GB/T 40448-2021 麦角检疫鉴定方法

　　ICS 65 . 020 . 0 1 CCS B 16

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 40448—2021

　　麦角检疫鉴定方法

　　Detectionandidentificationofergot

　　2021-08-20 发布 2022-03-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　发

　　布

　　GB/T 40448—202 1

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口 。

　　本文件起草单位：武汉海关技术中心、南京海关动植物与食品检测中心、长春海关技术中心、中国质量认证中心武汉分中心。

　　本文件主要起草人：王振华、王琴、彭超、刘晓宇、赵晖、李乔、曾宪东、郑剑、徐雪、吴翠萍、魏春艳。

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　　麦角检疫鉴定方法

　　1 范围

　　本文件描述了麦角的检疫鉴定方法。

　　本文件适用于植物及其产品中麦角的检疫鉴定。

　　2 规范性引用文件

　　本文件没有规范性引用文件。

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 麦角基本信息

　　学名：cla℃icepsTul.

　　英文名：ergot

　　分类地位：真菌界 Fungi,子囊菌门 Ascomycota,子囊菌亚门 Ascomycotina, 盘菌亚门 Pezizomyco- tina, 粪壳菌纲 Sordariomycetes, 肉座菌目 Hypocreales, 麦角菌科 Clavicipitaceae, 麦角菌属 cla℃iceps。无性世 代 属 无 性 菌 类 Deuteromycetes, 丛 梗 孢 目 Moniliales, 瘤 座 孢 科 Tuberculariaceae, 蜜 孢 霉 属 sphacelia Leveille。麦角有 40 多个种，最常见的是禾草麦角菌(cla℃icepspurpurea)，寄主范围最广。

　　传播途径：植物病残体、受侵染的种子、菌核等是远距离传播主要途径，孢子借风雨或昆虫引起再侵染和流行。

　　麦角的其他信息参见附录 A。

　　5 方法原理

　　根据麦角菌核形态特征，培养基上生长的菌落、菌丝、分生孢子、子囊壳、子囊和子囊孢子形态，结合PCR扩增片段大小和测序结果等特征进行结果判定。

　　6 仪器设备和主要试剂

　　6 . 1 仪器设备

　　生物显微镜(具测量功能)、体视显微镜、PCR 扩增仪、凝胶成像系统、电泳仪、超净工作台、高速冷冻离心机、纯水仪、高压灭菌锅、制冰机、光照培养箱、天平、pH 计、水浴锅、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器。

　　6 . 2 主要试剂

　　除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。

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　　6.2. 1 1. 3%次氯酸钠，琼脂粉，乳酸，SDS, DNA 提取试剂盒，异丙醇，无水乙醇，Tris, HCl, MgCl2 , EDTA,NaOH,KCl,CTAB,TBE,蛋白酶 K,三氯甲烷，苯酚 ∶ 氯仿 ∶ 异戊醇(25 ∶ 24 ∶ 1) 溶液，3 mol/L NaAc(pH 5.2),10×PCR缓冲液(含 25 mmol/L MgSO4) , Taq酶，dNTP、琼脂糖，TAE, 上样缓冲液，溴化乙锭(EB) 。

　　6 . 2 . 2 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA) ：马铃薯浸粉 5 . 0 g, 葡萄糖 20 . 0 g,琼脂 20 . 0 g,蒸馏水定容至1 000 mL。另添加氯霉素 0.1 g,调整 pH 至 5.6 , 121 ℃高压灭菌 20 min。

　　7 检疫鉴定方法

　　鉴定流程图参见附录 B。

　　7 . 1 麦角检测

　　取样品量 1%~5%(若样品少可适量增大比例)的植物及植物产品，用孔径 2 . 5 mm~10 . 0 mm 的套筛过筛，观察筛上物是否有呈黑色、坚硬、角状的物质。

　　7 . 2 麦角形态观察

　　在体视显微镜下观察麦角是否呈长条形、香蕉形，外面是否呈黑色或紫黑色，有纵沟与横裂纹，是否质脆，易折断，断面是否扁形、钝多边形或椭圆形，中心是否呈白色、灰白或粉白色。

　　7 . 3 麦角萌发

　　将麦角放入 70%乙醇浸泡 30 s进行表面消毒，移至 1 . 3%的次氯酸钠溶液中浸泡 1 . 5 min,再用无菌水浸泡 3 min,并冲洗 3 次 。将麦角水平切片，用刀片去除菌皮，将去皮后的麦角插入内盛有 20 mL灭菌 PDA 的三角瓶中央，于 22 ℃ ~25 ℃光照培养箱中培养，10 d后观察菌落。

