GB/T 21108-2025 饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定 高效液相色谱-串联质谱法

　　ICS 65. 120 CCS B 46

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 21108—2025

　　代替 GB/T21108—2007,GB/T 8381.9—2005

　　饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定高效液相色谱-串联质谱法

　　Determination ofchloramphenicol,thiamphenicoland florfenicolin feeds— High performanceliquid chromatography-tandem massspectrometry

　　2025-08-01发布 2026-02-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 21108—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　本文件代替 GB/T21108—2007《饲料中氯霉素的测定 高效液相色谱串联质谱法》和 GB/T 8381. 9— 2005《饲料中氯霉素的测定 气相色谱法》,本文件以 GB/T 21108—2007为主 ,整合了 GB/T 8381. 9— 2005的内容 。本文件与 GB/T 21108—2007相比 ,除结构调整和编辑性改动外 ,主要技术变化如下 :

　　a) 更改了适用范围 、检出限和定量限(见第 1 章 ,GB/T 21108—2007的第 1 章) ;

　　b) 更改了原理(见第 4章 ,GB/T 21108—2007的第 3 章) ;

　　c) 更改了试验步骤(见第 8章 ,GB/T 21108—2007的第 7章) 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归 口 。

　　本文件起草单位 :广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所 、广东农科监测科技有限公司 、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 、海南威尔检测技术有限公司 、广电计量检测集团股份有限公司 。

　　本文件主要起草人 :王威 利 、王 旭 、林 雪 贤 、邓 诣 群 、万 凯 、樊 霞 、吴 学 贵 、季 天 荣 、索 德 成 、刘 晓 露 、丁晨红 、刘振妮 、陈惠婷 、陈智慧 、王一晨 、蓝梦哲 、崔泽锋 、李丽珍 、林奕云 、刘香香 。

　　本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 :

　　—GB/T 8381. 9—2005,2005年首次发布 ;

　　—GB/T 21108—2007,2007年首次发布 ;

　　— 本次为第一次修订 。

　　Ⅰ

　　GB/T 21108—2025

　　饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的测定

　　高效液相色谱-串联质谱法

　　1 范围

　　本文件描述了饲料中氯霉素 、甲砜霉素和氟苯尼考的高效液相色谱-串联质谱测定方法 。

　　本文件适用于配合饲料 、浓缩饲料 、精料补充料 、添加剂预混合饲料 、动物源性饲料原料和混合型饲料添加剂中氯霉素 、甲砜霉素和氟苯尼考的测定 。

　　本文件氯霉素的检出限为 1 μg/kg,定量限为 2 μg/kg,甲砜霉素和氟苯尼考的检出限为 5 μg/kg,定量限为 15 μg/kg。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T 20195 动物饲料 试样的制备

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义 。

　　4 原理

　　试样中的氯霉素 、甲砜霉素和氟苯尼考在碱性条件下用乙酸乙酯提取 ,氮气吹干 ,用水复溶 、正己烷脱脂 ,液相色谱-串联质谱仪测定 , 内标法定量 。

　　5 试剂或材料

　　除非另有规定 ,仅使用分析纯试剂 。

　　5. 1 水 :GB/T 6682,一级 。

　　5.2 甲醇 :色谱纯 。

　　5.3 氨水 。

　　5.4 乙酸乙酯 。

　　5.5 正己烷 。

　　5.6 标准储备溶液(1mg/mL) :称取氯霉素(CAS号 : 56-75-7,纯度不低于 98%) 、甲砜霉素(CAS号 : 15318-45-3,纯度不低于 98%)和氟苯尼考(CAS号 : 73231-34-2,纯度不低于 98%) 标准品各 10 mg(精确至 0. 01 mg) ,分别置于 10 mL容 量 瓶 中 , 用 甲 醇(5. 2) 溶 解 、定 容 , 混 匀 。 - 18 ℃以 下 保 存 , 有 效 期6个月 。或购买标准溶液 。

　　1

　　GB/T 21108—2025

　　5.7 混合标准中间溶液 :分别准确移取氯霉素标准储备溶液(5. 6)0. 2 mL, 甲砜霉素和氟苯尼考标准储备溶液(5. 6)各 1 mL于 100 mL容量瓶中 ,用甲醇(5. 2) 稀释制成氯霉素质量浓度为 2 μg/mL、甲砜霉素和氟苯尼考质量浓度为 10 μg/mL 的混合标准中间溶液 。 -18 ℃以下保存 ,有效期 3个月 。

　　5. 8 混合标准工作溶液 :准确移取 1 mL混合标准中间溶液(5. 7) 于 10 mL容量瓶中 ,用甲醇(5. 2) 稀释 、定容 ,混匀 。2 ℃ ~ 8 ℃保存 ,有效期 1个月 。

