GB/T 36823-2018 苜蓿籽蜂检疫鉴定方法

　　ICS 65 . 020 . 0 1 B 16

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 36823—2018

　　苜蓿籽蜂检疫鉴定方法

　　DetectionandidentificationofBruchophagusroddiGussakovskiy

　　2018-09-17 发布 2019-04-01 实施

　　国家市场监督管理总局中国国家标准化管理委员会

　　发

　　布

　　GB/T 36823—2018

　　GB/T 36823—2018

　　前 言

　　本标准按照 GB/T 1 . 1—2009 给出的规则起草。

　　本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口 。

　　本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、河北省黄骅市农业局。

　　本标准主要起草人：张红英、季宏铁、张建成、刘浩升、林晓佳、黄芳。

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　　苜蓿籽蜂检疫鉴定方法

　　1 范围

　　本标准规定了苜蓿籽蜂(BruchophagusroddiGussakovskiy)的实验室检测和形态特征鉴定方法。

　　本标准适用于苜蓿籽蜂的检疫和鉴定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注 日期的引用文件，仅注 日期的版本适用于本文件 。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB/T 20478—2006 植物检疫术语

　　3 术语和定义

　　GB/T 20478 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　头部 head

　　头部扁圆形，头顶一对复眼和三个单眼，单眼成三角形排列。

　　3.2

　　触角 antenna

　　触角着生在触角窝，由柄节、梗节和鞭节构成。 鞭节第一节呈环状，称作环状节。 端部三节膨大，称作棒节，其余鞭节称作索节。

　　3.3

　　胸部 mesosoma

　　指前胸、中胸、后胸和并胸腹节总称。 前胸由前胸背板、颈片和领片组成。 中胸是中胸盾片、三角片和小盾片的复合体，中胸盾片由深陷的盾纵沟划分为中区和两侧区。

　　3.4

　　胸腹侧片 prepectus

　　沿中胸的前侧片前缘的区域。

　　3.5

　　并胸腹节 propodeum

　　膜翅目细腰亚目昆虫所特有，由腹部第一节与后胸一部分愈合而成。

　　[SN/T 2471—2010,定义 2 . 2]

　　3.6

　　腹部 metasoma

　　除去形态学上原始的第一腹节(即与胸部合并的并胸腹节)的其他腹节的总称。

　　3.7

　　产卵器 ovipositor

　　雌虫用于产卵的瓣状构造，有时伸出体外。

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　　3.8

　　负瓣片 valvifers

　　产卵器的基板。 由生殖肢的基肢节所衍生，具有产卵瓣，包括第 8 腹节第 1 负瓣片和第 9 腹节的第2 负瓣片。

　　3.9

　　感觉孔 sensorypore

　　表皮中的细小凹陷，每个凹陷表示一个感觉器官的位置。

　　4 苜蓿籽蜂基本信息

　　中文名：苜蓿籽蜂。

　　中文别名：苜蓿广肩小蜂。

　　学名：BruchophagusroddiGussakovskiy。

　　英文名：Alfalfa seed chalcid。

　　分类地位：膜翅目 Hymenoptera、广肩小蜂科 Eurytomidae、种子广肩小蜂属 Bruchophagus。

　　传播途径：幼虫和蛹隐匿于寄主的种子中随运输远距离传播。

　　近似种：百脉根籽蜂 Bruchophagusplatypterus(Walker)、红花三叶草籽蜂 Bruchophagusgibbus (Boheman)。苜蓿籽蜂的生物学信息参见附录 A。

　　5 方法原理

　　将样品中略微扁平、颜色较深或在饱和食盐水中漂浮的种子在体视显微镜下剖开种皮，发现小蜂后进行形态特征的观察。 在蒸馏水中解剖虫体腹部，找出外生殖器进行形态特征的观察。 成虫及雌雄虫外生殖器特征相同鉴定为苜蓿籽蜂。

