GB/T 5537-2008 粮油检验 磷脂含量的测定

　　ICS 67 . 200 . 10 X 14

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 5537—2008代替 GB/T 5537—1985

　　粮油检验 磷脂含量的测定

　　Inspection ofgrain and oils—Determination ofphosphatidecontent

　　2008-1 1-04 发布 2009-01-20 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

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　　中 华 人 民 共 和 国

　　国 家 标 准

　　粮油检验 磷脂含量的测定

　　GB/T 5537—2008

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　　中 国 标 准 出 版 社 出 版 发 行

　　北京复兴门外三里河北街 16 号

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　　开本 880 × 1230 1/16 印张 0 . 5 字数 9 千字

　　2009 年 1 月第一版 2009 年 1 月第一次印刷

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　　书号：155066 ·1-35504

　　如有印装差错 由本社发行中心调换

　　版权专有 侵权必究

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　　GB/T 5537—2008

　　前 言

　　本标准的第一法参考了美国油脂化学协会 AOCS Official Method Ca 12-55《磷》(英文版)。

　　本标准代替 GB/T 5537—1985《植物油脂检验 磷脂测定法》。

　　本标准与 GB/T 5537—1985 的主要技术差异为：

　　— 标准名称由《植物油脂检验 磷脂测定法》改为《粮油检验 磷脂含量的测定》;

　　— 修改了标准储备液制备中磷酸二氢钾的称样量;

　　— 修改了比色皿的规格;

　　— 修改了空白调零时使用的试样;

　　— 修改了制备被测液时称样量;

　　— 修改了结果计算的方式 。

　　本标准国家粮食局提出 。

　　本标准由全国粮油标准化技术委员会归 口 。

　　本标准起草单位：中粮北海粮油工业(天津)有限公司 。

　　本标准主要起草人：郝克非 、李学红 。

　　本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

　　—GB/T 5537—1985 。

　　Ⅰ

　　GB/T 5537—2008

　　粮油检验 磷脂含量的测定

　　1 范围

　　本标准规定了植物油脂中磷脂含量测定的术语和定义 、原理 、仪器和用具 、试剂和溶液 、操作步骤 、结果计算和重复性 。

　　本标准适用于植物原油 、脱胶油及成品油 。

　　本标准第一法为仲裁法 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 。

　　GB/T 5524 动植物油脂 扦样

　　GB/T 15687 动植物油脂 试样的制备

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本标准 。

　　3 . 1

　　磷脂 phosphatide

　　由甘油 、脂肪酸 、磷酸 、氨基醇和环醇等构成的化合物 。

　　第一法 钼蓝比色法

　　4 原理

　　植物油中的磷脂经灼烧成为五氧化二磷，被热盐酸变成磷酸，遇钼酸钠生成磷钼酸钠，用硫酸联氨还原成钼蓝，用分光光度计在波长 650 nm,测定钼蓝的吸光度，与标准曲线比较，计算其含量 。

　　5 仪器和用具

　　5 . 1 分光光度计：具 1 cm 比色皿 。

　　5 . 2 分析天平：分度值 0 . 000 1 g 。

　　5 . 3 马弗炉：可控制温度，主要使用温度在 550 ℃ ~ 600 ℃ 。

　　5 . 4 封闭电炉：可调温 。

　　5 . 5 沸水浴 。

　　5 . 6 瓷坩埚或石英坩埚：50 mL、100 mL 能承受的最低温度 600 ℃ 。

　　5 . 7 容量瓶：100 mL、500 mL、1 000 mL 。

　　5 . 8 移液管：1 mL、2 mL、5 mL、10 mL 。

　　5 . 9 比色管：50 mL 。

　　1

　　GB/T 5537—2008

　　6 试剂和溶液

　　警告：使用本标准的人员应有正规实验室工作的实际经验，本标准并未指出所有可能的安全问题 。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法律规定的条件 。

