GB/T 18652-2025 致病性嗜水气单胞菌检验方法

　　ICS 11.220 CCS B 41

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 18652—2025代替 GB/T 18652—2002

　　致病性嗜水气单胞菌检验方法

　　Methodsfordetection ofpathogenicAeromonashydrophila

　　2025-08-29发布 2026-03-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 18652—2025

　　目 次

　　前言 Ⅲ

　　引言 Ⅳ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 术语和定义 1

　　4 缩略语 1

　　5 仪器设备 1

　　6 试剂和材料 2

　　7 检验程序 2

　　8 样品采集 、运输和保存 3

　　9 细菌的分离和纯化 4

　　10 嗜水气单胞菌的鉴定 4

　　11 嗜水气单胞菌致病性鉴定 6

　　12 综合判定 6

　　附录 A (规范性) 培养基和试剂的配制 7

　　附录 B (资料性) 嗜水气单胞菌 PCR鉴定基因的产物电泳和参考序列 9

　　Ⅰ

　　GB/T 18652—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　本文件代替 GB/T 18652—2002《致病性嗜水气单胞菌检验方法》, 与 GB/T 18652—2002相比 , 除结构调整和编辑性改动外 ,主要技术变化如下 :

　　a) 更改了范围(见第 1 章 ,2002年版的第 1 章) ;

　　b) 增加了 “缩略语 ”一章(见第 4章) ;

　　c) 增加了 “仪器设备 ”一章(见第 5 章) ;

　　d) 增加了 “试剂和材料 ”一章(见第 6章) ;

　　e) 增加了 “样品采集 、运输和保存 ”(见第 8章) ;

　　f) 增加了 PCR鉴定试验方法(见 10. 2) ;

　　g) 删除了斑点酶联免疫试验(见 2002年版的 2. 3. 2) ;

　　h) 增加了血平板试验(见 11. 2) ;

　　i) 增加了综合判定(见第 12章) 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由中华人民共和国农业农村部提出 。

　　本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归 口 。

　　本文件起草单位 :南京农业大学 、中国检验检疫科学研究院 。

　　本文件主要起草人 :刘永杰 、董雨豪 、王娜 、陆承平 。

　　本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 :

　　— 2002年首次发布为 GB/T 18652—2002;

　　— 本次为第一次修订 。

　　Ⅲ

　　GB/T 18652—2025

　　引 言

　　嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)在自然界中分布广泛 ,有致病菌株和非致病菌株之分 。致病菌株能感染鱼类 、两栖类 、爬行类 、鸟类 、哺乳类等动物 ,导致急性败血症或皮肤溃疡等局部感染 。在水产养殖上 ,致病性嗜水气单胞菌是引起淡水鱼细菌性败血症的主要病原 。人类感染致病性嗜水气单胞菌主要表现为急性胃肠炎 。

　　嗜水气单胞菌的致病性与其产生的毒力因子密切相关 ,其中 ,胞外产物如毒素和蛋白酶在该菌致病过程中发挥重要的作用 。 嗜水气单胞菌产生的毒素主要有气溶素 、溶血素 、细胞毒性肠毒素和细胞兴奋性肠毒素 ,这些毒素属于穿孔毒素 ,在结构和功能上非常相似 ,具有相同的生物学活性 ,表现为溶血性 、肠毒性和细胞毒性 。 嗜水 气 单 胞 菌 还 分 泌 多 种 蛋 白 酶 , 降 解 酪 蛋 白 、弹 性 蛋 白 等 , 对 组 织 造 成 直 接 损伤 ,也是非常重要的毒力因子 。 因此 ,凡是溶血阳性或蛋白酶阳性的嗜水气单胞菌均具有致病性 。通过检测菌株的溶血活性和/或蛋白酶活性 ,能够鉴定嗜水气单胞菌的致病性 。

　　Ⅳ

　　GB/T 18652—2025

　　致病性嗜水气单胞菌检验方法

　　1 范围

　　本文件描述了嗜水气单胞菌分离纯化 、理化鉴定和 PCR鉴定方法以及致病性嗜水气单胞菌检验的脱脂奶平板和血平板试验鉴定方法 。

　　本文件适用于嗜水气单胞菌和致病性嗜水气单胞菌的检验 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　GB/T 18088 出入境动物检疫采样