　　6 仪器和用具

　　6 . 1 仪器设备

　　6. 1 . 1 体视显微镜：具有测量功能，精确到 0.01 mm。

　　6. 1 .2 电子天平：感量 0.001 kg。

　　6 . 2 实验用具

　　6 . 2 . 1 烧杯：1 000 mL , 2 000 mL。

　　6 . 2 . 2 可封口塑料袋：9 号，280 mm×200 mm。

　　6 . 2 . 3 放大镜：10 × 。

　　6 . 2 . 4 培养皿：90 mm。

　　6 . 2 . 5 其他：标签、玻璃棒、解剖针、镊子、小毛笔、指形管、昆虫针、白瓷盘、漏斗、滤纸、标本瓶。

　　7 试剂

　　除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。

　　饱和食盐水：1 000 mL蒸馏水加入 360 g 氯化钠，搅拌至全部溶解。

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　　8 实验室鉴定

　　8 . 1 样品制备

　　将现场检疫抽取的送检种子样品充分混匀，制成平均样品。 采用四分法，视样品多少取平均样品的

　　二分之一至四分之三(较少样品时)作为试验样品，称取其质量并记录，每份试验样品不少于 1 kg,剩余的平均样品加贴标签作为保留样品保存。送检样品不足 1 kg 的全部检测。

　　8 . 2 虫样分离

　　8 . 2 . 1 剖粒检验

　　样品中被寄生的种子褐色至深褐色，中部凹陷，呈扁平状，在其扁平的区域内有黑点。 将具有上述特征的种子挑出，蒸馏水浸泡膨胀软化后置于体视显微镜下，用解剖针检查每粒种子，解剖出籽内幼虫、蛹或成虫。

　　8 . 2 . 2 比重检验

　　取一份平均样品，先放在白瓷盘内，用手持放大镜观察种子外表是否有虫体，特别是隔年种子可以发现死成虫或其他残体。 然后，把样品放在的干净的烧杯中，倒入饱和食盐水溶液，搅拌均匀后静置

　　30 min,取出漂浮在盐水上面的籽粒，剩余样品再用饱和食盐水重复浸泡一次，取出漂浮籽粒。把两次

　　漂浮籽粒放在蒸馏水中洗涤后浸泡软化后置于体视显微镜下用解剖针检查每粒种子，解剖出籽内幼虫、蛹或成虫。

　　8 . 3 镜检

　　将 8 . 2 . 1 或 8 . 2 . 2 中分离获得的可疑虫体置于体视显微镜下，观察形态特征，根据形态学鉴定特征并结合近似种的区别进行种类鉴定。

　　9 形态学鉴定

　　9 . 1 广肩小蜂科形态鉴定特征

　　广肩小蜂科形态鉴定特征：

　　a ) 前胸背板发达，明显宽大，长方形;

　　b) 触角 11 节~13 节，多为 12 节，着生在颜面中部;触角洼深;

　　c) 中胸背板常具有粗而密的顶针状刻点，盾纵沟深而完全;

　　d ) 雌蜂具短腹柄，腹部侧扁，末端延伸成犁头状，产卵管略伸出。

　　9 . 2 种子广肩小蜂属形态鉴定特征

　　种子广肩小蜂属形态鉴定特征：

　　a) 头部比胸部稍宽，颊长，几乎与复眼纵径等长;

　　b) 触角着生于颜面中部，雌蜂触角索节稍呈棒状，具浓密绒毛，5 节，棒节 3 节;雄蜂索节 4 节，棒节 3 节，触角索节具 4 个小柄，有轮生的长绒毛;

　　c) 小盾片卵圆形，凸起，与中胸背板等长;

　　d ) 胸腹侧片刀形，背面部分光滑且有光泽;

　　e ) 并胸腹节几乎垂直，平滑，具浓密且微小的网状皱，无中纵沟;

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　　f) 雌蜂腹部卵圆形，两侧稍紧缩，近末端逐渐尖锐，小于或等于胸部，各背板通常等长，产卵器稍突出;

　　g) 雄蜂腹部圆形，腹柄长大于宽。

　　9 . 3 苜蓿籽蜂形态特征

　　9 . 3 . 1 苜蓿籽蜂成虫形态鉴定特征

　　苜蓿籽蜂成虫形态鉴定特征(见附录 B 和附录 C 中图 C. 1) :

　　a) 体黑色;雌蜂体长(1.98±0.22) mm,雄蜂体长(1.56±0.10) mm ;

　　b ) 并胸腹节几乎垂直，中部具细密的网状纹;基部有时具不多且短的皱褶;

　　c) 前翅缘脉、后缘脉和痣脉几乎彼此等长;

　　d ) 雌蜂腹部腹面平坦，最后一节背板较平，不向上扬起;

　　e ) 雌蜂腹部卵圆形，两侧稍紧缩，近末端渐尖，除末端有绒毛外，各节光滑;

　　f) 雄蜂腹部近圆形，长明显小于胸部;各节光滑，无毛。

　　9 . 3 . 2 苜蓿籽蜂成虫生殖器形态鉴定特征

　　苜蓿籽蜂成虫生殖器形态鉴定特征(见附录 B 中表 B. 1 和附录 C 中图 C. 2) :

　　a ) 雌蜂外生殖器形态鉴定特征：

　　1) 产卵器外板与第 8 节背板融合的部分轻度硬化，硬化的区域集中围绕在第 8 节背板毛生长的区域;