　　5.9 内标标准储备溶液(1mg/mL) : 称取氘代氯霉素(d5-氯霉素) (CAS号 : 202480-68-0, 纯度不低于98%) 、氘代甲砜霉素(d3-甲砜霉素) (CAS号 : 1217723-41-5, 纯度不低于 98%) 和氘代氟苯尼考(d3-氟苯尼考)(CAS号 :1217619-10-7,纯度不低于 98%)标准品各 10 mg(精确至 0. 01 mg) ,分别置于 10 mL容量瓶中 ,用甲醇(5. 2)溶解 、定容 ,混匀 。 -18 ℃以下保存 ,有效期 6个月 。或购买标准溶液 。

　　5. 10 内标中间溶液(100μg/mL) :分别准确移取 1 mL 内标标准储备溶液(5. 9)于 10mL容量瓶中 ,用甲醇(5. 2)稀释 、定容 ,混匀 。 -18 ℃以下保存 ,有效期 3个月 。

　　5. 11 内标工作溶液(5μg/mL) : 准确移取 0. 5 mL 内标中间溶液(5. 10) 于 10 mL 容 量 瓶 中 , 用 甲 醇(5. 2)稀释 、定容 ,混匀 , -18 ℃以下保存 ,有效期 3个月 。

　　5. 12 混合标准系列溶液 :准确移取适量混合标准工作溶液(5. 8) 和内标工作溶液(5. 11) ,用水(5. 1) 稀释配制成氯霉素 质 量 浓 度 分 别 为 0. 2 ng/mL、0. 5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、 20 ng/mL, 甲砜霉素和氟苯尼考质量浓度分别为 1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、 50 ng/mL、100 ng/mL, 内标质量浓度为 50 ng/mL 的混合标准系列溶液 。 临用现配 。

　　5. 13 微孔滤膜 :0. 22 μm ,水系 。

　　6 仪器设备

　　6. 1 液相色谱-串联质谱仪 :配电喷雾离子源(ESI) 。

　　6.2 分析天平 :精度 0. 01 g 和 0. 01 mg。

　　6.3 涡旋混合器 。

　　6.4 离心机 :转速不低于 13 000 r/min。

　　6.5 氮吹仪 。

　　6.6 往复式振荡器 。

　　7 样品

　　按 GB/T 20195规定制备试样 ,至少 200g,粉碎使其全部过 0. 425 mm 试验筛 ,混合均匀 ,装入密闭容器中 ,备用 。

　　8 试验步骤

　　8. 1 提取

　　平行做两份试验 。称取试样 2 g(精确至 0. 01g) ,置于 50mL离心管中 ,准确加入 100μL内标工作溶液(5. 11) 、10 mL水(5. 1) 、0. 5 mL氨水(5. 3) 、20 mL(V1 )乙酸乙酯(5. 4) , 涡旋混合 2 min,200 r/min振荡提取 30 min,于 10 000 r/min离心 5 min,备用 。

　　8.2 净化

　　准确移取 5 mL(V2 )备用液(8. 1) ,于另一 50 mL离心管中 ,50 ℃氮气吹干 ,准确加入 5 mL(V3 )水

　　2

　　GB/T 21108—2025

　　(5. 1)和 10 mL正己烷(5. 5) ,缓慢摇动脱脂 ,静置分层 ,取下层溶液约 2 mL, 13 000 r/min离心 5 min,微孔滤膜(5. 13)过滤 ,待测 。

　　8.3 测定

　　8.3. 1 液相色谱参考条件

　　液相色谱参考条件如下 :

　　a) 色谱柱 :C18柱 ,柱长 100 mm , 内径 2. 1 mm ,粒径 2. 6 μm ,或性能相当者 ;

　　b) 柱温 :35 ℃ ;

　　c) 流速 :0. 3 mL/min;

　　d) 进样量 :5 μL;

　　e) 流动相 :A相为水(5. 1) ,B相为甲醇(5. 2) ,梯度洗脱程序见表 1。

　　表 1 梯度洗脱程序

　　时间/min

　　A相(体积分数)/%

　　B相(体积分数)/%

　　0. 0

　　80

　　20

　　1. 0

　　80

　　20

　　3. 0

　　25

　　75

　　5. 0

　　25

　　75

　　5. 1

　　80

　　20

　　8. 0

　　80

　　20

　　8.3.2 质谱参考条件

　　质谱参考条件如下 :

　　a) 电离方式 : 电喷雾电离 ,负离子模式(ESI- ) ;

　　b) 检测方式 :多反应监测(MRM) ;

　　c) 毛细管电压 :4. 5 kV;

　　d) 离子源温度 :400 ℃ ;

　　e) 脱溶剂气温度 :300 ℃ ;

　　f) 脱溶剂气流速 :10 L/min。

　　多反应监测(MRM)定性离子对 、定量离子对及碰撞能量见表 2。

　　表 2 多反应监测(MRM)定性离子对、定量离子对及碰撞能量

　　待测物名称

　　定性离子对m/≈

　　定量离子对m/≈

　　碰撞能量eV

　　氯霉素

　　321>152

　　321>152

　　20

　　321>257

　　12

　　甲砜霉素

　　354>185

　　354>185

　　21

　　354>290

　　13

　　3

　　GB/T 21108—2025

　　表 2 多反应监测(MRM)定性离子对、定量离子对及碰撞能量 (续)