　　7 . 4 麦角菌培养性状观察

　　将三角瓶中菌丝转到含 PDA培养基的培养基上，22 ℃ ~25 ℃培养 4 d,用 4 mm 的打孔器在菌落边缘打孔取样，将菌落转移至新的装有 PDA培养基的 9 cm 培养皿中央，22 ℃ ~25 ℃光照培养箱，12 h光照/12 h黑暗培养，光照标准为 320 nm~ 380 nm、18 W 黑光灯(近紫外灯)2 支，置于培养皿上方约15 cm 处 。培养皿观察保留到第 12 天 。培养 3 d后开始每日测量菌落直径，直至第 5 天，计算菌落的生长速度。 观察菌落、菌丝、分生孢子、子囊壳、子囊和子囊孢子形态，菌落色素颜色，并测量分生孢子和子囊孢子大小。

　　7 . 5 分子生物学鉴定

　　7 . 5 . 1 DNA提取

　　取疑似麦角菌核 1 g~2 g,称取经液氮研磨后的疑似麦角物质粉末 0 . 1 g~0 . 2 g,采用试剂盒方法或 CTAB方法提取麦角 DNA(按照附录 C进行操作)。

　　7.5.2 PCR扩增

　　引物 1 : ITS 通用引物 ITS 1 : 5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′/ITS 4 : 5′-TCCTCCGCTTAT-

　　TGATATGC-3′

　　引 物 2 : β-微 管 蛋 白 基 因 通 用 引 物 Bt2a: 5′-GGTAACCAAATCGGTGCTGCTTTC-3 /Bt2b:

　　5′-ACCCTCAGTGTAGTGACCCTTGGC-3

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　　25 μL PCR反应体系中含有：10×PCR缓冲液(含 25 mmol/L MgCl2) 2.5 μL,2.5 mmol/L dNTP 0.5 μL, 20 μmol/L正义引物和反义引物各 1.0 μL, 5 U/μL Taq DNA 聚合酶 0.5 μL, 50 ng/μL DNA模板 1.0 μL, ddH2 O 补至 25 μL。

　　PCR反应程序为：95 ℃变性 3 min; 95 ℃变性 30 s, 55 ℃退火 30 s, 72 ℃延伸 30 s, 35 个循环; 72 ℃延伸 10 min。

　　用麦角阳性核酸的标准样品作阳性对照，用灭菌蒸馏水作空白对照。

　　7 . 5 . 3 PCR扩增产物检测

　　扩增产物用 1 . 5%琼脂糖凝胶在 1×TAE缓冲液中电泳，EB染色后用凝胶成像系统分析。

　　7 . 5 . 4 序列比对分析

　　将 PCR产物送到公认的测序公司进行测序，NCBI 网站比对测序结果。

　　8 鉴定特征

　　8 . 1 麦角菌核形态特征

　　麦角的菌核形态近圆柱形至香蕉形，黑色或白色，两端角状，坚硬，长度 1 cm~5 cm,直径 1 mm~ 7 mm,平滑，有纵沟，外部紫黑色，内部淡紫色或灰白色。

　　8 . 2 麦角菌丝及繁殖体形态特征

　　麦角菌落呈圆形，边缘较光滑、洁白、浓密、健壮。 每个菌核产生 20 个 ~30 个子座，有弯曲的细柄，暗褐色;子座近球形，直径 1 mm~ 2 mm, 红褐色;子囊壳全部埋生于子座内，其孔 口稍突出于子座表面;子囊近圆柱形，内含 8 个子囊孢子，子囊孢子呈丝状，无色，无隔膜。

　　病菌形态特征图参见附录 D。

　　9 结果判定

　　根据麦角形态学鉴定特征和分子生物学结果进行综合判定，结果判定可采用以下两种：

　　a) 如病菌与第 8 章描述的鉴定指标相符，则可判定检出麦角;

　　b ) 如病菌与 8 . 1 描述的鉴定指标相符，同时利用 ITS通用引物 ITS 1 与 ITS 4 经 PCR 扩增得到573 bp 大小扩增产物或 β-微管蛋白基因通用引物 Bt2a 与 Bt2b 经 PCR扩增得到 382 bp 大小扩增产物，测序结果通过 NCBI 比对，与预期目标种序列最为接近，则可判定检出麦角。