　　所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水 。

　　6 . 1 盐酸：1 . 19 g/mL 。

　　6 . 2 氧化锌 。

　　6 . 3 氢氧化钾 。

　　6 . 4 浓硫酸：1 . 84 g/mL 。

　　6 . 5 钼酸钠 。

　　6 . 6 硫酸联氨 。

　　6 . 7 磷酸二氢钾：使用前在 101 ℃下干燥 2 h 。

　　6 . 8 2 . 5%钼酸钠稀硫酸溶液：量取 140 mL 浓硫酸(6 . 4) ,注入到 300 mL 水 中 。 冷 却 至 室 温，加 入

　　12 . 5 g 钼酸钠，溶解后用水定容至 500 mL,充分摇匀，静置 24 h备用 。

　　6 . 9 0 . 015%硫酸联氨溶液：将 0 . 15 g硫酸联氨(6 . 6)溶解在 1 L水中 。

　　6 . 10 50%氢氧化钾溶液：将 50 g 氢氧化钾(6 . 3)溶解在 50 mL水中 。

　　6 . 1 1 1 ∶ 1 盐酸溶液：将盐酸(6 . 1)溶解在等体积的水中 。

　　6 . 12 磷酸盐标准储备液：称取干燥的磷酸二氢钾(6 . 7) 0 . 438 7 g,用水溶解并稀释定容至 1 000 mL ,此溶液含磷 0 . 1 mg/mL 。

　　6 . 13 标准曲线用磷酸盐标准溶液：用移液管吸取标准储备液(6 . 12) 10 mL 至 100 mL 容量瓶中，加水稀释并定容 。此溶液含磷 0 . 01 mg/mL 。

　　7 操作步骤

　　7 . 1 扦样

　　按 GB/T 5524 执行 。

　　7 . 2 试样的制备

　　按 GB/T 15687 执行 。

　　7 . 3 绘制标准曲线

　　取六支比色管(5 . 9) ,编成 0 、1 、2 、4 、6 、8 六个号码 。按号码顺序分别 注 入 标 准 溶 液(6 . 13) 0 mL、 1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL,再按顺序分别加水 10 mL、9 mL、8 mL、6 mL、4 mL、2 mL 。接着向六支比色管中分别加入硫酸联氨溶液(6 . 9)8 mL,钼酸钠溶液(6 . 8) 2 mL 。 加塞，振摇 3 次 ~ 4 次，去塞，将比色管放入 沸 水 浴 ( 5 . 5) 中 加 热 10 min , 取 出，冷 却 至 室 温 。 用 水 稀 释 至 刻 度，充 分 摇 匀，静 置10 min 。移取该溶液至干燥 、洁净的比色皿中，用分光光度计在 650 nm处，用试剂空白调整零点，分别测定吸光度 。 以吸光度为纵坐标，含磷量(0 . 01 mg、0 . 02 mg、0 . 04 mg、0 . 06 mg、0 . 08 mg) 为横坐标绘制标准曲线 。

　　7 . 4 制备试液

　　根据试样的磷脂含量，用坩埚(5 . 6) 称取制备好的试样(7 . 2) ,成品油试样称量 10 g,原油及脱胶油称量 3 . 0 g ~ 3 . 2 g(精确至 0 . 001 g) 。加氧化锌(6 . 2) 0 . 5 g,先在电炉上缓慢加热至样品变稠，逐渐加热至全部炭化，将坩埚送至 550 ℃ ~ 600 ℃的马弗炉中灼烧至完全灰化(白色)，时间约 2 h 。取出坩埚冷却至室温，用 10 mL盐酸溶液(6 . 11)溶解灰分并加热至微沸，5 min 后停止加热，待溶解液温度降至室温，将溶解液过滤注入 100 mL容量瓶中，每次用大约 5 mL热水冲洗坩埚和滤纸共 3 次 ~ 4 次，待滤液冷却到室温后 。用氢氧化钾溶液(6 . 10)中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸溶液(6 . 11) 使氧化锌沉淀全部溶解，再加 2 滴 。最后用水稀释定容至刻度，摇匀 。制备被测液时同时制备一份样品空白 。

