GB/T 33125-2016 荷兰石竹卷蛾检疫鉴定方法

　　ICS 65. 020. 01 B 16

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 33125—2016

　　荷兰石竹卷蛾检疫鉴定方法

　　Detection and identification ofCacoecimorphapronubana (Hübner)

　　2016-10-13发布 2017-05-01实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　发

　　布

　　GB/T 33125—2016

　　前 言

　　本标准按照 GB/T 1. 1—2009给出的规则起草 。

　　本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归 口 。

　　本标准起草单位 : 中 华 人 民 共 和 国 山 东 出 入 境 检 验 检 疫 局 、中 华 人 民 共 和 国 浙 江 出 入 境 检 验 检疫局 。

　　本标准主要起草人 :魏晓棠 、尼秀媚 、吴志毅 、朱研研 、胡东青 、王宇 、张宁 。

　　荷兰石竹卷蛾检疫鉴定方法

　　1 范围

　　本标准规定了荷兰石竹卷蛾 Cacoecimorphapronubana(Hübner)的检疫鉴定方法 。

　　本标准适用于荷兰石竹卷蛾的检疫和鉴定 。

　　2 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　2. 1

　　基斑 basalpatch

　　鳞翅目昆虫有些种类前翅花斑比较发达 ,有许多波状纹 ,横的或斜的 ,位于翅基部的一块为基斑 。

　　注 : 鳞翅目前翅花斑中间的一条斜带为中带(median fascia) ; 靠 外 缘 顶 角 的 一 块 为 端 纹(costal patch) ; 靠 前 翅 外 缘

　　的一条横带为亚外缘横带(subterminalfascia) 。

　　2.2

　　爪形突 uncus

　　鳞翅目雄虫背兜后端向下弯曲的片状或钩状结构 。

　　2.3

　　颚形突 gnathos

　　鳞翅目雄虫外生殖器中 , 由背兜后缘发生的一对附器 ,位于爪形突之下 ,并可向下向后围绕肛管 ,在其下方中央汇合 。

　　2.4

　　抱器瓣 valvae

　　鳞翅目雄虫外生殖器两侧成对的由第 9腹节演变而来的片状结构 。

　　注 : 鳞翅目雄虫腹侧边缘的基部区域称为抱器腹(sacculus) ,背侧边缘区域称为抱器背(costa) 。

　　2.5

　　阳茎基环 juxta

　　围绕鳞翅目雄虫阳茎基部的环状骨化构造 ,与支持阳茎有关 。

　　2.6

　　囊突 signum

　　鳞翅目雌虫的交配囊壁内高度骨化的刺状或小钩状构造 ,一个或数个 。

　　2.7

　　臀棘 cremaster

　　鳞翅目昆虫蛹的尾端带钩的刺 ,起附着作用 。

　　2. 8

　　臀栉 analcomb

　　鳞翅目幼虫肛上板腹面邻近肛门中间部分骨化的栉形或叉形构造 ,用以弹去粪粒 。

　　2.9

　　阴片 sterigma

　　鳞翅目雌性外生殖器中围绕交配孔周围的骨化结构 ,其中包括前阴片和后阴片 。

　　GB/T 33125—2016

　　3 荷兰石竹卷蛾基本信息

　　中文名 :荷兰石竹卷蛾 ,又名康乃馨卷叶蛾 。

　　学名 :Cacoecimorphapronubana Hübner。

　　英文名 :Mediterranean carnation leafroller。

　　异名 :Tortrix pronubana Hübner,Cacoecimorpha ambustana Hübner,Cacoecimorpha hermineana Du- ponchel,Cacoecimorphainsolatana Lucas,Cacoeciapronubana Hübner。