　　10 样品保存

　　10 . 1 样品保存与处理

　　样品经登记和经手人签字后妥善保存。 对检出麦角的样品应注意阴凉、干燥保存，以备复核。 该类样品保存期满后应经高压灭菌后方可处理。

　　10 . 2 菌株保存与处理

　　从检测样品中分离并鉴定为麦角的菌株，应妥善保存。 将菌株接种于 PDA培养基斜面上，20 ℃ ~ 25 ℃ 培养 5 d,然后 4 ℃冰箱保存，或将菌丝块转入20%灭菌甘油并混匀，-80 ℃长期保存。 对不需要

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　　长期保存的菌株应及时高压灭菌处理。

　　10 . 3 结果记录与资料保存

　　完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有实验人员和审核人员签字。

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　　附 录 A (资料性)

　　麦角相关信息

　　A.1 寄主范围

　　主要寄主是大麦、小麦、黑麦等禾本科(Gramineae)植物，包括冰草属(Agropyron)、冰草(A.crista- tum)、剪股颖属(Agrostis)、燕麦(A℃enasati℃a)、孔颖草(Bothriochloapertusa)、雀麦属(Bromus)、无芒雀麦(B.inermis)、拂子茅属(calamagrostis)、细柄草(capillipedium par℃iflorum)、狗牙根属(cyn- odon)、鸭茅属(Dactylis)、鸭茅(D.glomerata)、稗属(Echinochloa spp.)、披碱草(Elymusdahuricus)、野麦(E.mollis)、匍匐冰草(E.repens)、老芒麦(E.sibiricus)、异源四倍体披碱草(E.trachycaulus)、羊茅属(Festuca)、苇状羊茅(F.arundinacea)、大麦属(Hordeum)、布顿大麦草(H.bogdanii)、短芒大麦草(H.bre℃isubulatum)、大麦(H.℃ulgare)、天山赖草(Leymustianschanicus)、毒麦属(Lolium)、黑麦草(L.perenne)、芒(Miscanthussinensis)、黍属(panicum)、狼尾草属(pennisetum)、狼尾草(p.alope- curoides)、梯牧草属(phleum)、早熟禾属(poa)、草地早熟禾(p.pratensis)、犬草(Roegneriacanina)、纤毛鹅观草(R.ciliaris)、竖立鹅观草(R.japonensis)、弯穗鹅观草(R.semicostata)、河八王(saccharum narenga)、黑 麦 属(secale)、黑 麦(s.cereale)、高 粱(sorghum bicolor)、大 油 芒(spodiopogon sibiricus)、阿拉伯黄背草(Themedatriandra)、小麦属(Triticum)、普通小麦(T.aesti℃um)、高粱属(sorghum)。

　　A.2 为害症状

　　真菌孢子或菌丝体主要为害花部，先产生黄色蜜露状黏液，以后花部逐渐膨大，在结麦粒的部位形成紫黑色，长角形菌核，叫做麦角。 一穗上仅局部小穗被侵，生成 1 个到几个麦角，但与之相邻的小花常不孕。 麦角的大小因寄主植物的不同而有差异，麦角长度约在 1 cm~3 cm 范围内，直径约为 0 . 5 cm。麦角有 40 多个种，以禾草麦角菌(cla℃icepspurpurea)寄主范围最广，最常见。 禾草麦角菌多为细长角形，香蕉形，大小因草种不同相差很大。 麦角病分布很广，花期潮湿地区，牧草发病尤重。

　　A.3 危害程度

　　麦角含有毒素，人和牲畜食后会发生恶性痉挛，有时引起头昏，呕吐。 急性麦角中毒可造成死亡。种子中混杂麦角超过 0 . 5%的黑麦即不能食用和作饲料。 在牧区，常因误食麦角造成母畜流产，严重时

　　达 40%~60%。

　　A.4 分布(国家和地区)

　　A.4. 1 禾草麦角菌[clavicepspurpurea(Fr.)Tul.1883] 的分布

　　亚洲：土耳其、朝鲜、菲律宾、哈萨克斯坦、韩国、吉尔吉斯斯坦、尼泊尔、日本、亚美尼亚、伊朗、以色列、印度、中国。

　　北美洲：加拿大、美国、墨西哥。

　　南美洲：阿根廷、巴西、哥伦比亚、秘鲁、乌拉圭、智利。

　　欧洲：爱尔兰、奥地利、保加利亚、比利时、冰岛、波兰、丹麦、德国、俄罗斯、法国、法罗群岛、芬兰、荷兰、捷克共和国、斯洛伐克共和国、罗马尼亚、挪威、葡萄牙、塞尔维亚、黑山、瑞典、瑞士、西班牙、希腊、匈牙利、意大利、英国。

