DB41/T 3053-2025 玉米孢囊线虫鉴定和监测技术规程

　　ICS 65.020.01 CCS B 16

　　41

　　河 南 省 地 方 标 准

　　DB41/T 3053—2025

　　玉米孢囊线虫鉴定和监测技术规程

　　2025 - 12 - 04 发布 2026 - 03 - 03 实施

　　河南省市场监督管理局 发 布

　　DB41/T 3053—2025

　　目 次

　　前 言 II

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 术语和定义 1

　　4 试剂和设备 1

　　5 鉴定方法 2

　　6 监测方法 2

　　7 调查记录 3

　　附 录 A (资料性) 玉米孢囊线虫危害症状和形态学特征 4

　　附 录 B (资料性) 酸性品红染色方法 6

　　附 录 C (规范性) 玉米孢囊线虫系统调查表 7

　　I

　　DB41/T 3053—2025

　　前 言

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由河南省农业农村厅提出。

　　本文件由河南省植物保护标准化技术委员会(HN/TC 32)归口。

　　本文件起草单位：河南农业大学、河南省植物保护检疫站、中国农业科学院植物保护研究所。

　　本文件主要起草人：崔江宽、汤继华、彭红、李好海、彭德良、焦永吉、陈锋、彭焕、安世恒、蒋士君、孙炳剑、周扬、孟颢光、张雪海。

　　II

　　DB41/T 3053—2025

　　玉米孢囊线虫鉴定和监测技术规程

　　1 范围

　　本文件规定了玉米孢囊线虫鉴定和监测的试剂和设备、鉴定方法、监测方法、调查记录等内容。本文件适用于玉米孢囊线虫的鉴定和监测。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　SN/T 1848

　　植物有害生物鉴定规范

　　SN/T 2757

　　植物线虫检测规范

　　NY/T 3533

　　小麦孢囊线虫鉴定和监测技术规程

　　3

　　术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3. 1

　　玉米孢囊线虫

　　玉米孢囊线虫(Heterodera zeae)属于垫刃亚目异皮科异皮属，主要危害玉米等多种禾本科作物和杂草的一类世界性重要植物寄生线虫。

　　3. 2

　　阴门锥

　　位于孢囊尾部，包含会阴部及其有关内部结构，是孢囊线虫分类和鉴定的重要依据。 3. 3

　　严重度

　　表示植株根系感染玉米孢囊线虫病的严重程度。严重度用分级法表示，一般根据玉米大喇叭口期根部白雌虫数量将严重度分为0～4级。

　　4 试剂和设备

　　4, 1 主要试剂

　　高岭土、蔗糖、酸性品红、TAF固定液、加拿大树胶、玉米孢囊线虫SCAR-PCR引物、rTaq酶、PCR扩增试剂盒等。

　　4. 2 主要设备

　　20目、100目和500目标准筛网，体视显微镜(10～100倍)和生物显微镜(40～1 000倍)，台式低速离心机(最大转速6 000 r/min)，常规PCR仪、电泳仪和凝胶成像仪。

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　　5 鉴定方法

　　5. 1 样品采集

　　观察玉米等作物地上部是否出现黄化、矮化，叶色暗淡，叶边缘焦黄等症状;根部是否有晶莹的白色粒状物，根系生长发育不良。(危害症状参见附录A)。采集有上述症状，生长异常的植株根系和根际土壤样品带回实验室，进行室内线虫种类鉴定。

　　5.2 形态学鉴定

　　5.2.1 孢囊和二龄幼虫分离

　　样品中孢囊的分离采用蔗糖简易离心法，二龄幼虫的分离采用浅盘法。分离方法参考NY/T 3533的处理方法。

　　5.2.2 拍照测量

　　参照SN/T 2757的方法制作玻片，在体视显微镜下观察孢囊、二龄幼虫、雌虫和雄虫等玉米孢囊线虫不同虫态的形态特征，拍照，并在每张图上加对应比例尺。

　　5.2.3 鉴定依据

　　以孢囊和雌虫的形态学特征作为玉米孢囊线虫鉴定的主要依据，二龄幼虫和雄虫作为鉴定的辅助依据。具体描述详见附录A。

　　5. 3 分子生物学鉴定

　　将分离获得的孢囊和二龄幼虫，进行SCAR-PCR检测，根据凝胶电泳特异性条带结果进行玉米孢囊线虫的辅助鉴定。

　　5.4 结果判定

　　参照SN/T 1848鉴定规范，依据形态学鉴定和分子生物学鉴定的结果判定是否为玉米孢囊线虫。

　　6 监测方法

　　6. 1 系统调查

　　参照SN/T 1848和SN/T 2757规范，系统调查玉米孢囊线虫的田间孢囊数量、卵量、白雌虫和发育进度。

　　6. 2 调查点设定

　　选择代表性的玉米田2～3块，每块不少于1亩，作为玉米孢囊线虫病系统调查固定监测点。宜设立监测观测圃，配置温度、降水量、湿度等气象因子的观测设备。

　　6.2.1 孢囊及卵量调查

　　在玉米播种和收获期，采用“Z”字形取样法，选5个点位，每点采集5个小样，每个小样取不少于200 mL的5 cm～15 cm 根际土壤，将所取土样充分混合后取1 kg左右装入样品袋，注明采样时间、地点等，带回室内摊开自然风干。称取200 g风干土样，分离土壤中孢囊(见附录C)，在体视显微镜下计数。随