　　分类地位 :属鳞翅目 Lepidoptera,卷蛾科 Tortricidae,黄卷蛾族 Archipini,石竹卷蛾属 Cacoecimor- pha。

　　荷兰石竹卷蛾以幼虫取食寄主植物的芽 、叶及花造成为害 ,主要以幼虫随寄主植物运输而进行远距离传播 ,其寄主 、地理分布和生物学特性参见附录 A。

　　石竹卷蛾属中仅荷兰石竹卷蛾一个种 ,该属与黄卷蛾族中其他属的区分特征参见附录 B。

　　4 方法原理

　　根据荷兰石竹卷蛾寄主 、生物学特性和形态特征进行种类鉴定 。如果现场检疫发现低龄幼虫 ,需要饲养至老熟幼虫或成虫 ,利用体视显微镜进行观察鉴定 。如果利用外部形态特征判定其种类仍有疑问时 ,需进一步解剖雌雄成虫外生殖器并制成玻片标本 ,在生物显微镜下观察 。

　　5 仪器、用具和试剂

　　5. 1 仪器

　　体视显微镜 、生物显微镜 、培养箱 、烘箱 、水浴锅 。

　　5.2 用具

　　展翅板 、硫酸纸 、瓦楞纸片 、三角纸 、样品袋 、小毛笔 、养虫缸 、酒精灯 、解剖刀 、手术剪 、镊子 、解剖针 、昆虫针 、白瓷盘 、指形管 、标签纸 、量筒 、烧杯 、玻璃棒 、培养皿 、载玻片 、盖玻片等 。

　　5.3 试剂

　　无水乙醇 、乙醇溶液(30%、70%) 、10%氢氧化钠溶液(或 10%氢氧化钾溶液) 、二甲苯 、中性树胶 、醋酸红 、蒸馏水 、幼虫保存液(100 mL 75%乙醇溶液 +1mL甘油)等 。所用试剂均为分析纯 。

　　6 检测与饲养

　　6. 1 检测

　　根据荷兰石竹卷蛾的为害状对寄主植物进行检查 。 注意检查植物表面是否有食痕和昆虫排泄物 ,是否有蛀孔与蛀屑 。一般植物的受害部位在叶片 、腋芽 、花梗及细嫩的果实上 。 叶片扭曲 、有丝状物包裹 、幼茎有蛀食隧道 、果皮木栓化 、有褪色及黑色斑点等都是典型的为害状 。还要注意检查附近或包装材料的缝隙处是否有老熟幼虫与蛹 。如发现疑似蛹状物 ,用指形管盛装 ;如发现上述幼虫 ,摘取叶片 ,用可封口塑料袋装 ;若发现成虫 ,直接用三角纸包装放入样品袋 。上述管 、袋均加标签 ,或编号 ,记录时间 、地点 、寄主 、采集人等 ,带回实验室 。

　　6.2 饲养

　　将幼虫连同寄主植物一起放入养虫缸内 ,置于 25 ℃左右 、相对湿度 70% ~ 75%的培养箱内饲养 。每天进行观察 ,如食料不足 ,可适当补充苹果屑作为食物 ,直至化蛹 。对于蛹的饲养 ,可在养虫缸内放一薄层瓦楞纸片 ,将蛹小心置于细沙或瓦楞纸上 ,盖上纱网盖 ,将养虫缸置于培养箱 ,在 20 ℃ ~ 30 ℃ 、相对湿度为 65%的条件下饲养至成虫羽化 。

　　7 标本的制作

　　7. 1 针插标本

　　成虫标本可制作为针插标本 。将羽化后成虫冷冻杀死(可置于冰箱 -20 ℃下 1 h左右) ,软化后在展翅板上展翅 ,制成针插标本 。干成虫标本需回软化后制作 。

　　7.2 浸渍标本

　　幼虫一般制作浸渍标本 。将幼虫清洗干净后保存在幼虫保存液中 。如果要备分子试验用 ,则可用无水乙醇浸泡幼虫或成虫 ,并冷冻保存 。

　　7.3 成虫外生殖器玻片标本

　　将成虫腹部取下 ,放入 盛 有 10%氢 氧 化 钠(或 氢 氧 化 钾) 溶 液 的 试 管 中 , 在 沸 水 中 加 热 5 min~ 10 min左右至腹部透明(或在水浴锅中加热到腹部透明) ; 取出后放入蒸馏水中浸洗 ;将剩余的腹壁和外生殖器放入醋酸红溶液中染色约 2 h,然后顺次放入 30%、70%乙醇中各脱水 10 min,将腹壁和外生殖器分开 ,再移至无水乙醇中脱水 10 min;最后置于二甲苯中透明 ,取出外生殖器置于载玻片上中性树胶滴中 ,体视显微镜下整姿 ,尽量使雄外生殖器构造在视野中为正面图像 ; 盖上盖玻片 ; 风干或用烘箱45 ℃下 24h 烘干 ,制成玻片标本 。

