GB/T 28069-2011 根螨检疫鉴定方法

　　ICS 65. 020. 01 B 16

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 28069—2011

　　根螨检疫鉴定方法

　　Detection and identification ofbulb mites(Rhizoglyphusspp. )

　　2011-12-30发布 2012-06-01实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 28069—2011

　　前 言

　　本标准按照 GB/T 1. 1—2009给出的规则起草 。

　　本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271) 提出并归 口 。

　　本标准起草单位 :福建农林大学 、中华人民共和国福建出入境检验检疫局 。

　　本标准主要起草人 :范青海 、陈艳 、林阳武 、苏秀霞 。

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　　根螨检疫鉴定方法

　　1 范围

　　本标准规定了根螨属螨类(Rhizoglyphusspp. ) 的检疫鉴定以雌 、雄成螨的形态特征为鉴定依据 ;明确了根螨属螨类现场检疫 、实验室分离与饲养 、标本制作 、样品保存的方法 。

　　本标准适用于蔬菜 、花卉 、中药材等根螨寄主植物球根 、球茎 、鳞茎及块茎中根螨的检疫鉴定 。

　　2 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　2. 1

　　颚体 gnathosoma

　　位于身体前端或前端腹面 , 由颚基和两对附肢即螯肢和须肢组成 。

　　2. 2

　　躯体 idiosoma

　　蜱螨颚体后方的体段 ,常以围颚沟与颚体分开 , 占身体的大部分 ,多呈囊状 。

　　2. 3

　　前足体 propodosoma

　　第一对和第二对足着生的体段 。

　　2. 4

　　后足体 metapodosoma

　　第三对和第四对足着生的体段 。

　　2. 5

　　格氏器 Grandjean’s organ

　　粉螨前足体前侧缘形成的一环绕颚体基部的薄骨板 ,为指状或叉状等多种形状 。

　　2. 6

　　生殖吸盘 genitalpapillae

　　生殖区内小 型 杯 状 或 盘 状 结 构 , 偶 尔 具 柄 , 位 于 生 殖 板 上 、生 殖 孔 或 散 布 于 生 殖 孔 两 侧 的 体壁上 。

　　2. 7

　　肛吸盘 analsuckers

　　粉螨等螨类的雄螨交配器 ,位于肛门两侧的一对大型吸盘 。

　　2. 8

　　跗节吸盘 tarsalsuckers

　　雄成螨特有特征 。位于跗节 Ⅳ , 由跗节毛(d,e) 特化而成的构造 。

　　2. 9

　　生殖褶 genitalfold

　　无气门螨类遮盖生殖孔的分叉形的褶 。

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　　2. 10

　　克氏器 Claparede’s organ

　　仅发现于前幼螨和幼螨期的一种器官 ,位于前 、中两足基节之间 ,具柄和半球形的端部 ,或呈凹陷状结构 。

　　3 根螨基本信息

　　根螨学名 :Rhizoglyphusspp.。

　　英文名 :bulb mites。

　　属蜱螨亚纲 Acari、真螨总目 Acariformes、疥螨目 Sarcoptiformes、粉螨科 Acaridae。

　　根螨各发育螨态都可随货物 、土壤 、包装材料以及运输工具远距离传播 ; 近距离传播主要以休眠体(第二若螨) 附在昆虫等动作上或随真菌孢子等扩散 。此外根螨本身可做小范围移动 。

　　根螨寄主植物的相关资料参见附录 A。

　　4 方法原理

　　显微镜观察检测获得的样本卵 、幼螨 、第一若螨 、第二若螨(休眠体) 或第三若螨和成螨等 ,依据形态特征进行鉴定 。

　　5 仪器、试剂

　　5. 1 仪器与用具

　　放大镜 、体视显微镜 、生物显微镜(具油镜) 、解剖刀 、镊子 、挑针 、环形针 、指形管 、小培养皿 、吸管 、小号驼毛笔 、载玻片 、盖玻片 、电热板 、干燥箱 、贝氏漏斗(Berlese funnel) 、标签 、铅笔 、油漆笔 。