　　SC/T 7103 水生动物产地检疫采样技术规范

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义 。

　　4 缩略语

　　下列缩略语适用于本文件 。

　　DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid)

　　gyrB:DNA促旋酶 B亚单位( DNA gyraseB subunit)

　　PCR:聚合酶链反应(Polymerase chain reaction)

　　TAE:三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸缓冲液(Tris-acetic acid-EDTA buffer)

　　5 仪器设备

　　5. 1 恒温培养箱 :28 ℃ ±1 ℃ 。

　　5.2 干式恒温金属浴 。

　　5.3 高速低温离心机 :转速不低于 12 000 r/min。

　　5.4 二级生物安全柜或超净工作台 。

　　5.5 PCR扩增仪 。

　　5.6 凝胶成像系统 。

　　5.7 微量移液器 :量程 1 μL~ 10 μL、20 μL~ 200 μL。

　　5. 8 核酸电泳仪 。

　　5.9 高压灭菌锅 。

　　5. 10 冰箱(4 ℃ 、-20 ℃或以下) 。

　　1

　　GB/T 18652—2025

　　5. 11 光学显微镜(100倍物镜) 。

　　5. 12 无菌滤器 :0. 22 μm 滤膜 。

　　6 试剂和材料

　　6. 1 缓冲蛋白胨水 ,配制方法按照附录 A 中 A. 1。

　　6.2 普通肉汤培养基 ,配制方法按照 A. 2。

　　6.3 普通琼脂培养基 ,配制方法按照 A. 3。

　　6.4 RS琼脂培养基 ,配制方法按照 A. 4。

　　6.5 AHM鉴别培养基 ,配制方法按照 A. 5。

　　6.6 脱脂奶蔗糖胰蛋白胨琼脂培养基 ,配制方法按照 A. 6。

　　6.7 血琼脂培养基 ,配制方法按照 A. 7。

　　6. 8 糖发酵试验管 ,配制方法按照 A. 8。

　　6.9 Kovac试剂 ,配制方法按照 A. 9。

　　6. 10 1×TAE缓冲液 ,配制方法按照 A. 10。

　　6. 11 1. 2% 琼脂糖凝胶 ,配制方法按照 A. 11。

　　6. 12 DNA分子质量标准(2 000 bp) : -20 ℃保存 。

　　6. 13 阳性对照 : 嗜水气单胞菌 NJ-35株(菌种保藏号 CGMCC no. 8319) 。

　　6. 14 gyrB 基因引物 :浓度为 10 μmol/L,扩增片段长度为 435 bp,序列如下 :上游引物 gyrB-P1:5'-GGT CGT GGT ATT CCA GTCG-3';

　　下游引物 gyrB-P2:5'-GCC TTC GTA GCA GAA GTG C-3'。

　　7 检验程序

　　致病性嗜水气单胞菌的检验程序见图 1。

　　2

　　GB/T 18652—2025

　　图 1 致病性嗜水气单胞菌检验程序

　　8 样品采集、运输和保存

　　8. 1 组织病料采集

　　根据动物发病时病变出现的部位 ,采集相应的组织样品 。若病变出现在体表 ,样品采集时先消毒病灶表面 ,无菌采集病灶深处的组织 ;若病变出现在肾 、肝 、脾等实质性脏器 ,样品采集时先用消毒器械打开体腔 ,按无菌操作方法采集相应的组织样品 。病料采集按照 GB/T 18088和 SC/T 7103的规定执行 。样品采集后应立即置于无菌塑封袋或其他密闭容器中 ,并加注样品标识 。

　　8.2 水样采集

　　进行水 生 动 物 流 行 病 学 调 查 时 , 应 采 集 池 塘 水 样 。 在 距 离 水 面 10 cm ~ 15 cm 的 水 层 , 取 水 样20 mL置于无菌采样瓶中 ,盖上瓶盖后密封保存 ,并加注样品标识 。

　　8.3 样品运输和保存

　　采集的样品应在 2 h 内运输至实验室进行检验 。 如未能在 2 h 内进行检验 ,则应置于安全密封的保温容器中冷藏 (4 ℃ ~ 8 ℃) ,但不宜超过 24h。

