GB/T 31270.7-2014 化学农药环境安全评价试验准则 第7部分：生物富集试验

　　ICS 65. 100 B 13

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 31270.7—2014

　　化学农药环境安全评价试验准则

　　第 7 部分 : 生物富集试验

　　Testguidelineson environmentalsafety assessmentforchemical

　　pesticides—Part7: Bioconcentration test

　　2014-10-10发布 2015-03-11 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　发

　　布

　　GB/T 31270.7—2014

　　前 言

　　GB/T 31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为 21个部分 :

　　— 第 1部分 :土壤降解试验 ;

　　— 第 2部分 :水解试验 ;

　　— 第 3部分 :光解试验 ;

　　— 第 4部分 :土壤吸附/解吸试验 ;

　　— 第 5部分 :土壤淋溶试验 ;

　　— 第 6部分 :挥发性试验 ;

　　— 第 7部分 :生物富集试验 ;

　　— 第 8部分 :水-沉积物系统降解试验 ;

　　— 第 9部分 :鸟类急性毒性试验 ;

　　— 第 10部分:蜜蜂急性毒性试验 ;

　　— 第 11部分 :家蚕急性毒性试验 ;

　　— 第 12部分 :鱼类急性毒性试验 ;

　　— 第 13部分 :溞类急性活动抑制试验 ;

　　— 第 14部分 :藻类生长抑制试验 ;

　　— 第 15部分 :蚯蚓急性毒性试验 ;

　　— 第 16部分 :土壤微生物毒性试验 ;

　　— 第 17部分 :天敌赤眼蜂急性毒性试验 ;

　　— 第 18部分 :天敌两栖类急性毒性试验 ;

　　— 第 19部分 :非靶标植物影响试验 ;

　　— 第 20部分 :家畜短期饲喂毒性试验 ;

　　— 第 21部分 :大型甲壳类生物毒性试验 。

　　本部分是 GB/T 31270的第 7部分 。

　　本部分按照 GB/T 1. 1—2009给出的规则起草 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。

　　本部分由中华人民共和国农业部提出并归 口 。

　　本部分负责起草单位 :农业部农药检定所 、环保部南京环境科学研究所 。

　　本部分主要起草人 :单正军 、林荣华 、孔祥吉 、王娜 、李莹 、吴珉 、张宏涛 。

　　化学农药环境安全评价试验准则

　　第 7 部分 :生物富集试验

　　1 范围

　　GB/T 31270的本部分规定了生物富集试验的材料 、条件 、操作 、质量控制 、数据处理 、试验报告等的基本要求 。

　　本部分适用于化学农药登记而进行的生物富集试验 ,仅当供试物 Log Kow >3时才进行该项试验 。其他类型的农药可参照使用 。

　　2 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　2. 1

　　生物富集 bioconcentration

　　生物体从生活环境与食物中不断吸收低剂量物质 、逐渐在体内积累浓缩的过程 。

　　同义词 :生物浓缩 、生物蓄积 bioaccumulation。

　　[NY/T 1667. 5—2008,定义 3. 5] 2.2

　　供试物 testsubstance

　　试验中需要测试的物质 。

　　2.3

　　化学农药 chemicalpesticide

　　利用化学物质人工合成的农药 。其中有些以天然产品中的活性物质为母体 ,进行仿制 、结构改造 ,创新而成 ,为仿生合成农药 。

　　同义词 :有机合成农药 synthetic organic pesticide。

　　[NY/T 1667. 1—2008,定义 2. 3. 1] 2.4

　　原药 technicalmaterial

　　在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品,不能含有可见的外来物质和任何添加物 ,必要时可加入少量的稳定剂 。

　　[NY/T 1667. 2—2008,定义 2. 5. 1] 2.5

　　有效成分 active ingredient;a. i.