　　5. 2 试剂

　　除另有规定外 ,所有试剂均为分析纯 。

　　5. 2. 1 奥氏液(Oudemans’fluid) :液浸标本保存液 。配方 :70%乙醇 87mL、冰醋酸 8 mL、甘油 5 mL。

　　5. 2. 2 内氏液(Nesbitt’s fluid) :标本清洗 、软化液 ,经过清洗的标本透明 、舒展 。配方 :水合氯醛 40g、浓盐酸 2. 5 mL、蒸馏水 25mL。

　　5. 2. 3 霍氏 液 ( Hoyer’s medium) : 玻 片 标 本 封 固 液 。 配 方 : 水 合 氯 醛 100 g、阿 拉 伯 胶 15 g、甘 油10mL、蒸馏水 25mL。

　　5. 2. 4 中性树胶(NeutralBalsam) :玻片标本封片液 。

　　6 现场检验

　　检查蔬菜 、花卉 、中药材等植物鳞茎 、球茎 、块茎 、根茎和块根等表面有无腐烂 、裂缝 、伤口以及土壤 ,肉眼或放大镜下若发现有乳白色囊状物 , 即有可能是根螨或粉螨科其他属的螨类 ,需要带回实验室做进一步检查鉴定 。

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　　7 实验室检测

　　7. 1 检测方法

　　7. 1. 1 表面检测

　　在放大镜或体视显微镜下检查植物体表面 ,重点检查有病菌发生的腐烂组织以及有裂缝或伤 口 的组织 ,借助解剖刀和挑针仔细检查 ,若有乳白色囊状物活动 ,需要调整显微镜放大倍数检查 ,确认是螨类后 ,用挑针或驼毛笔挑入盛有奥氏液的指形管中 , 同时放入采集标签 ,并登记采集地点 、时间 、输出国家或地区 、寄主 、采集人等内容 。

　　7. 1. 2 贝氏漏斗分离

　　取待检植物活体 、残片 、土屑等放置于贝氏漏斗网上 ,漏斗下放置承接器皿 ,器皿内放少量清水 , 以防螨逃逸或干死 。用 40W 灯泡为热源 ,烘烤干燥 24h,然后将承接器皿放在体视显微镜下检查 ,发现螨类后 ,挑入盛有奥氏液的指形管 ,并做好标签和记录 。

　　7. 2 根螨的饲养

　　对无法确定种类的卵 、幼螨 、若螨 ,可将其放置在盛有酵母片的培养皿或指形管里 ,然后放于温度为25℃ ~ 30℃ 、相对湿度 90%以上的黑暗培养箱里饲养 , 同时做好饲养记录 。数天至十多天后发育为成螨 ,在体视显微镜下进行初步观察 ,制作成玻片标本 ,再进行鉴定 。

　　7. 3 标本制作

　　7. 3. 1 清洗

　　在体视显微镜下 ,用环形针将螨移入盛有内氏液的小培养皿中 ,浸泡 24h。

　　7. 3. 2 制片

　　在载玻片上滴 1滴 ~ 2滴的霍氏液 。从内氏液中挑出根螨 ,触碰滤纸去除多余液体 ,然后放入霍氏液 ,整姿后 ,盖上盖玻片 ,放在 60W 白炽灯或 500W 电热板上加热至气泡排出 ,用油漆笔在载玻片下方标出螨体位置 ,并写明采集标签(见图 1) 。在低倍显微镜下检查 、调整螨体位置 ,用 40倍以下物镜进行初步鉴定 。

　　图 1 玻片标本标签标注方法图示

　　7. 3. 3 玻片标本保藏

　　将玻片标本放在 50℃左右干燥箱中干燥 ,1周后即可用于油镜(100倍) 观察 。干燥约 3个月后 ,在盖玻片周围封中性树胶 ,继续干燥 1 d~ 2 d 即可在常温下保存 ,也可置于干燥器中长期保存 。

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　　7. 4 镜检

　　在生物显微镜下观察玻片标本 ,种类鉴定需要在 100倍油镜下观察 、测量 ,必要时需要对关键特征照相 。

　　8 鉴定特征

　　8. 1 成螨(参见图 B. 1~ 图 B. 4)