　　8 实验室鉴定

　　8. 1 卷蛾科的主要形态特征

　　体中或小型 ;多为褐 、黄 、棕 、灰等色 ,并有条 、斑纹或云斑 ;前翅略呈长方形 ,肩区发达 ,前缘弯曲 ,有的种类雄虫前缘向反面折叠 ;静止时 ,两前翅平叠在背上 ,合成钟状 ;下唇须第 1 节常被有厚鳞 ,故呈三角形 ; 除头部有竖立的鳞毛外 ,身上的鳞片平贴 ;前翅翅脉均从基部或中室直接伸出 ,CuA2出 自 中室下缘近中部处 。后翅 Sc+R1与 Rs分离 。

　　幼虫体圆柱形 ;体色多为深浅不同的绿色 ,有的白色 、粉红色 、紫色或褐色 ;趾钩二序或三序 ,环式 ;前胸气门前的骨片有 3 根毛 ;肛门上方常有臀栉 。

　　8.2 黄卷蛾族的主要形态特征

　　头部或多或少被有粗鳞毛 。胸部光滑或有直立毛簇 。有少数种类触角第二节有凹陷 。下唇须向上或向前伸 。前翅前缘呈波状 ,静止时褶叠成吊钟状 ; 花纹有基斑 、中带和端纹 ,各斑有时分散成许多斑点 ;R4和 R5脉分离或共柄 ,R4脉末端止于翅尖或外缘上 ;雄性大多有前缘褶 。后翅 M3和 CuA1脉分离或同出于一点 ,但很少共柄 。雄性外生殖器有广阔的抱器瓣和发达的抱器腹 ,抱器瓣基部有毛垫 。爪形突发达 ,背腹扁平而稍宽 ,匙状 ,末端钝 。颚形突成两臂状在中央合并成钩 。尾突发达 、发育不全或缺少 。抱器背基突强烈几丁质化 ,呈横带状 , 中间间断呈齿状或全部消失 。 阳茎针长针状 ,有时消失 。雌

　　性外生殖器的囊导管中有管带 。囊突呈匕首状 、长角状 、短剑状 ;有或无球端 。少数种类无囊突 。 阳片呈漏斗状 。

　　8.3 荷兰石竹卷蛾的主要形态特征

　　8.3. 1 成虫

　　具有雌雄二型现象 ,雄成虫较雌成虫小 ,触角各节有纤毛 ;前翅近矩形 ,休息时前翅覆于后翅上方 ,呈钟罩状 。

　　8.3. 1. 1 雄成虫(参见图 C. 1 和图 C. 5)

　　雄成虫特征 :

　　— 翅展 14 mm~ 18 mm ,头 、胸红棕色 ,腹部褐色具橘黄色斑纹 ,触角纤毛发达 。

　　— 前翅浅褐色至红棕色 ,偶尔为蓝灰色 ,具深色网状纹 ;无前缘褶 ;基斑 、中带 、亚外缘横带深褐色 ;基横带的外缘可见 , 中带 、亚外缘横带明显 。

　　— 后翅橙黄色 ,顶角 、翅端 、内缘(有时甚至端半部) 深褐色 ,缘毛橙黄色 。R1脉源于中室中央至端部 ,M2和 M3脉基部分离 。

　　— 雄虫外生殖器(参见图 C. 3) :爪形突长而宽 ,末端具片状突起 ,呈伞状 ,尾突直但不发达 ; 颚形突简单 ,末端具有不发达钩状突起 ;抱器瓣简化 ,抱器腹结构复杂 ,近中部有一大一小两个刺状突 ,大的靠近基部 ,小的位于大的外围 ,末端圆无特化结构 ;抱器背基突完整 ,两侧延伸呈片状 ;阳茎基环微曲 , 阳茎端膜内具少量 、细小的微刺状角状器 。