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　　非洲：阿尔及利亚、埃塞俄比亚、几内亚、津巴布韦、肯尼亚、马拉维、毛里求斯、毛里塔尼亚、摩洛哥、南非、圣赫勒拿、苏丹、坦桑尼亚。

　　A.4.2 非洲麦角菌(clavicepsafricana Frederickson，Mantle& deMilliano)的分布

　　亚洲：日本、泰国、也门、印度。

　　北美洲：多米尼加共和国、海地、洪都拉斯、美国、墨西哥、牙买加、波多黎各。

　　南美洲：阿根廷、巴拉圭、巴西、玻利维亚、哥伦比亚、委内瑞拉。

　　非洲：埃塞俄比亚、安哥拉、博茨瓦纳、布隆迪、加纳、津巴布韦、肯尼亚、莱索托、卢旺达、马拉维、莫桑比克、南非、尼 日利亚、塞内加尔、斯威士兰、坦桑尼亚、乌干达、赞比亚。

　　大洋洲：澳大利亚、新西兰。

　　A.4.3 百慕大草麦角(clavicepscynodontis Langdon 1954)的分布

　　非洲：津巴布韦、马拉维、尼 日利亚。

　　欧洲：罗马尼亚。

　　A.4.4 clavicepsfusiformis Loveless的分布

　　非洲：博茨瓦纳、布基纳法索、冈比亚、加纳、津巴布韦、马拉维、马里、毛里塔尼亚、尼 日尔、尼 日利亚、塞内加尔、苏丹、索马里、坦桑尼亚、乌干达、赞比亚、乍得。

　　亚洲：巴基斯坦、印度。

　　A.4.5 大麦角(clavicepsgigantea SF Fuentes，Isla，ullstrup& AE Rodr1964)的分布

　　北美洲：墨西哥。

　　A.4.6 clavicepsmaximensis T.Theis1952 的分布

　　非洲：塞拉利昂、坦桑尼亚。

　　A.4.7 小头麦角[clavicepsmicrocephala(wallroth)Tulasne1853]的分布

　　中国的吉林、辽宁、内蒙古。

　　A.4.8 clavicepspallida(G.winter)Henn.1899 的分布

　　大洋洲：巴布亚新几内亚、斐济。

　　非洲：几内亚、加纳、津巴布韦、尼 日利亚、塞拉利昂、赞比亚。

　　南美洲：巴西。

　　亚洲：印度。

　　A.4.9 雀稗麦角(lavicepspaspaliStev.& Hall)的分布

　　北美洲：巴拿马、哥斯达黎加、古巴、美国、墨西哥、萨尔瓦多、波多黎各。

　　南美洲：阿根廷、巴西、委内瑞拉、乌拉圭。

　　大洋洲：澳大利亚、巴布亚新几内亚、斐济、夏威夷群岛、新西兰。

　　非洲：津巴布韦、肯尼亚、毛里求斯、南非、尼 日利亚、塞拉利昂、赞比亚。

　　欧洲：法国、意大利、塞尔维亚、黑山。

　　亚洲：以色列、印度、土耳其、日本、伊朗、中国。

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　　A.4. 10 蜀黍麦角菌(clavicepssorghikulkarniseshadri& Hegde.)的分布