　　躯体长 500μm~ 900μm ,半透明 ,乳白色至浅褐色 ,足深褐色 。前足体着生 4对背毛和 1对足 Ⅰ 基节上毛 ,外顶毛(ve) 微小 ,位于内顶毛(vi) 后方 、背板外缘 。 内胛毛(sci) 显著短于外胛毛(sce) 。基节上毛(scx) 光滑 。后半体着生 12对毛 。生殖褶(genital folds) 发达 。跗节 Ⅰ 和跗节 Ⅱ上近基毛(ba) 粗壮 ,靠近感棒(ω1 ) 。 跗节 Ⅰ 末端具 4 根长毛和 1 根长感棒(ω3 ) 。 跗节 Ⅱ 末端具 4 根长毛 , 跗节 Ⅲ末 端 具3 根长毛 ;雌螨跗节 Ⅳ末端具 2 根长毛 ,雄螨跗节 Ⅳ末端具 1 根长毛 。 足毛序( Ⅰ ~ Ⅳ) :基节 1,0,2, 1,转节 1,1,1,0,股节 1,1,0,1,膝节 2+2σ,2+1σ,1+1σ,0,胫节 2+1φ,2+1φ, 1+1φ, 1+1φ, 跗节 8c+ 4t+3ω+1ε,8c+4t+1ω,7c+3t,8c+2t。

　　注 : σ:膝节感棒 ; φ:胫节感棒 ;ω:跗节感棒 ;c:锥状毛 ;t:触毛 。

　　雄螨生殖孔内有阳茎 ,肛孔后侧有 1对肛吸盘 ,跗节 Ⅳ具 2个跗节吸盘 。异型雄螨一侧或两侧的足Ⅲ异常膨大 ,末端钩状[参见图 B. 4 b) ] 。

　　根螨属各发育期螨态鉴定可参照附录 C。

　　中国根螨属雌 、雄成螨分类鉴定可参照附录 D 和附录 E。

　　8. 2 第三若螨[参见图 B. 5 a) ]

　　躯体囊状 ,有两对生殖吸盘 ,足毛序与雌成螨相同 。但无生殖褶 ,肛毛短 。

　　8. 3 休眠体(亦称第二若螨) [参见图 B. 5 d) , 图 B. 5 e) ]

　　躯体扁平 ,深褐色 ,强骨化 。颚体微小,螯肢完全退化 。除 vi和 h2 外 ,其他背毛均微小 。基节上毛 scx位于腹面 。无 生 殖 褶 ,有 两 对 生 殖 吸 盘 , 肛 区 有 4 对 吸 盘 。跗 节Ⅰ感 棒 ω3 缺 如 , 近 基 毛 ba 棒 状 。膝 节感棒 σ″缺如 。足毛序(Ⅰ~ Ⅳ) :基节 1,0,2,1,转节 1, 1, 1,0,股节 1, 1,0, 1,膝节 2+1σ,2+1σ,1σ,0,胫节2+1φ,2+1φ,1+1φ,1+1φ,跗节 1c+8t+2ω+1ε,1c+8t+1ω,8t,1c+7t。

　　8. 4 第一若螨[参见图 B. 5 b) ]

　　躯体囊状 ,乳白色 , 足褐色 。腹毛 3a和 4a缺如 。无生殖褶 ,有一对生殖吸盘 。 跗节 Ⅰ 感棒 ω3 缺如 ,转节 Ⅳ和胫节 Ⅳ无毛 。足毛序( Ⅰ ~ Ⅳ) : 基节 1, 0, 1, 0, 转节 0, 0, 0, 0, 股节 1, 1, 0, 0, 膝节 2+2σ, 2+1σ,1+1σ,0,胫节 2+1φ,2+1φ,1+1φ,1+1φ,跗节 8c+4t+2ω+1ε,8c+4t+1ω,7c+3t,7c+1t。

　　8. 5 幼螨[参见图 B. 5 c) ]

　　躯体囊状 ,乳白色 ,足颜色随着发育逐渐加深 。 背毛 f2 和 h3 缺如 ,腹毛 3a和 4a缺如 。基节 Ⅰ 和Ⅱ 间有克氏器(Claparède organ) 。无生殖孔 、生殖毛 、生殖吸盘 、肛毛 。 只有三对足 , 跗节 Ⅰ 感棒 ω2 和ω3 缺如 。足毛序( Ⅰ ~ Ⅳ) :基节 0,0,0,转节 0,0,0,股节 1,1,0,膝节 2+2σ,2+1σ,1+1σ,胫节 2+1φ, 2+1φ,1+1φ,跗节 8c+4t+1ω+1ε,8c+4t+1ω,7c+3t。