　　8.3. 1.2 雌成虫(参见图 C. 2)

　　雌成虫特征 :

　　— 翅展 16 mm~ 24 mm ,头胸腹和雄虫相似 。触角纤毛不发达 。

　　— 前翅颜色与雄虫相似 ,但通常颜色稍浅 ,上有深色的网纹 。 中带不完整 , 中部缺失 ,亚外缘横带缩减为亚顶角斑 。

　　— 后翅橙色 , 内缘褐色 ,但顶角和翅端很少或不呈褐色 。

　　— 雌性生殖系统(参见图 C. 4) :囊导管细长骨化 ,交配囊比导精管囊小 ,交配囊上有一刺状囊突 。

　　8.3.2 卵

　　椭圆形至圆形 ,长 ×宽约 1 mm×0. 6 mm ,卵壳具网状斑纹 ,外覆黏液 。初产卵为浅绿色 ,渐变为黄色 。卵相互重叠 ,每块卵 10粒 ~ 200粒 ,通常产于叶表面 。

　　8.3.3 老熟幼虫(参见图 C. 7)

　　老熟幼虫特征 :

　　— 体长 15 mm~ 20 mm;体色从光亮到橄榄绿色 ,腹部颜色较淡 ;

　　— 头部翠绿色至黄褐色 ,后侧具深褐色或黑色眼斑状斑点 ;头壳及毛序分布参见图 C. 10;各体节毛序参见图 C. 11;

　　— 前胸背板黄色 、绿色或褐色 ,通常比其余体壁颜色浅 ,背板被一条浅色线平分 ,其后侧缘有特殊的深色椭圆形或三角状斑点 ;

　　— 各体节具褐色小刺 ;体毛苍白色 ;气门椭圆形 ,气门板狭窄 ,深褐色或黑色 ;胸部第 1 节和腹部

　　第 8节的气门比其他体节的大 ,较靠近背侧 ;

　　— 臀板黄色 、绿色或绿褐色 ,常具褐色斑点 ;臀栉绿色 ,具 6根 ~ 10根叉状齿 ,通常 5 根长齿 ,2 根

　　(外侧)短齿(参见图 C. 6) ;第 3~ 6腹节的腹足趾钩为双序环式 ;

　　— 上颚有 3 颗尖锐和 2 颗较钝的切齿与一颗小臼齿(参见图 C. 9) 。

　　8.3.4 蛹(参见图 C. 12)

　　长 9 mm~ 12mm;腹节褐色 ;头 、胸和翅深褐色 ,渐变成黑色 ;第 2~ 8节背板具 2排背刺 ,腹节具黄色棕毛 ;臀棘拉伸 ,具 4对钩齿 。

　　8.4 荷兰石竹卷蛾与相似种南非石竹卷蛾 Epichoristodesacerbella Walker的区别

　　荷兰石竹卷蛾与南非石竹卷蛾卵 、幼虫和蛹外形相似 ,极易混淆(参见图 C. 8 和图 C. 12) 。 二者的区别特征见表 1。

　　表 1 荷兰石竹卷蛾和南非石竹卷蛾的形态特征比较

　　9 特征判定

　　以成虫或老熟幼虫的形态特征为依据 ,符合 8. 3. 1 或 8. 3. 3 可判定为荷兰石竹卷蛾 。

　　10 标本保存

　　经过鉴定的荷兰石竹卷蛾的标本应永久保存 ,并加注明时间 、地点 、寄主和采集人等信息的标签 。

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　荷兰石竹卷蛾的其他信息

　　A. 1 荷兰石竹卷蛾的地理分布

　　荷兰石竹卷蛾原产地中海地区 ,现已广泛扩散至欧洲 、北美洲和非洲等国 ,其中欧洲包括阿尔巴尼亚 、法国 、德国 、希腊 、爱尔兰 、意大利 、卢森堡 、马耳他 、荷兰 、葡萄牙 、斯洛文尼亚 、西班牙 、瑞士 、英国 、塞尔维亚 、克罗地亚 、波黑 、马其顿等 ;非洲包括阿尔及利亚 、利比亚 、摩洛哥 、突尼斯和南非等 ;北美洲仅美国的俄勒冈州 。

