GB/T 22913-2008 石鲽

　　ICS 65 . 150 B 51

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 22913—2008

　　石 鲽

　　Stone flounder

　　2008-12-31 发布 2009-05-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 22913—2008

　　前 言

　　本标准的附录 A 为资料性附录 。

　　本标准由中华人民共和国农业部提出 。

　　本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归 口 。

　　本标准起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所 。

　　本标准主要起草人：张岩 、刘曼红 、肖永双 、于函 。

　　Ⅰ

　　GB/T 22913—2008

　　石 鲽

　　1 范围

　　本标 准 规 定 了 石 鲽(kareiusbicoloratus)的 主 要 形 态 特 征 、生 长 与 繁 殖 、遗 传 学 特 性，以 及 检 测方法 。

　　本标准适用于石鲽的种质检测与鉴定 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 。

　　GB/T 18654 . 12 养殖鱼类种质检验 第 12 部分：染色体组型分析

　　GB/T 19782 中国对虾

　　GB 20556—2006 三疣梭子蟹

　　3 名称与分类

　　3 . 1 学名

　　石鲽 kareiusbicoloratus Basilewsky , 1855 。

　　3 . 2 分类位置

　　鲽形 目 (Pleuronectiformes) 、鲽科(Pleuronectidae) 、鲽亚科(Pleuronectinae) 、石鲽属(kareius)。

　　4 主要形态特征

　　4 . 1 外部形态特征

　　体长椭圆形，背腹缘凸度相似 。尾柄长与高相近 。头部背缘在上眼前缘上方有一凹刻 。 大鱼有粗骨质突起，前端延向两眼前缘 。前鼻孔有管状皮突起;右鼻孔位眼间隔前端吻右侧;左鼻孔约位上眼前缘中央头左侧 。两颌左侧略长，右上颌约达下眼瞳孔前缘下方 。 口 闭时下颌微突出 。有一下颏突起 。两颌有扁牙一行，牙端截形 。前鳃盖后缘外露而不游离 。鳃孔上端略过胸鳍基 。鳃峡后端距眼较距前鳃盖骨后缘近 。

　　小鱼皮内埋有退化的小鳞 。成年鱼无鳞，在体右侧沿侧线及侧线与背 、腹缘间各有一纵行粗骨板，下方两行骨板较小;左侧除侧线前方头部有一纵行粗骨嵴外，常无粗骨板，仅少数在侧线与背缘间有 一纵行分散的小骨板 。左右侧线无明显的弧状弯曲部，颞上枝短，约达第 6 背鳍条附近;有眼下枝 。

　　背鳍鳍条不分枝，后端鳍条很细小 。臀鳍形似背鳍 。第一间脉棘突出 。右胸鳍小刀状，第 4 鳍条最长，中央 6 鳍条 ~ 8 鳍条分枝;左胸鳍圆形，中央无或有 1 鳍条 ~ 3 鳍条分枝，长约为左胸鳍 4/7 ~ 3/4 。腹鳍基短，近似对称，鳍 条 不 分 枝，第 3 鳍 条 最 长，约 达 臀 鳍 始 点 前 后 。 尾 鳍 圆 截 形，中 央 11 鳍 条 ~ 13 鳍条分枝 。

　　头体右侧黄褐色，粗 骨 板 微 红，鳍 橙 黄 色，尾 鳍 较 暗 。 体 侧 及 鳍 上 常 有 白 斑 。 石 鲽 的 外 部 形 态 见图 1 。

　　1

　　2

　　GB/T

　　

　　22913—2008

　　