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　　9 细菌的分离和纯化

　　9. 1 组织病料的细菌分离

　　用无菌接种环蘸取组织病料 ,分区划线接种于 RS琼脂培养基 ,28 ℃ ±1 ℃培养 18h~ 24 h。挑取黄色无黑心的单个菌落 ,连续划线接种于普通琼脂培养基 ,28 ℃ ±1 ℃培养 18h~ 24h。

　　9.2 水样处理与细菌分离

　　用 0. 22 μm 无菌滤器过滤 2 mL水样 ,取出滤膜 ,置于含有 5 mL缓冲蛋白胨水的试管中 ,28 ℃ ± 1 ℃培养 8 h~ 18h。取培养物分区划线接种于 RS琼脂培养基 ,28 ℃ ±1 ℃培养 18 h~ 24 h。挑取黄色无黑心的单个菌落 ,连续划线接种于普通琼脂培养基 ,28 ℃ ±1 ℃培养 18h~ 24h。

　　9.3 细菌的纯化

　　将普通琼脂培养基上生长的单个菌落 ,用接种环以无菌操作蘸取少许 ,在无菌普通琼脂培养基表面进行连续划线 ,28 ℃ ±1 ℃培养 18h~ 24h。 嗜水气单胞菌经培养长出的菌落表现为光滑 、微凸 、无色或淡黄色 。

　　10 嗜水气单胞菌的鉴定

　　10. 1 理化鉴定

　　10. 1. 1 革兰染色

　　用无菌接种环挑取纯化的单菌落少许 ,均匀涂布于加有 1 滴蒸馏水的干净载玻片上 , 自然干燥 ,火焰固定 。 滴 加 草 酸 铵 结 晶 紫 染 料 , 作 用 1 min~ 2 min, 流 水 冲 洗 。 滴 加 革 兰 碘 液 , 作 用 1 min~ 3 min,流水冲洗 。滴加 95%(体积分数)乙醇 ,作用 0. 5 min~ 1 min, 流水冲洗 。滴加石炭酸复红 ,作用10 s~ 30 s,流水冲洗 。干燥 ,镜检 。 嗜水气单胞菌经革兰染色后 ,显微镜下观察为红色短杆菌 。

　　10. 1.2 AHM 鉴别培养

　　用无菌接种针挑取纯化的单菌落少许 , 穿刺接种 于 AHM 鉴 别 培 养 基 。 28 ℃ ± 1 ℃培 养 18 h~ 24h。嗜水气单胞菌生长的培养基顶部为紫色或黑色 ,底部为淡黄色 。若细菌沿穿刺线呈刷状生长 ,判为运动力阳性 。

　　10. 1.3 生化试验

　　10. 1.3. 1 氧化酶试验

　　用无菌接种环挑取纯化的单菌落少许 ,涂布于浸有 1%盐酸四甲基对苯胺的滤纸片上 ,在 10 s 内观察细菌涂布处的颜色 。若细菌涂布处出现红色 ,判为氧化酶试验阳性 。

　　10. 1.3.2 吲哚试验

　　用无菌接种环挑取纯化的单菌落少许 ,接种于蛋白胨水试管中 ,28 ℃ ± 1 ℃培养 24 h~ 48 h;沿管壁加入 0. 5 mL Kovac试剂 。若在两种液面接触处出现红色者 ,表明产生吲哚 ,判为阳性 。

　　10. 1.3.3 糖发酵试验

　　用无菌接种环挑取纯化的单菌落少许 ,分别接种于葡萄糖 、蔗糖 、阿拉伯糖 、七叶苷及水杨苷 5 种糖

　　4

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　　的糖发酵管 , 28 ℃ ± 1 ℃培 养 24 h~ 48 h。若 试 验 管 颜 色 从 紫 色 变 为 黄 色 , 表 明 细 菌 可 发 酵 该 种 糖类 ,判为阳性 。