　　A.2 荷兰石竹卷蛾的主要寄主植物

　　荷兰石竹卷蛾的幼虫为杂食性害虫 ,幼虫可取食来自 42个科的 140种植物的芽 、叶及花 ,主要寄主植物有香 石 竹 (康 乃 馨) Dianthus caryophyllus、石 竹 Dianthus spp.、金 合 欢 Acacia spp.、槭 Acer spp.、菊属 Chrysanthemum spp.、马桑 Coriaria spp、小冠花 Coronilla spp.、大戟 Euphorbia spp.、冬青 Ilex spp.、茉莉 Jasminum spp.、月桂 Laurus spp.、十大功劳 Mahonia spp.、天竺葵 Pelargonium spp. 、杨属 Populus spp.、杜鹃花 Rhododendron spp.、蔷薇 Rosa spp.、丁香 Syringa spp.、柑橘 Citrus spp. 、苹果 Malus spp.、木犀榄属 Olea spp.、李 Prunus spp.、悬钩子 Rubus spp.、芸苔 Brassica spp.、三叶草Trifolium spp.、蚕豆 Vicia spp.、豌豆 Pisum sativum、土豆 Solanum tuberosum、西红柿 Solanum ly- copersicum 等 。

　　A.3 荷兰石竹卷蛾的生物学特性

　　A.3. 1 为害

　　荷兰石竹卷蛾为害寄主植物时 ,常将卵块产于叶表面 ,初龄幼虫常潜入叶中取食 ,稍大的幼虫取食叶 、花瓣和果实 , 吐丝将自身包裹隐藏于叶 、花蕾中 ,也取食水果的果皮 ,受其为害的叶呈现典型的弯钩状 , 因其吐丝缠绕 ,常阻碍开花 ,导致花蕾异常肿大 ;受其为害的柑桔通常有两种情况 :一种是幼果过早凋落 ,幼虫吐丝卷叶隐藏取食叶片 ,受其为害的幼果果皮迅速栓化 ,但几乎不为害果肉 ,被为害的果实表面常呈浅棕至黑色斑块 ,影响美观 ;另一种情况是 ,成熟果实的花萼不栓化 ,常导致果实腐烂 。被为害的康乃馨切花常失去经济价值 。

　　A.3.2 生活史

　　荷兰石竹卷蛾在分布区北 部(如 英 国) , 1 年 一 般 发 生 2 代(春 季 产 卵 夏 季 孵 化 , 秋 季 产 卵 冬 季 孵化) ,主要以第 2代或第 1代幼虫在温室或野外的植物上越冬 。 由于受冬季低温和被雨打伤等原因 ,这些幼虫的死亡率可达 70% ~ 90% 。幸存的幼虫从 3 月末到 5 月可成熟化蛹 ,蛹期可达 10d~45d,成虫4 月羽化 ,交配产卵至 6 月 。第 1代幼虫在 4 月 ~ 8 月 出现 ,蛹期 15 d~ 17 d。第 2 代成虫在 8 月 中旬至 9 月末或 10月初出现 。如果条件(食物和温度)适宜 ,一些个体到 11月仍可孵化 。若秋季较温暖 ,有可能出现第 3代 ,它们在常绿植物上生长发育 。

　　在其分布地区的南部(如意大利 、西班牙) , 1 年发生 4 代 , 以第 3 代和第 4 代幼虫越冬 。在最低温

　　度为 8 ℃的温室(如取食康乃馨)中饲养 ,4 月左右羽化 , 比在野外作物上的大约提前 15 d。而在非洲北部的柑橘属植物上 ,1 年至少发生 5代 ,可能会发生 6代 。

　　在最低温度为 15 ℃的温室(如取食玫瑰) 中喂养 , 1 年可发生 5 代以上 。 即使在法国南部 , 卵期和第一代成虫出现时期从不重叠 ,但从春季到秋季也都有可能见到各个虫期的荷兰石竹卷蛾 。