　　2) 产卵器外板膜质;第 8 节背板具有两行毛，44 根~64 根;

　　3) 产卵器鞘长 250 μm~330 μm;

　　4) 产卵器鞘上的毛聚集在端部，6 根~16 根，从聚集的端部逐渐向产卵鞘韧带区域延伸。

　　b ) 雄蜂外生殖器形态鉴定特征：

　　1) 阳茎长 240 μm~315 μm ;

　　2) 背面观阳茎感觉孔 4 个，成对或分散;一对感觉孔间距较近，位于条纹区，但条纹不超过第2 感觉孔。 下方的另一对感觉孔间距较远;

　　3) 阳茎的腹面端部两侧各有 3 个感觉孔;腹面感觉孔小于背面感觉孔。

　　9 . 4 卵

　　卵长椭圆形，长 0.17 mm~0.24 mm,在体式显微镜下可见卵的一端稍尖，一端拉出一根丝状卵柄，长 0.30 mm~0.52 mm。卵透明且有光泽。

　　9 . 5 幼虫

　　乳白色，肾形、无足、头部有一对褐色上颚，其内缘有 1 个三角形的小齿。 根据幼虫头壳宽度可将其

　　分为 4 个龄期，其中，一龄幼虫头壳宽度范围为 0. 148 mm~0.216 mm,平均为 0. 182 mm;二龄幼虫头壳宽度范围为 0. 227 mm~ 0. 295 mm,平均为 0. 261 mm;三龄幼虫头壳宽度范围为 0. 306 mm~ 0.386 mm,平均为 0.346 mm;四龄幼虫头壳宽度范围为 0.397 mm~0.499 mm,平均为 0.448 mm。

　　9 . 6 蛹

　　裸蛹，平均体长 1.83 mm±0.02 mm,初期乳白色，1 d~2 d 后体色变为乳黄色，后逐渐变黑，复眼

　　变红色，近羽化时除复眼外全部黑色。

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　　10 结果评定

　　以成虫形态特征为依据，符合 8.1、8.2、8.3 形态特征可判定为苜蓿籽蜂(BruchophagusroddiGus- sakovskiy),其他虫态的形态特征作参考(见附录 C 中图 C. 3);仅符合 8. 1 或 8. 2 不可以判定为苜蓿

　　籽蜂。

　　1 1 标本和样品保存

　　将苜蓿籽蜂及重要的危害状标本妥善保存。 根据所得到的虫态制作成针插标本或浸渍标本。 含苜蓿籽蜂的样品，妥善保存至少 6 个月。

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　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　苜蓿籽蜂的生物学信息

　　A.1 分布

　　亚洲：印度、伊朗、伊拉克、以色列、哈萨克斯坦、土耳其、乌兹别克斯坦、中国(新疆、内蒙古、甘肃、宁夏、河北)。

　　欧洲：奥地利、保加利亚、捷克、塞尔维亚、斯洛文尼亚、法国、德国、匈牙利、摩尔多瓦、荷兰、波兰、罗马尼亚、俄罗斯、乌克兰。

　　北美州：美国、加拿大、墨西哥。

　　南美州：阿根廷、智利。

　　大洋洲：澳大利亚、新西兰。

　　A.2 寄主

　　苜蓿属 Medicagosp.、褐斑苜蓿 M.arabica、M.coerulea、黄花苜蓿 M.falcata、胶质苜蓿 M. glutinosa、南苜蓿 M.hispida、紫花苜蓿 M.sati℃a、草木樨属 Melilotussp.、冰草属 Astragalussp.、百脉根 Lotussp.。

　　A.3 生活史

　　A.3 . 1 卵期

　　成虫产卵选择 5 日~7 日龄的绿色荚果，新产下的卵无色、长椭圆形并具有光滑的卵壳，随着卵龄的增加，卵的颜色变为白色，卵期 1 d~3 d。

　　A.3 . 2 幼虫期

　　新孵出的幼虫无足，体白色且具有一对褐色的上颚;其虫体略微弯曲;每颗种子内仅有一条幼虫，如果温度条件适宜，幼虫可直接化蛹;如果温度低，幼虫可维持到对发育较适宜的条件;在特别干燥的条件