　　注 : 若选择生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统 ,按照操作说明进行鉴定 。

　　10. 1.4 结果判定

　　对分离细菌进行鉴定 ,符合表 1 中所列特性者 ,判定为嗜水气单胞菌 。

　　表 1 嗜水气单胞菌的形态、培养和生化特性

　　革兰染色

　　AHM培养

　　运动力

　　氧化酶试验

　　吲哚试验

　　糖发酵试验

　　葡萄糖

　　蔗糖

　　阿拉伯糖

　　七叶苷

　　水杨苷

　　红色短杆菌

　　顶部为紫色

　　或黑色 ,底

　　部为淡黄色

　　+

　　+

　　+

　　+

　　+

　　+

　　+

　　+

　　注 : + 表示阳性 。

　　10.2 PCR鉴定

　　10.2. 1 设立对照

　　从提取基因组开始 ,均应设立阳性对照 、阴性对照和空白对照 。 以嗜水气单胞菌 NJ-35株或其他嗜水气单胞菌模式株为阳性对照 , 以气单胞菌属以外的细菌如大肠埃希菌为阴性对照 ,无菌去离子水为空白对照 。

　　10.2.2 DNA模板的制备

　　在 1. 5 mL离心管中 ,加入 50 μL无菌去离子水 ,用无菌接种环挑取普通琼脂培养基上生长的单个菌落至无菌 去 离 子 水 中 , 置 于 干 式 恒 温 金 属 浴 中 100 ℃处 理 10 min, 冷 却 后 , 以 12 000 r/min离 心2 min,上清液作为细菌 DNA模板用于 PCR扩增 。

　　注 : 若选择商品化的 DNA提取试剂盒 ,按照操作说明进行 DNA提取 。

　　10.2.3 PCR反应体系

　　采用 50 μL体系 ,其中包括 : 10× PCR 缓冲液 5 μL,dNTPs(10 mmol/L) 1 μL,Taq DNA 聚合酶(5U/μL)1μL,MgCl2 (25 mmol/L)3μL,上游和下游引物各 2 μL,DNA模板(5ng/μL)4μL,用无菌去离子水补足反应体系至 50 μL。

　　注 : 若选择商品化的 PCR扩增预混液 ,按照操作说明在其中加入 DNA模板和引物 。

　　10.2.4 PCR反应条件

　　95 ℃ 预变性 5 min;95℃ 变性 30 s,55℃ 退火 30 s,72℃ 延伸 1 min,共 35个循环 ;最后 72℃延伸 10 min。

　　10.2.5 PCR扩增产物鉴定

　　取 8 μLPCR产物 ,加入 2 μLPCR上样缓冲液混匀后,点样于 1. 2 %琼脂糖凝胶电泳孔中 , 同时加入 5 μL 2 000 bp的 DNA 分 子 质 量 标 准 作 为 参 照 。 电 泳 缓 冲 液 为 1× TAE, 电 压 110 V, 电 泳 时 间20 min~ 30 min。 电泳结束后 ,在凝胶成像系统下观察并记录结果 。

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　　10.2.6 结果判定

　　PCR产物电泳后 ,若阳性对照在 435 bp处出现特异性条带 , 阴性对照和空白对照在 435bp处未出现特异性条带 ,说明试验结果成立(见附录 B 中 B. 1) ;否则 ,试验不成立 。

　　在试验结果成立的条件下 ,PCR产物电泳后 ,若被检样品在 435bp处未出现特异性条带 ,判定为阴性 ;若被检样品在 435 bp处出现特异性条带 ,将 PCR 产物进行基因测序 ,并对序列进行核苷酸相似性分析 。序列与参考 序 列 (见 B. 2) 相 似 性 达 97% 以 上 , 判 定 为 嗜 水 气 单 胞 菌 阳 性 ; 序 列 相 似 性 介 于91% ~ 97%之间 ,判定为疑似 ,应通过 10. 1. 3 生化试验进一步确定 ;序列相似性低于 91% ,判定为阴性 。

　　11 嗜水气单胞菌致病性鉴定

　　11. 1 脱脂奶平板试验

　　用无菌接种环挑取经鉴定为嗜水气单胞菌的单菌落少许 ,划线接种于脱脂奶蔗糖胰蛋白胨琼脂培养基 ,28 ℃ ±1 ℃培养 18h~ 24h。若菌落周围出现清晰 、透明的溶蛋白圈 ,判定为检测结果阳性 。

　　11.2 血平板试验

　　用无菌接种环挑取经鉴定为嗜水气单胞菌的单菌落少许 ,划线接种于血琼脂培养基 , 28 ℃ ± 1 ℃培养 18h~ 24h。若菌落周围出现清晰 、透明的溶血圈 ,判定为检测结果阳性 。