　　非洲：埃塞俄比亚、博茨瓦纳、加纳、津巴布韦、肯尼亚、卢旺达、莫桑比克、南非、尼 日利亚、塞内加尔、苏丹、坦桑尼亚、乌干达、赞比亚。

　　亚洲：菲律宾、缅甸、日本、斯里兰卡、也门、印度、中国。

　　A.5 侵染循环

　　麦角(即菌核)与作物同时成熟。 当作物收获时，麦角掉落土中或混入种子中，病菌菌核在土壤中越冬，春季萌发出土，每个麦角萌发生出 10 个 ~20 个子实体，子实体呈蘑菇状，头部膨大呈圆球形，称子座，其直径 1 mm~ 2 mm, 灰白色或紫红色，下有一长而弯曲的细柄。 子座表层下埋生一层子囊壳，子囊壳瓶状孔口稍突出于子座的表面，每个子囊壳内产生数个长圆筒形子囊，每个子囊内产生 8 个线状的单细胞的子囊孢子。 到作物开花时，子囊孢子借风雨、昆虫传播到寄主植物的花部，侵染小花。 经 7 d左右产生黄色蜜露状黏液，约半月后形成菌核。 菌核成熟后落入土中，越冬后成为第二年初侵染的主要来源。 蜜露黏液内有大量分生孢子，由昆虫将黏附在体上的孢子由病株带到健株而传播病害。 此外，孢子还可借风力和雨滴飞溅传播或病穗直接碰撞扩大传播。 种子中混杂的菌核也是侵染来源之一 。作物开花后 20 d,被侵染的子房就变成坚硬的麦角。

　　A.6 流行规律

　　寄主植物开花期愈长，作物的外颖张得愈大，受侵染的机会愈多。 开花期间潮湿多雨，有利于病菌的传播和侵染。 春季地面湿润，菌核易于萌发。 菌核贮存一年以上便丧失生命力。 菌核的孢子可由风散布到很远的范围。 麦类作物容易发生麦角病的次序是：黑麦 >小黑麦 >大麦 >硬粒小麦 >普通小麦 >燕麦。

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　　附 录 B

　　(资料性)

　　麦角检疫鉴定流程图

　　麦角检疫鉴定流程图见图 B. 1 。

　　图 B.1 麦角检疫鉴定流程图

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　　附 录 C

　　(规范性)

　　麦角 DNA 的提取方法

　　C.1 试剂盒提取麦角 DNA 的方法

　　C.1 . 1 将麦角样品用液氮碾碎。

　　C.1 .2 取 40 mg 到 1.5 mL EP 管，加 600 μL核酸裂解液。

　　C.1 .3 65 ℃水浴 20 min, 温和的混匀。

　　C.1 .4 取出回温到 37 ℃ ,加 RNA酶 3 μL。

　　C.1 .5 温和的混匀，放 37 ℃ 15 min。

　　C.1 .6 冷却至室温，加蛋白沉淀液 200 μL,混匀。

　　C.1 .7 14 000 r/min离心 3 min, 取上清 600 μL。

　　C.1 .8 加入异丙醇 600 μL,温和的混匀，静置 5 min。

　　C.1 .9 14 000 r/min离心 1 min,弃掉上清，加 70%乙醇 600 μL, 温和的颠倒混匀。

　　C.1 . 10 14 000 r/min离心 1 min,弃上清(用枪吸干)，放置于吸水纸上晾干(15 min)。

　　C.1 . 1 1 加入 100 μL DNA重悬液，如果 DNA很少，就加 30 μL, 65 ℃温育 1 h 或 4 ℃过夜。

　　C.1 . 12 14 000 r/min离心 1 min, 取 1 μL进行 PCR扩增。

　　C.2 CTAB法提取麦角 DNA 的方法

　　C.2. 1 称取经液氮处理的疑似麦角物质粉末 0 . 1 g, 移到灭菌的 2 . 0 mL 离心管中。 离心管中加入300 μL~500 μL CTAB缓冲液(其中含 0.1 g蛋白酶 K)混匀，65 ℃ 水浴 1 h。

　　C.2.2 13 000g 离心 5 min~ 10 min, 保留上清液;加入 500 μL 三氯甲烷 ∶ 异戊醇( 24 ∶ 1) 混匀; 13 000g 离心 5 min~10 min,保留上清液;再加入 500 μL三氯甲烷 ∶ 异戊醇(24 ∶ 1) 混匀;13 000g离心 5 min~10 min,保留上清液。

　　C.2.3 加入 1 mL异丙醇轻轻混匀，-70 ℃放置 1 h 或 - 20 ℃过夜;13 000g 离心 30 min, 可见 DNA沉淀;70%乙醇洗涤 DNA沉淀，室温干燥;用 30 μL~50 μL Tris-EDTA缓冲液溶解 DNA,待用。

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　　附 录 D

　　(资料性)