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　　DB41/T 3053—2025

　　机挑取、挤破10个孢囊，制备悬浮液，计算每克土样中的卵量，评估风险指数。调查结果记入附录C中的表C.1。

　　6.2.2 风险指数

　　根据玉米播种和收获期每克土壤中玉米孢囊线虫的卵量，评估田间玉米孢囊线虫病的发生风险指数，共分为4级：

　　0级：无风险;

　　1级：低风险，每克土壤中的卵量为1～10粒;

　　2级：中等风险，每克土壤中的卵量为11～20粒;

　　3级：高等风险，每克土壤中的卵量大于20粒。

　　6.2.3 根内线虫发育进度调查

　　夏玉米出苗后至抽雄期(春玉米从拔节期至抽雄期)每隔10 d取样一次，在玉米灌浆期、乳熟期和成熟期各取样1次，每次挖取5株玉米。将所采玉米根剪下后漂洗干净，采用酸性品红法染色(详细步骤参见附录B)，在体视显微镜下观察根内幼虫的发育进度。调查结果记入附录C中的表C.2。

　　6.2.4 白雌虫调查

　　在玉米大喇叭口期至抽雄期，采用5点取样法，每点挖取玉米3～5株，轻轻抖去根部泥土，记录单株白雌虫数，调查严重度并计算病情指数。调查结果记入附录C中的表C.3。

　　6.2.5 严重度分级

　　根据玉米大喇叭口期根部白雌虫的数量进行分级。分级标准为：

　　0 级：无孢囊;

　　1 级：极轻微感染(1～10 个白雌虫/株);

　　2 级：轻微感染(11～20 个白雌虫/株);

　　3 级：中度感染(21～40 个白雌虫/株);

　　4 级：严重感染(单株白雌虫在 40 个以上)。

　　6.2.6 病情指数

　　病情指数计算公式如下：

　　式中：

　　I —— 病情指数;

　　dj —— 严重度级值;

　　li —— 各级病株数，单位为株;

　　P —— 调查总株数，单位为株;

　　D —— 严重度最高级别值。

　　7 调查记录

　　详细记录调查方法和鉴定过程，并存档。

　　3

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　　附 录 A

　　(资料性)

　　玉米孢囊线虫危害症状和形态学特征

　　A.1 玉米孢囊线虫危害症状

　　玉米孢囊线虫为植物根部的定居型半内寄生线虫，大多数卵都保留在孢囊内。玉米孢囊线虫危害玉米根部，导致根部产生病变，影响玉米植株的正常生长和发育，进而影响玉米的产量和品质。玉米孢囊线虫病田间症状表现为植株生长发育不良，出现萎缩，矮小等症状;叶片发黄，叶色暗淡无光;叶尖干枯，叶边缘焦黄。同时， 被玉米孢囊线虫侵染的根不能很好地生长、根系短小，丛杂。相较于未受害玉米植株，受害玉米植株抽穗较早且结实较小，玉米粒畸形。河南地区玉米大喇叭口期和抽雄期根系上可以见到浅黄色或黄棕色的孢囊。

　　A.2 玉米孢囊线虫形态学特征

　　孢囊：体长410 μm～780 μm，体宽260 μm～550 μm，体长/体宽1.1～1.8。

　　雄虫：体长640 μm～990 μm，体宽23.2 μm～43.2 μm，体长/体宽18.9～39.9，体长/头顶至食道与肠连接处的长度3.6～6.6 ，体长 /尾长 105～207 ，口针 24.0 μm ～24.8 μm ， 口针基部球宽4.0 μm～5.6 μm，交合刺24.8 μm～32.0 μm，引带8.0 μm～11.2 μm，尾长4.0 μm～7.2 μm。

　　二龄幼虫：体长355 μm～480 μm，体长/体宽14.6～25.5，尾长35.0 μm～48.0 μm，透明尾长16.8 μm～26.0 μm，口针19.5 μm～23.9 μm。

　　A.3 寄主范围

　　玉米孢囊线虫的寄主范围主要是玉米，大麦，小麦，燕麦，黑麦，水稻，高粱，甘蔗，谷子等农作物。禾本科杂草也是玉米孢囊线虫的寄主，如洋野黍，草原看麦娘，拂子茅，薏苡，千金子，糜，狼尾草，稗，香根草等。此外，果树也是玉米孢囊线虫寄主，如扁桃树、梨树、柑橘和无花果树等。

