柱温：35 ℃ ;

　　e) 进样量：2 μL。

　　表 1 流动相梯度洗脱条件

　　7 . 3 . 1 . 2 质谱条件

　　由于仪器设备的多样性，因此不可能给出测试条件的普遍参数，采用下列测试条件已被证明对检测

　　GB/T 39665—2020

　　是合适的：

　　a) 离子源：ESI ;

　　b) 电喷雾电压：+5 500V 和 -4 500V;

　　c) 雾化气压力：414 kPa;

　　d) 辅助加热气压力：414 kPa;

　　e) 气帘气压力：138 kPa;

　　f) 离子源温度：400 ℃ ;

　　g) 检测方式：多反应监测(MRM) ;

　　h) 母离子、子离子、扫描方式参见附录 C 的表 C. 1 。

　　7 . 3 . 2 气相色谱-质谱法仪器条件

　　7 . 3 . 2 . 1 气相色谱仪器条件

　　由于仪器设备的多样性，因此不可能给出测试条件的普遍参数，采用下列测试条件已被证明对检测是合适的：

　　a) 色谱柱：5%苯基-甲基聚硅氧烷，30 m×250 μm(膜厚 0 . 25 μm),或相当者;

　　b) 色谱柱升温程序：70 ℃保持 2 min, 以 25 ℃ /min 升至 150 ℃;以 3 ℃ /min 升至 200 ℃;以8 ℃/min升至 280 ℃保持 10 min;

　　c) 载气：氦气，纯度 ≥99.999%, 流速 1.0 mL/min;

　　d) 进样口温度：260 ℃ ;

　　e) 进样量：1 μL;

　　f) 进样方式：无分流进样，1 . 5 min后打开分流阀和隔垫吹扫阀。

　　7 . 3 . 2 . 2 质谱条件

　　由于仪器设备的多样性，因此不可能给出测试条件的普遍参数，采用下列测试条件已被证明对检测是合适的：

　　a) 电子轰击源：70 eV;

　　b ) 离子源温度：230 ℃ ;

　　c) GC-MS接口温度：280 ℃ ;

　　d) 扫描方式：特征选择离子监测(SIM) ;

　　e) 采集参数参见附录 C 的表 C. 2 。

　　7 . 3 . 3 定性测定

　　在上述仪器条件下进行样品测定时，如果试样待测液和标准品的选择离子色谱峰在相同保留时间处出现，并且对应质谱碎片离子的质荷比与标准品一致，其丰度比与标准品相比应符合表 2 的规定，则判断样品中存在这种农药。

　　表 2 定性离子相对丰度的最大允许偏差

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　　7 . 3 . 4 定量测定

　　本文件采用外标校准曲线法定量测定。 以各农药的基质混合标准工作溶液(5 . 18) 浓度为横坐标，各自的定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，并且保证所测样品中农药的响应值均在仪器的线性范围内，超过线性范围则应适当稀释后重新测定。 液相色谱-串联质谱法 20 种农药的多反应监测(MRM)色谱图见参见附录 D 的图 D. 1,气相色谱-质谱法 35 种农药的特征选择离子色谱图参见附录 D的图 D. 2 。

　　7 . 4 平行试验

　　按照 7 . 1~7 . 3 的步骤对同一试样进行平行试验测定。

　　7 . 5 空白试验

　　除不称取试样外，按照 7 . 1~7 . 3 的步骤进行空白操作。

　　7 . 6 检出限和定量限

　　本文件所述方法按 7 . 3 测试条件检出限和定量限参见附录 E。

　　8 结果计算

　　试样中农药残留量的计算按式(1)进行：

　　xi …………………………( 1 )

　　式中：

　　xi —试样中被测组分含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

　　ρi —从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的质量浓度，单位为微克每升(μg/L) ;

　　V —试样溶液最终定容体积，单位为毫升(mL) ;

　　m —样品称样量，单位为克(g) ;

　　10 —净化液定容体积，单位为毫升(mL) ;

　　1 000 — 换算系数;

　　5 —凝胶渗透色谱仪进样体积，单位为毫升(mL) 。

　　计算结果应扣除空白值，保留三位有效数字。

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　　附 录 A

　　(规范性)

　　55 种农药标准物质信息表

　　液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药标准物质信息表见表 A. 1,气相色谱-质谱法测定的 35 种农药标准物质信息表见表 A. 2 。

　　表 A.1 液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药标准物质信息表

　　表 A.2 气相色谱-质谱法测定的 35 种农药标准物质信息表

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　　表 A.2(续)

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　　附 录 B

　　(资料性)