　　9 结果判定

　　以成螨的形态特征为依据 。外顶毛(ve) 极小并且位于内顶毛(vi) 后 方 、前 足 体 背 板 外 缘 , 内 胛 毛

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　　(sci) 显著短于外胛毛(sce) ,后半体着生 12对毛 ,跗节 Ⅰ 和跗节 Ⅱ上近基毛(ba) 粗壮 ,靠近感棒(ω1 ) ,跗节 Ⅰ 末端具 4根长毛和 1 根长感棒(ω3 ) ,跗节 Ⅱ末端具 4根长毛 。符合上述形态的可鉴定为根螨 。

　　10 样品保存

　　危害状样品以及根螨应妥善保存 。放入盛有奥氏液或 70% ~ 75%乙醇的指形管中制成浸渍标本 ,并插入标签 ;再将指形管放入盛有 70% ~ 75%乙醇的广口瓶中 ,密封保存 。

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　　附 录 A (资料性附录)根螨寄主植物

　　寄主 植 物 类 群 有 : 葱 科 Alliaceae、石 蒜 科 Amaryllidaceae、夹 竹 桃 科 Apocynaceae、天 南 星 科Araceae、菊科 Asteraceae、山 毛 榉 科 Betulaceae、木 棉 科 Bombacaceae、凤 梨 科 Bromeliaceae、铃 兰 科Convallariaceae、旋 花 科 Convolvulaceae、十 字 花 科 Cruciferae、葫 芦 科 Cucurbitaceae、苏 铁 科Cycadaceae、薯 蓣 科 Dioscoreaceae、大 戟 科 Euphorbiaceae、龙 胆 科 Gentianaceae、苦 苣 苔 科Gesneriaceae、禾 本 科 Gramineae、鸢 尾 科 Iridaceae、豆 科 Leguminosae、百 合 科 Liliaceae、兰 科Orchidaceae、芍药科 Paeoniaceae、棕 榈 科 Palmae、露 兜 树 科 Pandanaceae、蓼 科 Polygonaceae、毛 茛 科Ranunculaceae、蔷薇科 Rosaceae、茄科 Solanaceae、泥炭藓科 Sphagnaceae、梧桐科 Sterculiaceae、延龄草科 Trilliaceae、伞形科 Umbelliferae、姜科 Zingiberaceae。

　　常见寄主有 :

　　a) 蔬菜类 : 洋葱 Allium cepa、蕌头 Allium chinense、大蒜 Allium sativum、韭菜 Allium tuberosum、海芋 Alocasia macrorrhiza、野 芋 Colocasia antiquorum 、芋 Colocasia esculenta、山 芋Colocasia sp. 、姜 黄 Curcuma longa、胡 萝 卜 Daucus carota、番 薯 Ipomoea batatas、鹿 葱Lycorissquamigera、马铃薯 Solanum tuberosum、白 鹤 芋 Spathiphyllum kochii和 生 姜 Zin- giberoficinale等 ;

　　b) 花卉类 :唐菖蒲 Gladiolushybrida、风信子 Hyacinthus sp. 、百合 Lilium sp. 、水仙 Narcissus sp. 、芍药 Paeonia sp. 和郁金香 Tulipa sp. 等 ;

　　c) 中药材类 :半夏 Pinelliaternata、天麻 Gastrodiaelata和何首乌 Polygonum multiflorum 等 。

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　　附 录 B

　　(资料性附录)

　　根螨图例

　　图 B. 1 根螨(Rhizoglyphussp. ) 雌成螨背面观

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　　图 B. 2 根螨(Rhizoglyphussp. ) 雌成螨腹面观

