GB/T 21441-2018 牙鲆

　　ICS 65 . 150 B 51

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 21441—2018

　　代替 GB/T 21441—2008

　　牙 鲆

　　Bastardhalibut

　　2018-02-06 发布 2018-09-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　发

　　布

　　GB/T 21441—2018

　　前 言

　　本标准按照 GB/T 1 . 1—2009 给出的规则起草。

　　本标准代替 GB/T 21441—2008《牙鲆》，与 GB/T 21441—2008 相比，主要变化如下：

　　— 标准英文名称改为 Bastard halibut;

　　— 对 GB/T 21441—2008 中的 3 . 2 可数性状和 3 . 3 可量性状进行了补充(见 4 . 2 和 4 . 3) ;

　　—GB/T 21441—2008 中的 4 . 1 中增加了体长和体重关系的回归方程(见 5 . 1) ;

　　— 删除了 GB/T 21441—2008 中的第 6 章生化遗传学特征及相应的检测方法;

　　— 增加了 C犗I基因序列片段作为分子遗传学特征(见第 7 章);

　　— 染色体检测方法引用了 GB/T 18654 . 12 的方法(见 8 . 4) ;

　　— 补充了外部形态特征、生长繁殖特性和分子生物学特性的检测方法(见 8 . 2、8 . 3、8 . 5) 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

　　本标准由中华人民共和国农业部提出。

　　本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会(SAC/TC 156/SC 2)归口 。

　　本标准起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、威海圣航水产科技有限公司、威海市环翠区海洋与渔业研究所。

　　本标准主要起草人：张岩、宋宗诚、刘璐、原永党、谷杰泉、施坤涛、张天时、刘莉、刘琪。

　　本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

　　—GB/T 21441—2008 。

　　GB/T 21441—2018

　　牙 鲆

　　1 范围

　　本标准给出了牙鲆(paralichthysoli℃aceus Tmminck & Schlegel 1846) 的学名与分类、主要形态

　　特征、生长与繁殖特征、细胞遗传学特征、分子遗传学特征、检测方法和判定规则。

　　本标准适用于牙鲆种质的鉴定和检测。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注 日期的引用文件，仅注 日期的版本适用于本文件 。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　3 学名与分类

　　3 . 1 学名

　　牙鲆 paralichthysoli℃aceus Tmminck & Scklegel。

　　3 . 2 分类位置

　　辐鳍鱼纲(Actinopterygii), 鲽形目(Pleuronectiformes), 牙鲆科 (Paralichthyidae), 牙鲆属(parali- chthys)。

　　4 形态特征

　　4 . 1 形态

　　身体呈长椭圆形，扁平，双眼位于头部左侧;有眼侧披小栉鳞，呈褐色、黄褐色或灰黄色，通常具三个暗黑色斑点，无眼侧披圆鳞，呈白色。 左右侧线同样发达，无颞上枝。 尾柄长而高。 有眼侧的两个鼻孔约位于眼间隔正中的前方，前鼻孔后缘有一狭长瓣片;无眼侧两个鼻孔接近头部背缘，前鼻孔亦有一狭长瓣片。 口大，前位，下颌稍突出;口裂斜，左右对称。 背鳍约始于上眼前缘，左右腹鳍略对称，尾鳍后缘呈双截形;奇鳍均有暗色斑纹，胸鳍有暗点或横条纹。 牙尖锐，呈锥状，上下各一行，均同样发达;前部牙齿较大，呈犬齿状。

　　牙鲆的外形见图 1 。

　　GB/T 21441—2018

　　图 1 牙鲆外形

　　4 . 2 可数性状

　　4 . 2 . 1 鳍式

　　背鳍 D.63~84,腹鳍 V.6,臀鳍 A.48~65, 尾鳍 C.17。

　　4 . 2 . 2 侧线鳞数

　　108~130。

　　4 . 2 . 3 鳃耙数

　　5~6+14~16。

　　4 . 3 可量性状

　　4.3. 1 体长为体高的 2.3 倍 ~2.7 倍，为头长的 3.4 倍 ~3.9 倍。

　　4 . 3 . 2 颌骨长等于或大于头长的 1/2。

　　4 . 3 . 3 尾柄长为尾柄高的 1 . 3 倍 。

　　4.3.4 头长为吻长的 4.2 倍 ~4.4 倍，为眼径的 6.6 倍 ~7.1 倍。

　　5 生长与繁殖特征

　　5 . 1 生长

　　体长与体重关系呈幂函数增长形式，其回归方程见式(1)和式(2) 。

　　式中：

　　犠 ♂ —雄鱼体重，单位为克(g) ;