　　禾草麦角菌clavicepspurpurea(Fr.)Tul.1883 为害症状以及病菌形态特征

　　D.1 禾草麦角菌clavicepspurpurea(Fr.)Tul.1883 为害症状及病菌形态特征图

　　禾草麦角菌 cla℃icepspurpurea ( Fr.) Tul.1883 为害症状及病菌形态特征图见图 D. 1~图 D. 4 。

　　图 D.1 禾草麦角菌clavicepspurpurea小麦上为害症状

　　图 D.2 受影响的小穗分泌蜜露，其中包含可以引发继发感染的分生孢子

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　　注 1 : A、B— 菌核(标尺 0 . 5 mm);C、D— 菌核的萌发。

　　注 2：引 自 https://www.pflanzenkrankheiten.ch/)。

　　图 D.3 禾草麦角菌核及其萌发

　　注 1 : E—子 座(标 尺 100 μm);F—子 囊 壳( 标 尺 10 μm); G—子 囊( 标 尺 10 μm) ; H —子 囊 孢 子(标 尺10 μm);I—分生孢子(标尺 10 μm)。

　　注 2：引 自 https://www.pflanzenkrankheiten.ch/)。

　　图 D.4 禾草麦角菌形态特征

　　D.2 禾草麦角菌clavicepspurpurea(Fr.)Tul.1883 形态特征描述

　　菌核细长呈香蕉形，圆柱形，端部是圆形的，并且笔直至锐利弯曲。 果皮坚硬，紫黑色，有皱纹或有

　　纵脊，菌核的内部灰色到 白色，( 10 mm~ 25 mm) × 3 mm;子座柄细长，头部扁球形，直径 1 mm~ 2 mm,红褐色，外缘生子囊壳;子囊壳全部埋于子座内或稍外露，(200 μm~250 μm) × (150 μm~175 μm) ;子囊细长呈棍状，(100 μm~125 μm) × 4 μm,先端壁厚，有中心孔，含 8 个丝状的子囊状子囊孢子;子囊

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　　孢子无色，(85 μm~95 μm) × (1.0 μm~1.5 μm) ,(50 μm~76 μm) × (0.6 μm~0.7 μm)。无性世代为

　　麦角蜜孢霉，在寄主子房 内的 菌 丝 垫 中 形 成 不 规 则 的 腔 室，产 生 孢 子;分 生 孢 子 卵 形、单 胞、无 色， (4 μm~6 μm) × (2 μm~3 μm);它们混在黏液中溢出小穗外。 菌核的大小取决于宿主：它随宿主种子的大小而增加。 黑麦的菌核可能比小麦的菌核更深裂。

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　　参 考 文 献

　　[1] 刘家熙.麦角菌[J].生物学通报，1997,32(4) : 17.

　　[2] 方中达.植病研究方法[M] . 北京：中国农业出版社.1998 .

　　[3] 孙相辉，纪燕玲等.部分禾本科植物麦角病的发生及其病原真菌的特征[J] . 草业科学，2008 . Vol. 25 , No. 12 : 104-110 .

　　[4] 吴新华，王良华.麦角菌及其危害[J] . 中国检验检疫，1999 . (8) : 37-38 .

　　[5] Sylvie Pa讠outov包，Jana Olovsk包，Marek Linka, Renata Kolínsk包，and Miroslav Flieger.Che- moraces and Habitat Specialization of cla℃icepspurpurea Populations.January 2001 ;Applied and En- vironmental Microbiology 66(12) : 5419-25.

　　[6] M.Cerria, L. Realea, C. Morettia, R.Buonaurioa, et al.cla℃icepsarundinis identification and its role in the die-back syndrome of phragmites australis populations in central Italy. Plant Biosystems-An International Journal Dealing with all Aspects of Plant Biology, 2017.

　　[7] Lionel N.Eleuterius & Samuel P.Meyers.cla℃icepspurpurea on Spartina in Coastal Mar- shes.Mycologia,2018,66(6) : 978-986.

　　[8] Alison J.Fisher,J.M.DiTomaso, and T.R.Gordon.Conidial morphology and ecological char- acteristics as diagnostic tools for identifying cla℃iceps purpurea from salt-marsh habitats. Canadian Journal of Plant Pathology.2005.27 : 389-395.

　　[9] Pa讠outov包 S, et al. , Delimitation of cryptic species inside cla℃iceps purpurea.Fungal Biology. 2014 .

　　[10] Van der Linde EJ , et al.Ergot species of the cla℃icepspurpurea group from South Africa. Fungal Biology (2016) .

　　[11] M.Didek-brumec, et al.Relationship between the and Productivity of Ergot Claviceps Life Cycle Alkaloids.Critical Reviews in Biotechnology,16(3) : 257-299 (1996) .