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　　a) 雌螨足 Ⅰ

　　b) 雌螨足 Ⅱ

　　c) 雌螨足 Ⅲ

　　图 B. 3 根螨(Rhizoglyphussp. ) 雌成螨足背面观

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　　d) 雌螨足 Ⅳ

　　图 B. 3 (续)

　　a) 同型雄螨足 Ⅲ

　　b) 同型雄螨足 Ⅳ

　　图 B. 4 根螨(Rhizoglyphussp. ) 雄螨足背面观

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　　c) 异型雄螨足 Ⅲ

　　d) 异型雄螨足 Ⅳ

　　图 B. 4 (续)

　　a) 第三若螨腹面 b) 第一若螨腹面 c) 幼螨腹面

　　图 B. 5 根螨(Rhizoglyphussp. ) 未成熟期螨态

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　　d) 休眠体(第二若螨) 背面 e) 休眠体(第二若螨) 腹面

　　图 B. 5 (续)

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　　附 录 C

　　(资料性附录)

　　根螨属各发育期螨态检索表

　　1. 具 4对足 ,后半体有 12对毛 ;无克氏器 ,具 1对 ~ 2对生殖吸盘 2

　　-. 具 3对足 ,后半体有 10对毛 ;有克氏器 ,无生殖吸盘 幼螨

　　2. 躯体囊状 ,乳白色,螯肢钳状 ,多数背毛长 ,无肛板 ,膝节 Ⅰ 具 2感棒 3

　　-. 躯体扁平 ,褐色,螯肢退化 ,多数背毛微小 ,具肛板 ,膝节 Ⅰ 具 1感棒

　　休眠体(第二若螨)

　　3. 具 2对生殖吸盘 ,有腹毛 3a和 4a;跗节 Ⅰ 端具感棒 ω3 ,足 Ⅳ股节 、膝节和胫节具毛或感棒 4

　　-. 具 1对生殖吸盘 ,腹毛 3a和 4a缺如 ;跗节 Ⅰ 无感棒 ω3 ,足 Ⅳ股节 、膝节和胫节无毛或感棒

　　第一若螨

　　4. 具生殖褶 ,有受精囊或阳茎 成螨…5

　　-. 无生殖褶 ,无受精囊或阳茎 第三若螨

　　5. 具阳茎和肛吸盘 ,无受精囊 ,跗节 Ⅳ具 2个吸盘 雄成螨…6

　　-. 无阳茎和肛吸盘 ,有受精囊 ,跗节 Ⅳ无吸盘 雌螨

　　6. 足 Ⅲ正常 ,不异常膨大 ,跗节爪小 同型雄螨

　　-. 足 Ⅲ异常膨大 ,跗节爪发达 异型雄螨

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　　附 录 D

　　(资料性附录)

　　中国根螨属(Rhizoglyphusspp. ) 雌成螨分种检索表1)

　　1. 输卵管两侧的小骨片接近 , 间距小于 45μm;基节上毛 scx 细长或微小 2

　　-. 输卵管两侧的小骨片远离 , 间距大于 60μm;基节上毛 scx粗壮 6

　　2 肛毛微小 ,若长则呈鞭状 ;假肛毛 ps2 微小 ,不长于 ps1 和 ps3 ;跗节 Ⅰ 锥状毛 ba长 ,超出 ω1 长度

　　的三分之二 3

　　-. 肛毛粗壮 , 皆长于 30μm;假肛毛 ps2 明显长于 ps1 和 ps3 ;跗节 Ⅰ 锥状毛 ba短 ,约为 ω1 的一半 .

　　花叶芋根螨 R. caladiiManson,1972

　　3. 背毛 d2 远离末体腺开口(gla) ,两者间距大于 30μm 5

　　-. 背毛 d2 接近末体腺开口(gla) ,两者间距小于 20μm 4

　　4. 肛毛 3对 ,ps1 明显长于 ps2 和 ps3 ;c1 和 d1 长于 d2 的 2倍

　　单列根螨 R. singularisManson,1972

　　-. 肛毛 6对 ,均微小 ;c1 、d1 和 d2 均微小 大蒜根螨 R. alliiBu & Wang,1995

　　5. 肛侧毛 ad1 和 ad2 以及假肛毛 ps1 微小 ,不长于假肛毛 ps3

　　罗宾根螨 R. robiniClaparède,1869

　　-. 肛侧毛 ad1 和 ad2 长于 ps3 或 ad3 的 3倍 ;假肛毛 ps1 长于 ps3

　　长毛根螨 R. setosusManson,1972

　　6. 格式器分叉显著 ,分叉点接近基部 ;基节上毛 scx末端分叉

　　刺足根螨 R. echinopus (Fumouze& Robin,1868)