　　11.3 结果判定

　　利用脱脂奶平板试验和血平板试验对嗜水气单胞菌进行检测 ,任意一项检测结果为阳性 ,判定为致病性嗜水气单胞菌 。

　　12 综合判定

　　12. 1 对于从检样中分离纯化获得的细菌 ,满足下列条件之一者 ,判定为嗜水气单胞菌 :

　　— 理化鉴定结果为阳性 ;

　　—PCR鉴定结果为阳性 。

　　12.2 对于嗜水气单胞菌 ,满足下列条件之一者 ,判定为致病性嗜水气单胞菌 :

　　— 脱脂奶平板试验检测结果为阳性 ;

　　— 血平板试验检测结果为阳性 。

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　　附 录 A

　　(规范性)

　　培养基和试剂的配制

　　A. 1 缓冲蛋白胨水

　　准确称量蛋 白 胨 10. 0 g、氯 化 钠 5. 0 g、磷 酸 氢 二 钠 (Na2 HPO4 · 12H2 O) 9. 0 g、磷 酸 二 氢 钾1. 5 g,加入蒸馏水定容至 1 000mL。混匀 ,加热溶解 ,用 1 mol/L氢氧化钠或 1 mol/L盐酸调节 pH 至

　　7. 2 ± 0. 2,分装 ,121 ℃高压灭菌 15 min。

　　A.2 普通肉汤培养基

　　准确称量牛肉膏 3. 0 g、蛋白胨 10. 0 g、氯化钠 5. 0 g、磷酸氢二钾 1. 0 g,蒸馏水加至 1 000 mL。混匀 ,煮沸 ,用 1 mol/L氢氧化钠或 1 mol/L盐酸调节 pH 至 7. 2 ± 0. 2,分装 ,121 ℃高压灭菌 15 min。

　　A.3 普通琼脂培养基

　　准确称量牛肉膏 3. 0 g、蛋白胨 10. 0 g、氯化钠 5. 0 g、磷酸氢二钾 1. 0 g、琼脂 15. 0 g、蒸馏水 加 至1 000 mL。混匀,煮沸 ,用 1 mol/L氢氧 化 钠 或 1 mol/L盐 酸 调 节 pH 至 7. 2 ± 0. 2, 121 ℃高 压 灭 菌15 min。冷却至 45 ℃ ~ 50 ℃ ,倾注灭菌平皿 。

　　A.4 RS琼脂培养基

　　准确称量 L-盐酸鸟氨酸 6. 5 g、L-盐酸赖氨酸 5. 0 g、L-盐酸半胱氨酸 0. 3 g、麦芽糖 3. 5 g、硫代硫酸钠 6. 8 g、枸橼酸铁铵 0. 8 g、脱氧胆酸钠 1. 0 g、氯化钠 5. 0 g、酵母提取液 3. 0 g、新生霉素 0. 005g、溴麝香草酚蓝 0. 03g、琼脂 13. 5 g,蒸馏水加至 1000mL。混匀,煮沸 ,用 1 mol/L氢氧化钠或 1 mol/L盐酸调节 pH 至 7. 2 ± 0. 2,121 ℃高压灭菌 15 min。冷却至 45 ℃ ~ 50 ℃ ,倾注灭菌平皿 。

　　A.5 AHM 鉴别培养基

　　准确称量蛋白胨 5. 0 g、酵母浸粉 3. 0 g、胰酪蛋白胨 10. 0 g、L-盐酸鸟氨酸 5. 0 g、甘露醇 1. 0 g、肌醇10. 0 g、硫代硫酸钠 0. 4 g、柠檬酸铁 铵 0. 5 g、溴 甲 酚 紫 0. 02 g、琼 脂 3. 0 g,蒸 馏 水 加 至 1 000 mL。 混匀 ,煮沸 ,用 1 mol/L氢氧化钠或 1 mol/L盐酸调节 pH 至 6. 6~ 6. 8, 121 ℃高压灭菌 15 min。冷却至45 ℃ ~ 50 ℃ ,倾注灭菌平皿 。