　　图 1 石鲽的外部形态

　　4 . 2 可量性状

　　可量性状实测比值见表 1 。

　　表 1 可量性状实测比值

　　项 目

　　比 值

　　体长/体高

　　2 . 2 ~ 2 . 4

　　体长/头长

　　3 . 4 ~ 3 . 7

　　头长/吻长

　　4 . 5 ~ 6 . 4

　　头长/眼间距

　　12 . 4 ~ 16 . 8

　　头长/眼径

　　4 . 7 ~ 6 . 5

　　4 . 3 可数性状

　　4 . 3 . 1 背鳍鳍式：D. 64 ~ 72 。

　　4 . 3 . 2 臀鳍鳍式：A. 49 ~ 54 。

　　4 . 3 . 3 胸鳍鳍式：P. 12 。

　　4 . 3 . 4 腹鳍鳍式：V. 6 。

　　4 . 3 . 5 尾鳍鳍式：C. 18 。

　　4 . 3 . 6 侧线鳞：74 ~ 80 。

　　4 . 3 . 7 鳃耙数：3 ~ 5+5 ~ 6 。

　　4 . 3 . 8 牙式：10 ~ 11+15 ~ 20/11 ~ 16+18 ~ 25 。

　　4 . 3 . 9 脊椎骨数为 11+27 ~ 28 。

　　5 生长与繁殖

　　5 . 1 生长

　　石鲽生长方程和体长体重关系参见附录 A 。石鲽的体长与体重的实测值见表 2 。

　　表 2 石鲽体长与体重的实测值

　　体长/cm

　　体重/g

　　体长/cm

　　体重/g

　　体长/cm

　　体重/g

　　136

　　61 . 07

　　139

　　71 . 39

　　144

　　83 . 35

　　136

　　67 . 23

　　140

　　67 . 80

　　144

　　76 . 21

　　138

　　72 . 36

　　140

　　67 . 05

　　145

　　66 . 31

　　138

　　65 . 56

　　141

　　71 . 13

　　145

　　75 . 05

　　139

　　67 . 92

　　144

　　67 . 97

　　145

　　80 . 81

　　GB/T 22913—2008

　　表 2(续)

　　体长/cm

　　体重/g

　　体长/cm

　　体重/g

　　体长/cm

　　体重/g

　　145

　　64 . 58

　　148

　　82 . 90

　　154

　　89 . 76

　　146

　　83 . 87

　　149

　　90 . 28

　　157

　　99 . 59

　　146

　　86 . 58

　　149

　　81 . 40

　　157

　　89 . 26

　　146

　　70 . 96

　　152

　　84 . 70

　　158

　　100 . 51

　　146

　　75 . 24

　　152

　　89 . 70

　　159

　　87 . 10

　　147

　　78 . 20

　　152

　　84 . 40

　　160

　　85 . 70

　　147

　　73 . 52

　　153

　　71 . 60

　　160

　　93 . 10

　　147

　　70 . 70

　　153

　　88 . 57

　　173

　　101 . 16

　　147

　　82 . 62

　　154

　　81 . 40

　　5 . 2 繁殖

　　5 . 2 . 1 性成熟年龄

　　石鲽雌鱼和雄鱼的性成熟年龄均为二龄 。

　　5 . 2 . 2 繁殖期

　　石鲽属于秋季降温型产卵鱼类，繁殖期为 10 月底到 12 月 初 。秋季水温在 13 ℃ 以下性腺开始发育，10 ℃以下可以达到成熟排卵 。

　　5 . 2 . 3 繁殖力

　　石鲽性成熟时，分批多次产卵，一尾体重 1 kg 的亲鱼一次产卵量为 2 . 8 × 104 粒 ~ 32 × 104 粒，一个产卵期的产卵量高者可达 0 . 73 × 10 6 粒 ~ 2 . 65 × 10 6 粒 。

　　6 遗传学特性

　　6 . 1 细胞遗传学特性

　　石鲽的染色体数目为 2n=48,核型为 2n=48 t ,石鲽的染色体核型见图 2 。

　　图 2 石鲽的染色体核型

　　3

　　GB/T 22913—2008

　　6 . 2 生化遗传特性

　　石鲽肌肉乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱见图 3 ,表现为一条带 。

　　图 3 石鲽肌肉 LDH 同工酶电泳图谱

　　6 . 3 分子遗传特性

　　采用 DNA序列分析技术，对石鲽的线粒体 16S rRNA(核糖体 16S rRNA)基因片段进行了 PCR 扩增和序列测定，16S rRNA 基因片段序列见图 4 。

　　图 4 16SrRNA基因片段序列

　　7 检测方法

　　7 . 1 繁殖力的测定

　　用天平或杆秤称产卵前 、后雌亲鱼的重量，前后两次称重之差即为产卵的重量 。用电子天平称刚产出的卵 1 . 0 g左右，在解剖镜下计数，平行两次，平均值为卵密度(粒每克)。产卵量按式(1)计算 。

　　犌 =(狑1 - 狑2 )(狀1 /2狑样1 + 狀2 /2狑样2 ) …………………………( 1 )

　　式中：

　　犌— 产卵量，单位为粒;

　　狑1 — 产卵前亲鱼重量，单位为克(g) ;

　　狑2 — 产卵后亲鱼重量，单位为克(g) ;

　　狀1 — 试样 1 的卵粒数，单位为粒;狑样1 — 试样 1 重量，单位为克(g) ;

　　狀2 — 试样 2 的卵粒数，单位为粒;狑样2 — 试样 2 重量，单位为克(g) 。

　　7 . 2 染色体及核型

　　染色体及核型的测定按照 GB/T 18654 . 12 的规定执行 。

　　7 . 3 生化遗传学特征的测定

　　7 . 3 . 1 样品制备

　　活体或低温样品带回实验室 。取肌肉密封放入超低温冰箱(- 76 ℃) 或液氮罐中贮存 。将部分组织(约 0 . 5 g)取出放入玻璃匀浆器中，加入等体积双蒸水或 1 ∶ 1(体积重量比)的 0 . 1 mol/L 磷酸缓冲