　　-. 格式器分叉短 ,分叉点位于端部四分之一处 ;基节上毛 scx末端不分叉 7

　　7. 须肢基节 上 毛 elcp 长 30μm~ 35μm , 背 毛 sci长 48μm ~ 60μm ,c1 长 72μm ~ 98μm ,e1 长

　　84μm~ 108μm 水仙根螨 R. narcissiLin & Ding,1990

　　-. 须肢基节 上 毛 elcp 长 19μm~ 25μm , 背 毛 sci长 17μm ~ 28μm ,c1 长 38μm ~ 55μm ,e1 长

　　60μm~ 73μm 澳登根螨 R. ogdeniFan & Zhang,2004

　　1) 不含猕猴桃根螨 Rhizoglyphusactinidia Zhang, 1994和淮南根螨 R. huainanensis Zhang & Li,2000。该两种原描述缺少定种依据 ,据查模式标本已遗失 。

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　　附 录 E

　　(资料性附录)

　　中国根螨属(Rhizoglyphusspp. ) 雄成螨分种检索表2)

　　1. 假肛毛 ps1 短 ,不长于 ps2 2

　　-. 假肛毛 ps1 长 ,至少达 ps2 的 3倍 4

　　2. 假肛毛 ps1 接近肛吸盘 ,与肛吸盘之间的距离小于其长度 ;假肛毛 ps2 位于肛吸盘侧面 ;肛盘大 ,

　　并有发达的放射状网纹 花叶芋根螨 R. caladiiManson,1972

　　-. 假肛毛 ps1 远离肛吸盘 ,与肛吸盘之间的 距 离 大 于 其 长 度 的 4 倍 ; 假 肛 毛 ps2 位 于 肛 吸 盘 的 后

　　方 ;肛盘较小 ,无放射状网纹或仅有数个小孔 3

　　3. 肛盘小 ,其直径不及肛吸盘直径的四分之一 ;背毛 c1 长 25μm~ 38μm ,d1 长 35μm~ 45μm ,d2

　　长 27μm~ 33μm 长毛根螨 R. setosusManson,1972

　　-. 肛盘较大 ,其直径约为肛吸盘直径的三分之一 ;背毛 c1 、d1 和 d2 均微小 ,约为 10μm~ 11μm 大

　　蒜根螨 R. alliiBu & Wang,1995

　　4. 背毛 d2 远离末体腺开口(gla) ;肛盘微小 ,无放射状网纹 ; 阳茎内壁不呈波浪状弯曲 5

　　-. 背毛 d2 接近末体腺开口(gla) ;肛盘发达 ,有发达放射状网纹 ; 阳茎内壁呈波浪状弯曲单列根螨

　　R. singularisManson,1972

　　5. 格氏器分叉 ; 阳茎粗短 ,末端平截 6

　　-. 格氏器不分叉 ; 阳茎末端尖 罗宾根螨 R. robiniClaparède,1869

　　6. 格氏器分叉显著 ,分叉点位于基半部 ;基节上毛 scx末端分叉

　　刺足根螨 R. echinopus (Fumouze& Robin,1868)

　　-. 格氏器分叉短 ,分叉点位于端部四分之一处 ;基节上毛 scx末端不分叉 7

　　7. 须肢基节上毛 elcp长 27μm~ 30μm ,背毛 c1 长 16μm~23μm,e1 长 39μm~ 63μm

　　水仙根螨 R. narcissiLin & Ding,1990

　　-. 须肢基节上毛 elcp长 17μm~ 20μm ,背毛 c1 长 33μm~ 35μm,e1 长 71μm~ 100μm

　　澳登根螨 R. ogdeniFan & Zhang,2004

　　2) 不含猕猴桃根螨 Rhizoglyphusactinidia Zhang, 1994和淮南根螨 R. huainanensis Zhang & Li,2000。该两种原描述缺少定种依据 ,据查模式标本已遗失 。