　　A.4 发生规律

　　孢囊线虫属于半内寄生线虫中的定居型类群，一旦将头部和虫体前部钻入根组织中，在正常情况下不再转移直至完成发育和生殖。在不同环境下，玉米孢囊线虫从二龄幼虫到孢囊形成所经历的时间不同。二龄幼虫可以在雌虫表皮变黄或者变为亮褐色之前，即雌虫在未成熟时孵化出来。

　　二龄幼虫在接种12 h后就侵入玉米的根部，在接种后第5天侵染量达到最大，大多数二龄幼虫侵染发生在根部的伸长区，较少出现在分生组织区或根尖。在温度为27 ℃~38 ℃时，三龄幼虫和四龄幼虫出现的时间分别为接种二龄幼虫后的5 d～6 d和7 d～10 d。

　　A.5 形态描述

　　A.5.1.1 孢囊

　　玉米孢囊线虫的孢囊较小，柠檬形，黄褐色，孢囊表皮有Z字形纹路;双半膜孔被阴门裂分开，阴门下桥通常为蝴蝶结状，下方有4个突出的指状泡囊，指状泡囊下有随机分布的长短不一的泡囊群。

　　A.5.1.2 雄虫

　　玉米孢囊线虫雄虫体细长，蠕虫型，尖端渐变细;头部钝圆，有4个环纹，头骨架硬化;虫体有明显的角质层，并有整齐中等粗细的环纹;有强壮的口针和明显的口针基部球，其分布从虫体前端2～3

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　　个体环开始到虫体8～9个体环的位置结束;侧区有4条侧线，中间两条侧线距离较旁边两条侧线窄，侧区分布在虫体中间，其宽度小于虫体的四分之一。

　　A.5.1.3 二龄幼虫

　　玉米孢囊线虫二龄幼虫是指从卵壳内孵化并游离孢囊外的具有侵染特性的幼虫，二龄幼虫呈蠕虫形，圆柱状，虫体尾部渐变细;头部钝圆硬化，唇区较高，有强壮的口针和明显的口针基球，基球呈锯齿状;

　　虫体尾部有透明区，透明区有较明显的体环;虫体表有4条明显的侧线。

　　A.5.1.4 三龄幼虫

　　玉米孢囊线虫的二龄幼虫侵染后在根内建立取食位点，5 d～6 d后，二龄幼虫发育为三龄幼虫，三龄幼虫多为豆荚型，三龄幼虫持续时间与环境和温度紧密相关，一般为3 d～10 d。

　　A.5.1.5 四龄幼虫

　　玉米孢囊线虫的二龄幼虫侵染后7 d～10 d，可以观察到四龄幼虫，四龄幼虫由三龄幼虫发育而来，四龄幼虫多为柠檬型;四龄幼虫与游离的雄虫交配后发育为白雌虫，白雌虫老化后变为孢囊，孢囊体内包含未孵化的卵。

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　　附 录 B

　　(资料性)

　　酸性品红染色方法

　　酸性品红染色方法和步骤如下：

　　a)将洗干净的玉米根放入烧杯内，加入50 mL蒸馏水以及10 mL 5.25% 次氯酸钠溶液，

　　b)用玻璃棒轻轻搅拌根组织，

　　c)5 min后，取出根组织，用流水冲洗干净;然后将根泡在蒸馏水内15min，

　　d)取出根组织，用流水冲洗干净，将根组织移入另一个盛有30 mL～50 mL蒸馏水的烧杯中，加入1 mL酸性品红溶液，微波炉中煮沸1min，

　　e)冷却后，用流水漂洗根组织，然后在20 mL～30 mL酸性甘油中煮沸，使根褪色，

　　f)显微镜下观察，并统计根内线虫。

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　　附 录 C

　　(规范性)

　　玉米孢囊线虫系统调查表

　　C.1 玉米孢囊线虫孢囊及卵量系统调查表。

　　表 C.1 玉米孢囊线虫孢囊及卵量系统调查表

　　调查地点

　　样品编号

　　玉米品种

　　总孢囊数

　　活孢囊数

　　孢囊密度(个/克土)

　　单孢囊卵量

　　卵密度 (粒/克土)

　　风险指数

　　调查时间： 调查单位： 调查人：

　　C.2 玉米孢囊线虫发育进度系统调查表。

　　表 C.2 玉米孢囊线虫发育进度系统调查表

　　调查地点

　　样品编号

　　玉米品种

　　播种日期

　　玉米生育期

　　玉米根内不同龄期幼虫数量(条)

　　备注

　　二龄幼虫

　　三龄幼虫

　　四龄幼虫

　　白雌虫

　　调查时间： 调查单位： 调查人：

　　C.3 玉米孢囊线虫白雌虫系统调查表。

　　表 C.3 玉米孢囊线虫白雌虫系统调查表

　　调查地点

　　玉米

　　品种

　　播种

　　日期

　　玉米生育期

　　调查株数(株)

　　发病株数(株)

　　病株率

　　(%)

　　白雌虫数(个)

　　不同级别株数

　　病情

　　指数

　　备注

　　0

　　1

　　2

　　3

　　4

　　调查时间： 调查单位： 调查人：

　　7