　　下，幼虫可在干种子内维持 1 a~2 a。

　　A.3 . 3 蛹期

　　蛹为白色，随后转为亮黑色，复眼红色。蛹在种子内发育完成，不形成茧。蛹期 6 d~9 d,也可随气

　　候变化而延长。

　　A.3 . 4 成虫期

　　成虫通过其幼虫时在种子里蛀出的洞羽化飞出。雄蜂可存活 1.20 d~1.90 d,雌蜂可存活 3.20 d~

　　4 . 70 d 。

　　A.3 . 5 交尾前期和交尾期

　　在交尾之前，雄蜂与雌蜂皆极为活跃，它们开始呆在一起雄蜂爬至雌蜂的背部伏在雌蜂的背上并梳

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　　理其触角。该过程将持续几秒钟到 0.5 min。当受到刺激后，雄蜂通过迅速的动作与雌蜂接合，后者在交尾中取较低的体位。一只雌蜂仅与一只雄蜂交尾一次。交尾期为 31.5 min~35.0 min。

　　A.3 . 6 产卵期

　　产卵期 40.6 h~58.0 h。高温可延长产卵期。一只雌蜂产卵 40 粒~65 粒。

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　　附 录 B

　　(规范性附录)

　　苜蓿籽蜂与其近似种检索表

　　B.1 成虫外部形态特征分种检索表

　　1. 胸部背面观隆起很高;并胸腹节与中胸的相切角度小于 90°;侧面观腹部不大于胸部长;腹部背面强烈隆起，弓度大;并胸腹节中部具细小的皱纹 …………………………………… 百脉根籽蜂胸部背面观不隆起或稍隆起;并胸腹节与中胸的相切角度大于 90°;侧面观腹部稍长于胸部长;

　　腹部背面一般隆起;并胸腹节具较粗糙的皱褶 …………………………………………………… 2

　　2 . 并胸腹节中部具不明显的网纹，有纵向皱褶。 腹部腹面凸出，最后一节稍向上扬起;雌蜂外生殖

　　器的第 2 负瓣片端部和基部的连线与第 2 基支端部和基部的连线之间的夹角小于 5 °。第 2 负瓣片弓度较大，其长度为 0.930 mm±0.02 mm ………………………………………… 三叶草籽蜂

　　并胸腹节中部具细网纹，在基部时有时具不多且短的皱褶。 腹部腹面平坦，最后一节背板不向上扬起;雌蜂外生殖器的第 2 负瓣片端部和基部的连线与第 2 基支端部和基部的连线之间的夹

　　B.2 苜蓿籽蜂与其近似种雌性外生殖器结构检索表

　　1. 产卵器鞘长明显大于 310 μm;第 8 节背板有 1 列毛 ………………………………… 三叶草籽蜂

　　产卵期鞘小于 310 μm;第 8 节背板有 2 列毛 …………………………………………………… 2

　　2. 产卵器鞘长 260 μm~290 μm …………………………………………………………… 苜蓿籽蜂产卵器鞘长小于 225 μm ……………………………………………………………… 百脉根籽蜂

　　B.3 苜蓿籽蜂与其近似种雄性外生殖器结构检索表

　　表 B.1 苜蓿籽蜂及其近似种外生殖器比较 单位为微米

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　　表 B.1(续) 单位为微米

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　　附 录 C

　　(规范性附录)

　　苜蓿籽蜂与其近似种形态特征图

　　苜蓿籽蜂与其近似种形态特征图见图 C.1~图 C.3。

　　a)雌成虫 b)雄成虫

　　c)并胸腹节 d)雌虫腹部

　　图 C.1 苜蓿籽蜂形态特征

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　　a)雌虫外生殖器 b)雄虫生殖器背面观 c)雄虫生殖器腹面观

　　说明：

　　1 — 分支刺;

　　2 — 第 2 负瓣片;

　　3 — 产卵器外板;

　　4 — 产卵器内板;

　　5 — 第 8 节背板;

　　6 — 第 8 节背板毛;

　　7 — 产卵器鞘;

　　8 — 产卵器鞘毛;

　　9 — 阳茎皱纹区;

　　10 — 阳茎;

　　11 — 阳茎背感觉孔;

　　12 — 指状突;

　　13 — 阳茎腹感觉孔。

　　图 C.2 苜蓿籽蜂成虫外生殖器

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　　a)三叶草籽蜂雌成虫 b)百脉根籽蜂雌成虫

　　图 C.3 苜蓿籽蜂相似种成虫

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　　参 考 文 献

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