　　2

　　GB/T 5537—2008

　　7 . 5 比色

　　用移液管吸取被测液(7 . 4) 10 mL,注入 50 mL 比色管中 。 加入硫酸联氨溶液(6 . 9) 8 mL,钼酸钠溶液(6 . 8)2 mL 。加塞，振摇 3 次 ~ 4 次，去塞，将比色管放入沸水浴中加热 10 min,取出，冷却至室温 。用水稀释至刻 度，充 分 摇 匀，静 置 10 min 。 移 取 该 溶 液 至 干 燥 、洁 净 的 比 色 皿 中，用 分 光 光 度 计 在650 nm 下，用试样空白调整零点，测定其吸光度 。

　　8 结果计算

　　试样中磷脂含量按式(1)计算：

　　犡 = 犿(犘) × 犞(犞)2(1) × 26 . 31 …………………………( 1 )

　　式中：

　　犡— 磷脂含量，单位为毫克每克(mg/g) ;

　　犘— 标准曲线查得的被测液的含磷量，单位为毫克(mg) ;

　　犿— 试样质量，单位为克(g) ;

　　犞1 — 样品灰化后稀释的体积，单位为毫升(mL) ;

　　犞2 — 比色时所取的被测液的体积，单位为毫升(mL) ;

　　26 . 31 — 每毫克磷相当于磷脂的毫克数 。

　　当被测液的消光值 大 于 0 . 8 时，需 适 当 减 少 吸 取 被 测 液 的 体 积，以 保 证 被 测 液 的 消 光 值 在 0 . 8以下 。

　　每份样品应平行测试两次，平行试样测定的结果符合精密度要求时，取其算术平均值作为结果，计算结果保留小数点后三位 。

　　9 重复性

　　在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10% 。

　　第二法 重量法

　　10 原理

　　植物油中的磷脂吸水膨胀，密度增大，使其由絮状悬浮物转变为沉淀物 。将试样水化后，用丙酮反复洗涤过滤，由于磷脂不溶于丙酮，油溶于丙酮，从而可使得磷脂与油分离 。称量磷脂的质量，计算其含量 。该方法所得到的沉淀过滤物不完全是磷脂，还有其他不溶于丙酮的类脂物质 。

　　1 1 仪器和用具

　　1 1 . 1 玻璃漏斗 、漏斗架 。

　　1 1 . 2 分析天平：分度值 0 . 000 1 g 。

　　1 1 . 3 电烘箱：可控制在 103 ℃ ±2 ℃ 。

　　1 1 . 4 200 mL烧杯 。

　　1 1 . 5 抽滤瓶 。

　　1 1 . 6 锥形瓶 。

　　1 1 . 7 定量滤纸 。

　　12 试剂

　　丙酮：分析纯 。

　　GB/T 5537—2008

　　GB/T 553 7 2 0 0 8

　　—

　　13 操作步骤

　　13 . 1 按 7 . 1 ~ 7 . 2 制备试样 。

　　13 . 2 取均匀的样品约 100 mL 置于锥形瓶中，加热至 90 ℃左右时进行过滤 。 用烧杯称取试样 25 g

　　(m0 ),加热至 80 ℃ ,加水 2 . 0 mL ~ 2 . 5 mL,充分搅拌使之水化，在室温下静置过夜，或进行离心沉淀 。倾出上层清液，用已知恒重的滤纸(m1 )(或抽滤)进行过滤，待滤液全部滤出后，用冷的丙酮把杯内残留的沉淀冲洗入滤纸中，继续用丙酮洗涤滤纸和沉淀，洗至无油迹为止 。待滤纸和沉淀上的丙酮挥尽后，送入 105 ℃烘箱中烘至恒重并准确称量(m2 ) 。

　　14 结果计算

　　试样中磷脂含量按式(2)计算：

　　Y …………………………( 2 )

　　式中：

　　Y— 磷脂含量，单位为毫克每克(mg/g) ;

　　m2 — 沉淀物和滤纸的质量，单位为克(g) ;

　　m1 — 滤纸质量，单位为克(g) ;

　　m0 — 试样质量，单位为克(g) 。

　　每份样品应平行测试两次，平行试样测定的结果符合精密度要求时，取其算术平均值作为结果，计算结果保留小数点后三位 。

　　15 重复性

　　在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10% 。

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　　书号：155066 ·1-35504