　　A.6 脱脂奶蔗糖胰蛋白胨琼脂培养基

　　准确称量磷酸二氢 钾 10. 0 g、氯 化 钾 1. 5 g、蔗 糖 5. 0 g、胰 蛋 白 胨 5. 0 g、脱 脂 奶 粉 10. 0 g、琼 脂15. 0 g,蒸 馏 水 加 至 1 000 mL。 混 匀, 煮 沸 , 用 1 mol/L 氢 氧 化 钠 或 1 mol/L盐 酸 调 节 pH 至 7. 2 ±0. 2,121 ℃高压灭菌 15 min。冷却至 45 ℃ ~ 50 ℃ ,倾注灭菌平皿 。

　　A.7 血琼脂培养基

　　取普通琼脂培养基 ,加热溶化 ,冷却至 45℃ ~ 50℃ , 以无菌操作于每 100mL普通琼脂培养基加入无菌脱纤维羊血或兔血 5 mL~ 10 mL,轻轻摇匀 ,立即倾注灭菌平皿 。

　　A. 8 糖发酵试验管

　　配制蛋白胨水 :蛋白胨 5. 0 g,蒸馏水 1 000 mL,用 1 mol/L氢氧化钠或 1 mol/L盐酸调节 pH 至

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　　GB/T 18652—2025

　　7. 2 ± 0. 2,分装 ,每瓶 100 mL。

　　每 100 mL蛋 白 胨 水 中 加 入 1. 0 g 葡 萄 糖 或 蔗 糖 、阿 拉 伯 糖 、七 叶 苷 、水 杨 苷 , 充 分 溶 解 , 分 装 试管 ,115 ℃高压灭菌 10 min, 即制成 5 种糖的发酵管 。

　　A.9 Kovac试剂

　　将对位二甲基氨基苯甲醛 5 g溶解于 75 mL戊醇中 ,然后缓慢加入浓盐酸 25 mL。

　　A. 10 1× TAE缓冲液

　　称取 Tris碱 242. 0 g、冰乙酸 57. 1 mL,加入配制好的 0. 5 mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) 溶液(pH 8. 0)100mL溶解并调 pH 至 8. 0,用蒸馏水补足至 1000 mL,充分混匀后即为 50×TAE,4 ℃保存 。使用前用蒸馏水将其做 50倍稀释即为 1×TAE,现配现用 。

　　A. 11 1. 2%琼脂糖凝胶

　　称取 1. 2 g琼脂糖 ,加入 100 mL 的 1×TAE缓冲液 ,加热溶解 ,冷却至 50 ℃ ~ 60 ℃时加入 1 μL GoldView核酸染料 。轻轻混匀后 ,迅速将其倒入插有点样梳的制胶槽内 ,静置待其冷却凝固后备用 。

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　　附 录 B

　　(资料性)

　　嗜水气单胞菌 PCR鉴定基因的产物电泳和参考序列

　　B. 1 PCR扩增产物电泳图

　　嗜水气单胞菌 gyrB 基因 PCR扩增产物进行电泳后凝胶成像结果见图 B. 1。

　　标引序号说明 :

　　M —DNA分子质量标准(100bp~ 2 000 bp) ;

　　1~ 6— 待测样品(检测结果为阳性) ;

　　— — 阴性对照 ;

　　+ — 阳性对照 ;

　　C — 空白对照 。

　　图 B. 1 PCR扩增产物电泳图

　　B.2 gyrB基因参考序列

　　GGTCGTGGTATTCCAGTCGACATCCACCCGGAAGAGGGTCGCTCCGCTGCCGAAGTCAT CATGACCGTGCTGCACGCGGGCGGCAAGTTCGACGACAACTCCTACAAGGTCTCCGGCGGT

　　CTGCACGGCGTCGGTGTCTCCGTGGTAAACGCCCTCTCTGACAAGCTGCTGCTGACCATCCG TCGCAACGGCCATGTCTACGAGCAGACCTATCACCTGGGTGAGCCGCAGGCACCGCTCAAG CAGATTGGCGACAGCACCGGCACCGGGACCGAAGTCCGCTTCTGGCCGAGCCCGACCATCT

　　TCAGCGATACCCTGTTCCACTACGAGATCCTGGCCAAGCGTCTGCGCGAGCTCTCCTTCCTC AACTCCGGCGTCTCCATCCGCCTGCTGGATGAGCGTGACGGCCGCGAGGCGCACTTCTGCTA CGAAGGC

　　注 : 参考序列来源于嗜水气单胞菌 NJ-35株的 gyrB 基因(GenBank登录号 :CP006870. 1) ,下划线处为引物位置 。

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