　　农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分 。

　　[NY/T 1667. 2—2008,定义 3. 1] 2.6

　　半静态试验法 semi-static test

　　试验期间每隔一定时间(如 24h)更换一次药液 ,保持试验药液的浓度不低于初始浓度的 80% 。

　　GB/T 31270.7—2014

　　2.7

　　静态试验法 static test

　　试验期间不更换试验药液 。

　　2. 8

　　流水式试验法 flow-through test

　　试验期间药液自动连续地流入试验容器 , 同时保持容器内药液体积的相对恒定 。

　　3 试验概述

　　采用鱼类作为供试生物 ,按供试物的性质采用静态法 、半静态法或流水式试验法 。将受试鱼暴露于两个浓度的供试物溶液中 ,定期采样测定鱼体与药液中供试物的浓度 ,计算得生物富集系数(BCF) , 以此评价供试物的生物富集性 。根据农药登记管理法规及其他规定选择相关方法进行试验 。

　　4 试验方法

　　4. 1 材料和条件

　　4. 1. 1 供试物

　　供试物应使用农药纯品 、原药或制剂 。

　　4. 1.2 供试生物

　　试验用鱼种宜选择的斑马鱼(Brachydoniorerio) 、鲤鱼(Cyprinuscarpio) 、虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss) 、青鳉(Oryziaslatipes) 或稀有鮈鲫(Gobiocyprisrarus) 幼鱼 ,具体体长和水温条件等驯 养 要求参见附录 A。如选用其他鱼类作为供试生物 ,应采用相应的驯养和试验条件 ,并加以说明 。

　　试验用鱼应健康无病 ,大小一致 。试验前应在与试验时相同的环境条件下驯养 7 d~ 14 d, 驯养期间每天喂食 1 次 ~ 2 次 ,每日光照 12 h~ 16h,及时清除粪便及食物残渣 。试验期间在必要时投入适量饵料(每天投喂量约为鱼体重的 1% ~ 2%) ,每天用虹吸管及时清除试验鱼缸中剩余的饵料和排泄物 。

　　4. 1.3 主要仪器设备

　　主要仪器设备如下 :

　　— 鱼缸 ;

　　— 气相色谱仪/液相色谱仪等 。

　　4. 1.4 试验用水

　　试验用水为存放并去氯处理 24 h 以上的 自来水(必要时经活性炭处理) 或能注明配方的稀释水 。水质硬度在 10 mg/L~ 250 mg/L之间(以 CaCO3 计) , pH 在 6. 0~ 8. 5 之间 ,并且试验期间变化量在±0. 5之间 ,溶解氧保持在试验温度下饱和值的 60% 。

　　4.2 试验操作

　　4.2. 1 供试物溶液配制

　　将供试物溶于水中 , 难溶于水的可用少量低毒 、不易降解的有机溶剂(如叔丁醇或二甲亚砜)助溶 ,加量小于 0. 1 mL/L。

　　4.2.2 方法的选择

　　按供试物的稳定性选择静态试验法 、半静态试验法或流水式试验法 。对于稳定性较强的供试物采用静态试验法 ;对具有一定稳定性的供试物 ,如供试物水溶液在 24h 内浓度变化小于 20% ,采用半静态试验法 ;对易降解与强挥发性的供试物 ,采用流水式试验法 。方法选择详见附录 B。

　　4.2.3 正式试验

　　应先做鱼类急性毒性试验 ,求得 LC50 (96h) 值 ,再进行生物富集试验 。 配制药液浓度通常为急性毒性 LC50 (96h)的 1/10和 1/100两个处理 ,每个处理至少应设两个平行 。每个处理投放一定数量的试验用鱼 ,投放数量应满足试 验 分 析 的 需 要 , 并 使 生 物 承 载 量 满 足 每 天 每 升 水 承 载 鱼 重(湿 重) 0. 1 g~ 1. 0 g。试验过程中定期测定水中 pH、溶解氧含量 ,于 0 h、24 h、48 h、96 h、144 h、192 h 分别从各处理中取水样与鱼样(称重 ,采集鱼尾数应满足试验分析的需要 ,采用虹吸法采集水样) ,测定水样与鱼样中的供试物含量 。 同时设置不加供试物的对照处理 。