　　A.3.3 生活习性

　　成虫通常夜晚羽化并立即交配 ,交配时间持续 1 h~ 2 h。体型较大的雌性成虫不易飞起 ,只有雄性可以正常活动 。交配后 3 h~4 h,卵分批产出 ,雌成虫的寿命大约 11d~ 12d,雄成虫 14d~ 18d。雄成虫具有很强的趋光性 。

　　卵产在光滑的表面 ,第一批卵通常有 150粒 ~ 250粒 。每个雌性成虫可最多产 8 批 700粒卵(平均430粒) 。

　　幼虫 8 d~ 51 d后卵孵化 ,孵化时间只需数秒 。幼虫有趋光性 ,孵化后迅速爬到或被风带到嫩叶或花上(如康乃馨) 。它们吐丝网住 2 片 ~ 3 片叶子或花瓣 ,并取食上表皮 ,造成许多孔洞 。在幼虫 3 龄末期 ,整个叶片都被为害并被浓密的丝团缠绕 。最后它们钻入花蕾的底部 。幼虫期持续 19 d~ 70 d(7个龄期) ,蛹期 10 d~ 15 d。

　　温湿度对其的影响 :交 配 、产 卵 与 孵 化 的 临 界 温 度 分 别 为 10. 5 ℃ 、12 ℃ ~ 13 ℃和 14 ℃ 。 蛹 在-4 ℃下 2 h 即可被冻死 ,所以不会以蛹越冬 。在平均温度为 15 ℃与 30 ℃时 ,完成一个世代所需要的时间分别为 123 d~ 147 d 和 28 d~ 44 d。 另 外 , 湿 度 也 是 一 个 重 要 的 因 素 : 幼 虫 可 以 在 相 对 湿 度 为10% ~ 15%的环境中生长发育 ,最适相对湿度为 40% ~ 70% , 当相对湿度大于 90%时 ,幼虫和蛹的死亡率将增加 。

　　附 录 B

　　(资料性附录)

　　黄卷蛾族分属检索表

　　前翅 CuA1脉出 自 中室下角 ,抱器腹有两个尖 … … … … … … … … … … … … 烟卷蛾属 Capua

　　附 录 C

　　(资料性附录)

　　荷兰石竹卷蛾鉴定特征图

　　荷兰石竹卷蛾鉴定特征如图 C. 1~ 图 C. 12所示 。

　　图 C. 1 荷兰石竹卷蛾雄成虫

　　图 C.2 荷兰石竹卷雌成虫

　　注 : 图 C. 1 和图 C. 2 均引 自 Todd M. Gilligan and Marc E. Epstein。

　　注 : 引 自 TortAI。 注 : 引 自 Medvedev。

　　图 C.3 雄性外生殖器 图 C.4 雌性外生殖器

　　注 : 引 自 Bradley。

　　图 C.5 荷兰石竹卷成虫翅脉

　　注 : 引 自 Reg Fry。

　　图 C.7 荷兰石竹卷蛾幼虫

　　a) 前胸片

　　注 : 引 自 Bradley。

　　图 C.6 荷兰石竹卷蛾幼虫臀栉

　　注 : 引 自 Todd M. Gilligan and Marc E. Epstein。

　　图 C. 8 南非石竹卷蛾幼虫

　　b) 左上颚

　　注 : 引 自 Bradley。

　　图 C.9 荷兰石竹卷蛾幼虫前胸片及左上颚

　　注 : 引 自 Fisher。

　　图 C. 10 荷兰石竹卷蛾幼虫头壳及毛序

　　说明 :

　　T1 — 第 1胸节 ;

　　T2 — 第 2胸节 ;

　　A2 — 第 2腹节 ;

　　A8 — 第 8腹节 ;

　　A9 — 第 9腹节 ;

　　A10— 第 10腹节 。

　　注 : 引 自 EPPO。

　　图 C. 11 荷兰石竹卷蛾幼虫毛序

　　a) 荷兰石竹卷蛾 b) 南非石竹卷蛾注 : 引 自 EPPO。

　　图 C. 12 蛹臀棘

　　参 考 文 献

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