　　55 种农药的混合标准溶液浓度和标准工作曲线溶液浓度

　　液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药混合标准溶液浓度和标准工作曲线溶液浓度见表 B. 1,气相色谱-质谱法测定的 35 种农药混合标准溶液浓度和标准工作曲线溶液浓度见表 B. 2 。

　　表 B.1 液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药混合标准溶液浓度和标准工作曲线溶液浓度

　　表 B.2 气相色谱-质谱法测定的 35 种农药混合标准溶液浓度和标准工作曲线溶液浓度

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　　表 B.2(续)

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　　附 录 C

　　(资料性)

　　55 种农药标准物质质谱采集参数

　　液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药标准物质定量及定性离子对、去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)以及扫描方式见表 C. 1,气相色谱-质谱法测定的 35 种农药标准物参考保留时间、定量离子、定性离子及定量离子与定性离子的比值见表 C. 2 。

　　表 C.1 液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药标准物质定量及定性离子对、

　　去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)以及扫描方式

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　　表 C.1(续)

　　表 C.2 气相色谱-质谱法测定的 35 种农药标准物参考保留时间、定量离子、定性离子及定量离子与定性离子的比值

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　　表 C.2(续)

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　　附 录 D

　　(资料性)

　　55 种农药标准物质色谱图

　　液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药多反应监测(MRM)色谱图见图 D. 1,气相色谱-质谱法测定的 35 种农药标准物质特征选择离子监测(SIM)色谱图见图 D. 2 。

　　a) 甲萘威 b) 多菌灵 c) 丁变敌

　　d) 特乐酚

　　g) 丁苯吗啉

　　j) 碘苯腈

　　m) 苯氧菊酯

　　e) 敌草隆

　　h) 精吡氟禾草灵

　　k) 异菌脲

　　n) 利谷隆

　　f) 氟环唑

　　i) 丙炔氟草胺

　　l) 异恶唑草酮

　　。) 禾草敌

　　图 D.1 液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药多反应监测(MRM)色谱图

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　　p)久效磷

　　q)炔螨特

　　r)扑灭津

　　s)西玛津 t)十三吗啉

　　图 D.1(续)

　　说明：

　　1 —对二氯苯，4.592 min;

　　2 —二苯胺，11.861 min;

　　3 —α-六六六，13.597 min;

　　4 —e六氯苯，13.922 min;

　　5 —β-六六六，14.799 min;

　　6 —丫-六六六，15.071 min;

　　7 —炔苯酰草胺，15.555 min;

　　8 —δ-六六六，16.231 min;

　　9 —百菌清，16.475 min;

　　10 —磷胺，17.948 min;

　　11 — 乙烯菌核利(烯菌酮)，18.351 min;

　　12 —七氯，18.562 min;

　　13 — 甲草胺，18.752 min;

　　14—艾氏剂，20.337 min;

　　15 —倍硫磷，20.883 min;

　　16 —三氯杀螨醇，21.005 min;

　　17 —异艾氏剂，21.871 min;

　　18 —e环氧七氯，22.520 min;

　　19 —克氯得(乙菌利)，23.019 min;

　　20 —氯丹，23.635 min;

　　21 —0，p′-滴滴伊，23.976 min;

　　22 —α-硫丹，24.133 min;

　　23 —狄氏剂，25.178 min;

　　24—p，p′-滴滴伊，25.256 min;

　　25 —0，p′-滴滴滴，25.548 min;

　　26 —腈菌唑，25.587 min;

　　27 —氟硅唑，25.724 min;

　　28 —异狄氏剂，25.948 min;

　　29 —β-硫丹，26.299 min;

　　30 —p，p′-滴滴滴，26.719 min;

　　31 —0，p′-滴滴涕，26.797 min;

　　32 —硫丹硫酸酯，27.706 min;

　　33 —p，p′-滴滴涕，27.881 min;

　　34—敌菌丹，28.458 min;

　　35 — 氯苯嘧啶醇(异嘧菌醇)，31 . 028 min。

　　图 D.2 气相色谱-质谱法测定的 35 种农药标准物质特征选择离子监测(SIM)色谱图

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　　附 录 E

　　(资料性)

　　55 种农药的方法检出限和定量限

　　液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药中文名称、方法检出限和定量限见表 E. 1,气相色谱-质谱法测定的 35 种农药中文名称、方法检出限和定量限见表 E. 2 。

　　表 E.1 液相色谱-串联质谱法测定的 20 种农药中文名称、方法检出限和定量限

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　　表 E.2 气相色谱-质谱法测定的 35 种农药中文名称、方法检出限和定量限

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　　表 E.2(续)