GB/T 14926.57-2008 实验动物 犬细小病毒检测方法

　　ICS 65 . 020 . 30 B 44

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 14926 . 57—2008代替 GB/T 14926 . 57—2001

　　实验动物 犬细小病毒检测方法

　　Laboratory animal—Method forexamination ofCanineparvovirus

　　2008-12-03 发布 2009-03-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 14926 . 57—2008

　　前 言

　　GB/T 14926《实验动物》共 54 个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法 。

　　本部分自实施之日起代替 GB/T 14926 . 57—2001《实验动物 犬细小病毒检测方法》。

　　本部分与 GB/T 14926 . 57—2001 相比主要技术差异如下：

　　a) 在 “3 原理 ”中 “或根据 CPV在一定的条件下，能凝集猪的红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测犬血清中 CPV抗体 ”修改为 “或根据 CPV 在一定的条件下，能凝集猪或恒河猴的红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测犬血清中 CPV抗体 ”;

　　b) “4 . 1 . 6 猪红细胞 ”修改为“4 . 1 . 6 猪或恒河猴红细胞 ”;

　　c) “6 结果判定 ”中增加了“6 . 3 基础级犬群体免疫抗体合格率 免疫抗体合格率=(被检动物抗体阳性数/被检动物总数)× 100% 。基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于 70%以上可判为该犬群免疫合格 ”内容 。

　　本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归 口 。

　　本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草 。

　　本部分主要起草人：田克恭 、贺争鸣 、范薇 。

　　本部分所代替标准的历次版本发布情况为：

　　—GB/T 14926 . 57—2001 。

　　Ⅰ

　　GB/T 14926 . 57—2008

　　实验动物 犬细小病毒检测方法

　　1 范围

　　GB/T 14926 的本部分规定了犬细小病毒(CPV)的检测方法 、试剂等 。

　　本部分适用于犬 CPV 的检测 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过 GB/T 14926 的本部分的引用而成为本部分的条款 。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本 适 用 于 本部分 。

　　GB/T 14926 . 50 实验动物 酶联免疫吸附试验

　　GB/T 14926 . 54 实验动物 血凝抑制试验

　　3 原理

　　根据免疫学原理，采用 CPV抗原检测犬血清中 CPV抗体;或根据 CPV在一定的条件下，能凝集猪或恒河猴的红细胞，这种凝集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测犬血清中 CPV抗体 。

　　4 主要试剂和器材

　　4 . 1 试剂

　　4 . 1 . 1 ELISA抗原

　　4 . 1 . 1 . 1 特异性抗原

　　CPV感染 FK81 细 胞，接 种 3 d ~ 5 d 后，当 病 变 达 + + + ～ + + + +( - 阴 性;+轻;+ + 中; +++重;++++严重，下同)时收获 。冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成 ELISA抗原 。

　　4 . 1 . 1 . 2 正常抗原

　　FK81 细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液 。

　　4 . 1 . 2 血凝素

　　CPV 接种 FK81 细胞，培养 3 d ~ 5 d , 当病变达+++ ～++++时收获 。冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液分装后低温保存 。

　　4 . 1 . 3 阳性血清

　　CPV 实验感染或自然感染的犬血清 。

　　4 . 1 . 4 阴性血清

　　无 CPV感染 、未经免疫的犬血清 。

　　4 . 1 . 5 酶结合物

　　辣根过氧化物酶标记羊或兔抗犬 IgG抗体 。

　　4 . 1 . 6 猪或恒河猴红细胞 。

　　4 . 2 器材

　　4 . 2 . 1 酶标仪 。

　　4 . 2 . 2 37 ℃培养箱或水浴箱 。

　　1

　　GB/T 14926 . 57—2008

　　4 . 2 . 3 4 ℃冰箱 。

　　5 检测方法

　　5 . 1 采用 ELISA方法(见 GB/T 14926 . 50)进行血清学检测 。

　　5 . 2 采用 HAI 方法(见 GB/T 14926 . 54)进行血清学检测 。

　　6 结果判定

　　6 . 1 基础级犬，接种疫苗后，经 ELISA 检测抗体效价大于等于 1 ∶ 160 , 或 HAI 检测抗体效价大于等于 1 ∶ 80 判为合格 。

　　6 . 2 SPF级犬，不应进行疫苗接种，对阳性检测结果，选用同一种方法或另一种方法重试 。 如为阳性则判为阳性 。

　　6 . 3 基础级犬群体免疫抗体合格率：

　　免疫抗体合格率=(被检动物抗体阳性数/被检动物总数)× 100%

　　基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于 70%以上可判为该犬群免疫合格 。

　　7 结果报告

　　根据判定结果，作出报告 。

　　2

　　GB/T 1 4 92 6 57 2 0 0 8

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　　2009 年 2 月第一版 2009 年 2 月第一次印刷

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