　　犠 早 —雌鱼体重，单位为克(g) ;

　　犔 —体长，单位为毫米(mm) 。

　　自然海区不同年龄组的全长和体重情况参见附录 A。

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　　5 . 2 繁殖

　　5 . 2 . 1 性成熟年龄

　　自然海区雌性性成熟年龄为 3 龄，雄性性成熟年龄为 2 龄 。

　　5 . 2 . 2 生物学最小型

　　生物学最小型雌鱼体长为 360 mm,雄鱼体长为 300 mm。

　　5 . 2 . 3 卵子特征

　　浮性卵，单油球，卵径 0.9 mm~1.0 mm。

　　5 . 2 . 4 产卵量

　　为多次产卵类型。 一尾体重 1 000 g 的亲鱼一次产卵量为 4 × 10 4 粒 ~45 × 10 4 粒 。

　　6 细胞遗传学特征

　　6 . 1 染色体数

　　体细胞染色体数：2n=48。

　　6 . 2 核型

　　核型公式：48 t, NF=48。 牙鲆染色体核型见图 2 。

　　图 2 牙鲆染色体核型

　　7 分子遗传学特征

　　牙鲆 COI基因片段的序列如下：

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　　种内遗传距离小于 2%。

　　8 检测方法

　　8 . 1 抽样

　　按照 GB/T 18654 . 2 的规定执行。

　　8 . 2 形态学特征

　　按照 GB/T 18654 . 3 的规定执行。

　　8 . 3 生长与繁殖特性

　　按照 GB/T 18654 . 4 的规定执行。

　　8 . 4 细胞遗传学特征

　　按 8 μg/g~10 μg/g鱼体重剂量体腔注射植物血凝集素(PHA) , 16 h~36 h后再体腔注射秋水仙素溶液，剂量为 3 μg/g~4 μg/g鱼体重。 4 h~5 h后，取头肾按常规气干法制备染色体玻片标本，其余步骤按 GB/T 18654 . 12 的规定执行。

　　8 . 5 分子遗传学特征

　　8 . 5 . 1 总 DNA提取

　　取背部肌肉组织剪碎后用 10%蛋白酶 K 消化，按照标准的酚-氯仿抽提法或者使用试剂盒进行总DNA 的提取。

　　8 . 5 . 2 引物序列

　　扩增引物序列为 F: 5′-AGT ATA AGC GTC TGG GTA GTC-3′, R: 5′-CCT GCA GGA GGA

　　GAY CC-3′。

　　8 . 5 . 3 PCR反应体系

　　反应体系为 50 μL, 每反应体系包括 1 . 25 U 的 Taq DNA 聚合酶;各种反应组分 的 终 浓 度 为 200 nmol/L 的正反向引物;200 μmol/L 的每种 dNTP, 10 × PCR 缓冲液[200 mmol/L Tris-HCl, pH 8.4 ; 200 mmol/L KCl; 100 mmol/L (NH4)2 SO4 ; 15 mmol/L MgCl2]5 μL, 加 Milli-Q H2 O 至 50 μL。基因组 DNA 约为 20 ng。 每组 PCR均设阴性对照用来检测是否存在污染。 PCR参数包括 94 ℃预变性 4 min, 94 ℃变性 40 s, 52 ℃退火 30 s, 72 ℃延伸 1 min,循环 35 次，然后 72 ℃后延伸 7 min。所有

　　PCR均在热循环仪上完成。

　　GB/T 21441—2018

　　8 . 5 . 4 测序

　　扩增产物经纯化后经测序仪直接测序，为了保证序列的准确性，对所有样品均进行双向测序。

　　9 判定规则

　　检测结果不符合第 4 章、第 6 章中任意一条要求的，则判定为不合格项;有不合格项的样品为不合格样品。

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　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　自然海区不同年龄组牙鲆的全长和体重

　　自然海区不同年龄组的全长和体重情况见表 A. 1 。

　　表 A.1 不同年龄组牙鲆全长和体重的实测值