　　4.3 数据处理

　　检测鱼体摄入供试物的实际值 。试验结束时水体及鱼体中供试物含量变化已达到平衡 ,则鱼体对供试物的富集系数按式(1)计算 ,计算结果保留三位有效数字 。

　　BCF ……………………( 1 )

　　式中 :

　　BCF — 生物富集系数 ;

　　Cfs — 平衡时鱼体内的供试物含量 ,单位为毫克每千克(mg/kg) ;

　　Cws — 平衡时水体中的供试物含量 ,单位为毫克每升(mg/L) 。

　　如果在试验结束时 ,鱼体中农药浓度尚未达到平衡 ,则用上述公式求出的富集系数值应注明是 8 d的结果 , 即用 BCF8d表示 。

　　4.4 质量控制

　　质量控制条件包括 :

　　— 试验前试验用鱼应在实验室内预养一周 ,预养期间生长正常 ,死亡率小于 5% ;

　　— 水和鱼体中农药残留量测定方法回收率为 70% ~ 110% ,最低检测浓度限应低于初始添加浓度的 1% ;

　　— 试验期间水中溶解氧保持试验温度下饱和值的 60% ;

　　— 试验期间试验鱼生长正常 ;

　　— 试验浓度设定以满足试验要求为标准 。

　　5 试验报告

　　试验报告至少应包括下列内容 :

　　— 供试物的信息 , 包括供试农药的通用名 、化学名称 、结构式 、CAS号 、纯度 、基 本 理 化 性 质 、来源等 ;

　　— 供试生物的种名 、来源 、驯化时间 、驯化条件 、食物种类与数量 、鱼龄和规格 ;

　　— 试验条件 ,包括试验时间 、周期 、温度 、试验容器 、农药浓度、pH、溶解氧 、助溶剂及浓度 、试验鱼数量 、投食时间和数量等 ;

　　— 水和鱼体中农药残留量分析方法 ,包括样品提取 、测定条件 、线性范围 、添加回收率 、相对标准偏差 、最小检测量 ;

　　— 试验结果 ,包括试验期间鱼死亡率 、异常反应 、表征变化 ; 富集系数对时间的曲线 、生物富集系数等 ;

　　— 生物富集性划分参见附录 C。

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　试验用鱼的选择

　　适合生物富集试验的鱼种及适宜水温条件见表 A. 1。

　　表 A. 1 试验用鱼的体长和适宜水温

　　附 录 B

　　(规范性附录)

　　试验方法的选择

　　静态 、半静态 、动态法的选择要点见表 B. 1。

　　表 B. 1 试验方法的选择及操作要点

　　附 录 C

　　(资料性附录)

　　农药生物富集性评价标准

　　按生物富集系数 BCF值的大小 ,将农药生物富集性分为三级 ,见表 C. 1。

　　表 C. 1 农药生物富集等级划分

　　参 考 文 献

　　[1] NY/T 1667. 1—2008 农药登记管理术语 第 1 部分 :基本术语

　　[2] NY/T 1667. 2—2008 农药登记管理术语 第 2 部分 :产品化学

　　[3] NY/T 1667. 5—2008 农药登记管理术语 第 5 部分 :环境影响

　　[4] FAO(1989) . Guidelines on environmental criteria for the registration of pesticides. Food and Agriculture Organization of the United Nations, Roma.

　　[5] OECD(2012) . Guideline 305: Bioaccumulation in fish: Aqueous and Dietary Exposure. OECD Guidelines for testing of chemicals.

　　[6] USEPA(1997) . Fish BCF (OPPTS850. 1730) . Ecological effecttestguidelines.

　　[7] 蔡道基 . 农药环境毒理学研究 . 北京 : 中国环境科学出版社 ,1999.

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