GB/T 23381-2009 食品中6-苄基腺嘌呤的测定 高效液相色谱法

　　ICS 67 . 050 X 04

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 23381—2009

　　食品中 6-苄基腺嘌呤的测定

　　高效液相色谱法

　　Determination of6-benzylaminopurinein foods—

　　High-performanceliquid chromatography

　　2009-04-08 发布 2009-05-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 23381—2009

　　前 言

　　本标准的附录 A 为资料性附录 。

　　本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出 。

　　本标准由全国食品工业标准化技术委员会食品通用检测技术分技术委员会归 口 。

　　本标准主要起草单位：上海市质量监督检验技术研究院 、国家食品质量监督检验中心(上海)。

　　本标准主要起草人：段文锋 、林琳 、熊薇 、曹程明 。

　　Ⅰ

　　GB/T 23381—2009

　　食品中 6-苄基腺嘌呤的测定

　　高效液相色谱法

　　1 范围

　　本标准规定了用高效液相色谱法测定食品中 6-苄基腺嘌呤(6-BA)含量的方法 。

　　本标准适用于果蔬类(豆芽 、黄瓜 、番茄 、香菇 、草莓 、橙类)等植物性食品及其制品中 6-苄基腺嘌呤的测定 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682—2008 , ISO 3696:1987 , MOD)

　　3 方法提要

　　试样经甲醇提取 、浓缩并净化后，用高效液相色谱检测，外标法定量 。

　　4 试剂和材料

　　除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水 。

　　4 . 1 甲醇：色谱纯 。

　　4 . 2 冰乙酸 。

　　4 . 3 6-苄基腺嘌呤标准品：纯度 ≥99 . 0% 。

　　4 . 4 C18 固相萃取柱：6 mL , 500 mg,或相当者，使用前依次用 5 mL 甲醇 、10 mL水活化 。

　　4 . 5 乙酸铵溶液(0 . 02 mol/L) ：称取 1 . 54 g 乙酸铵，用适量水溶解，加入 1 . 0 mL 冰乙酸，加水定容至1 000 mL 。

　　4 . 6 6-苄基腺嘌呤标准储备液：准确称取 6-苄基腺嘌呤标准品 0 . 010 0 g 于 100 mL 的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度 。此溶液 1 . 0 mL相当于 0 . 10 mg 6-苄基腺嘌呤 。

　　4 . 7 6-苄基腺嘌呤标准工作液：取 6-苄基腺嘌呤标准储备液 1 . 0 mL,用甲醇稀释并定容至 100 mL,此溶液 1 . 0 mL相当于 0 . 001 0 mg 6-苄基腺嘌呤 。

　　4 . 8 微孔滤膜：0 . 45 μm,有机相 。

　　5 仪器和设备

　　5 . 1 组织捣碎机 。

　　5 . 2 离心机：转速不低于 4 000 r/min 。

　　5 . 3 超声波清洗仪 。

　　5 . 4 旋转蒸发仪 。

　　5 . 5 高效液相色谱(HPLC)仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。

　　5 . 6 固相萃取装置 。

　　5 . 7 电子天平：感量 0 . 1 mg 。

　　1

　　GB/T 23381—2009

　　6 样品处理

　　6 . 1 样品提取

　　称取经组织捣碎机捣碎的样品约 10 g(精确到 0 . 01 g)于 50 mL 离心管中，加入 20 mL 甲醇，超声提取 15 min,以转速不低于 4 000 r/min 离心 10 min,上清液转入 50 mL梨形瓶中，样品再次用 20 mL甲醇超声提取 15 min,离心合并上清液，用旋转蒸发 仪(不 超 过 60 ℃) 浓 缩 至 近 干，去 除 甲 醇，残 液 待净化 。

　　6 . 2 样品净化

　　将 6 . 1 残液以 2 mL/min 流速通过预先活化的固相萃取柱(4 . 4) ,用少量水(约 2 mL) 洗涤梨形瓶，洗液过固相萃取柱，再用 5 mL水洗涤固相萃取柱，去除杂质后用甲醇洗脱并定容至 5 . 0 mL,混匀后经0 . 45 μm 滤膜过滤，作为待测液供 HPLC分析 。

　　7 高效液相色谱测定

　　7 . 1 HPLC参考条件

　　a) 色谱柱：C18 , 250 mm×4 . 6 mm , 5 μm 或相当型号色谱柱;

　　b) 柱温：30 ℃ ;

　　c) 检测波长：267 nm ;

　　d) 流动相：甲醇 ∶ 0 . 02 mol/L 乙酸铵溶液(4 . 5) = 1 ∶ 1 ;

　　e) 流速：1 . 0 mL/min ;

　　f) 进样体积：10 . 0 μL 。

　　7 . 2 测定

　　分别取 6-苄基腺嘌呤标准工作液和待测液 10 . 0 μL 注入高效液相色谱仪进行测定，6-苄基腺嘌呤标准图谱参见图 A. 1 。

　　7 . 3 结果计算

　　样品中 6-苄基腺嘌呤的含量(X)以毫克每千克(mg/kg)表示，按式(1)计算：

　　X = × 1 000 ………………………………( 1 )

　　式中：

　　X— 样品中 6-苄基腺嘌呤的含量，单位为毫克每千克(mg/kg) ;

　　A2 — 样品峰面积;

　　C— 6-苄基腺嘌呤标准溶液浓度的数值，单位为毫克每毫升(mg/mL) ;

　　V— 试样体积，单位为毫升(mL) ;

　　A1 — 标样峰面积;

　　m— 样品质量，单位为克(g) 。

　　计算结果保留两位有效数字 。

　　8 方法定量检出限

　　本方法的定量检出限为：0 . 02 mg/kg 。

　　9 允许差

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10% 。

　　2

　　GB/T 23381—2009

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　6-苄基腺嘌呤标样图谱

　　图 A.1 6-苄基腺嘌呤标样图谱(标样浓度 1 . 0 μg/mL)