　　待测物名称

　　定性离子对m/z

　　定量离子对m/z

　　碰撞能量eV

　　氟苯尼考

　　356>336

　　356>336

　　11

　　356>185

　　20

　　氘代氯霉素(d5-氯霉素)

　　326>157

　　326>157

　　19

　　氘代甲砜霉素(d3-甲砜霉素)

　　357>293

　　357>293

　　12

　　氘代氟苯尼考(d3-氟苯尼考)

　　359>339

　　359>339

　　10

　　8.3.3 混合标准系列溶液和试样溶液测定

　　在仪器的最佳条件下 ,分别取混合标准系列溶液(5. 12)和试样溶液(8. 2)上机测定 。混合标准溶液中氯霉素 、甲砜霉素 、氟苯尼考和相应内标的定量离子色谱图见附录 A。

　　8.3.4 定性

　　在相同试验条件下 ,试样溶液中待测物的保留时间应与标准系列溶液(质量浓度相当) 中待测物的保留时间一致 ,其相对偏差在 ±2. 5%之内 。 根据表 2 选择的定性离子对 , 比较试样谱图中待测物定性离子对的相对离子丰度与质量浓度接近的标准系列溶液中对应的定性离子对的相对离子丰度 ,若偏差不超过表 3规定的范围 ,则可判定为样品中存在对应的待测物 。

　　表 3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差

　　相对离子丰度/%

　　>50

　　>20~ 50

　　>10~ 20

　　≤10

　　最大允许偏差/%

　　±20

　　±25

　　±30

　　±50

　　8.3.5 定量

　　以标准溶液中待测物的峰面积和相应内标峰面积的比值为纵坐标 , 以标准溶液中待测物的质量浓度和内标质量浓度的比值为横坐标 ,绘制标准曲线 ,其相关系数应不低于 0. 99。试样溶液与标准溶液中待测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内 ,如超出线性范围 ,应重新测定 。单点校准定量时 ,试样溶液中待测物质量浓度与标准溶液质量浓度相差不超过 30% 。

　　9 试验数据处理

　　试样中氯霉素 、甲砜霉素和氟苯尼考含量以质量分数 wi 计 ,数值以微克每千克(μg/kg) 表示 。 多点校准按公式(1)计算 ;单点校准按公式(2)计算 :

　　wi …………………………( 1 )

　　式中 :

　　ρi — 由标准曲线计算得到的试样溶液中待测物质量浓度 ,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

　　V1 — 试样提取用乙酸乙酯体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　V3 — 复溶体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　4

　　GB/T 21108—2025

　　V2 — 净化时分取试样提取溶液体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　m — 试样质量 ,单位为克(g) ;

　　1 000 — 换算系数 。

　　wi = …………………………( 2 )

　　式中 :

　　A — 试样溶液中待测物色谱峰面积 ;

　　Asi — 标准溶液中对应内标色谱峰面积 ;

　　ρs — 标准溶液中待测物的质量浓度 ,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

　　ρi — 试样溶液中对应内标物的质量浓度 ,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

　　V1 — 试样提取用乙酸乙酯体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　V3 — 复溶体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　As — 标准溶液中待测物色谱峰面积 ;

　　Ai — 试样溶液中对应内标物的色谱峰面积 ;

　　ρsi — 标准溶液中对应内标物的质量浓度 ,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

　　V2 — 净化时分取试样提取溶液体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　m — 试样质量 ,单位为克(g) ;

　　1 000— 换算系数 。

　　测定结果以平行测定的算术平均值表示 ,保留三位有效数字 。

　　10 精密度

　　在重复性条件下 ,两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的 10% 。

　　5

　　GB/T 21108—2025

　　附 录 A

　　(资料性)

　　氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和相应内标标准溶液定量离子色谱图氯霉素 、甲砜霉素 、氟苯尼考和相应内标标准溶液定量离子色谱图见图 A. 1。

　　标引序号说明 :

　　1— 氯霉素 ;

　　2—d5-氯霉素 ;

　　3— 甲砜霉素 ;

　　4—d3-甲砜霉素 ;

　　5— 氟苯尼考 ;

　　6—d3-氟苯尼考 。

　　图 A. 1 氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和内标标准溶液定量离子色谱图(氯霉素质量浓度为

　　0.2 ng/mL、甲砜霉素和氟苯尼考质量浓度为 1 ng/mL, 内标质量浓度为 50ng/mL)

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