　　4

　　GB/T 22913—2008

　　液(pH 7 . 0)(配制方法见 GB 20556—2006 附录 A) ,冰水浴中匀浆后，倒入 1 . 5 mL离心管内，在 0 ℃ ~ 4 ℃冷冻离心机中，以 15 000 r/min 离心 15 min,离心后取上清液作为电泳样品 。

　　7 . 3 . 2 电泳分析

　　采用淀粉凝胶电泳方法，凝胶浓度为 12%,电泳缓冲系统为 TC, pH 7 . 0(配制方法见 GB 20556 — 2006 附录 A) ,恒流(电压大小为 8 V/cm) 电泳 5 h ~ 6 h 。 电泳过程在 4 ℃冰箱中进行 。凝胶厚度为6 mm,电泳后切成 4 片 ~ 5 片进行染色，染色过程在 37 ℃恒温箱中进行，染色液的配制按 GB/T 19782的规定执行 。

　　7 . 4 分子遗传学特征的测定

　　7 . 4 . 1 DNA提取

　　取肌肉组织，尽量剪碎，用 DNA 提取试剂盒或常规酚方法提取基因组 DNA , TE 溶解后- 20 ℃保存备用，TE溶液的配制见 GB 20556—2006 附录 A 。

　　7 . 4 . 2 PCR扩增

　　7 . 4 . 2 . 1 引物

　　引 物 16sAR/BR 序 列 为：16sAR: 5 ′GCCTGTTTATCAAAAACAT 3 ′; 16sBR: 5 ′CCGGTCT- GAACTCAGATCACGT 3 ′。

　　7 . 4 . 2 . 2 PCR反应体系

　　25 μL PCR 扩 增 反 应 体 系 内 含：2 . 0 mmol/L 氯 化 镁 ( MgCl2 ) , 0 . 2 mmol/L 每 种 dNTPs , 0 . 2 μmol/L每种引物，30 ng DNA模板，1 单位 Taq酶，及 1×缓冲液 。

　　7 . 4 . 2 . 3 PCR反应程序

　　94 ℃预变性 2 min,然后 94 ℃ 45 s , 50 ℃ 1 min , 72 ℃ 1 min,使用热盖，循环 35 次，最后 72 ℃延伸5 min 。

　　7 . 4 . 2 . 4 结果的记录

　　PCR产物 1 . 4%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，凝胶成像系统观察 、照相 。

　　7 . 4 . 3 PCR产物克隆

　　PCR产物经回收纯化后，连接到 PMD18-T 载体上 。连接反应体积 10 μL , 其中载体 1 μL,连接酶Ⅰ5 μL , PCR产物 4 μL , 16 ℃连接 1 h 或 4 ℃过夜，然后连接液转化感受态大肠杆菌，涂平板，蓝-白斑筛选阳性克隆，液体培养基培养，提纯质粒后用 EcoR Ⅰ 和 HindⅢ酶切检测有无插入片段 。

　　7 . 4 . 4 序列测定

　　对回收质粒进行测序反应，产物纯化后在 DNA 测序仪上测序;为保证测序的可靠性和准确性，采用双向测序，并进行人工核对 、校正 。

　　8 判定规则

　　被检样品符合第 4 章 、第 6 章要求的为合格样品 。

　　5

　　GB/T 22913—2008

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　石鲽生长方程和体长体重关系

　　A.1 石鲽生长方程

　　石鲽的生长可用 Von-Bert alanffy 生长方程表示，通过对黄海 、渤海沿岸拖网调查取得的 293 个样品的回归分析，石鲽的生长方程式见式(A. 1) ~ 式(A. 4) 。

　　早：Lt = 497 . 28[1 -e-0 . 26(t-0 . 73) ] …………………………( A. 1 )

　　♂：Lt = 365 . 42[1 -e-0 . 41(t-0 . 73) ] …………………………( A. 2 )

　　早：wt = 497 . 28[1 -e-0 . 26(t-0 . 73) ] 3 . 18 …………………………( A. 3 )

　　♂：wt = 365 . 42[1 -e-0 . 41(t-0 . 73) ] 3 . 05 …………………………( A. 4 )

　　式中：

　　Lt— 体长，单位为毫米(mm) ;

　　wt— 体重，单位为克(g) ;

　　t— 年龄，单位为龄;

　　497 . 28 — 系数;

　　365 . 42 — 系数 。

　　A.2 石鲽体长体重关系

　　通过对黄海 、渤海沿岸拖网调查取得的 293 个样品的回归分析，石鲽的体长 、体重关系见式(A. 5) 、式(A. 6) 。

　　早：w = 0 . 006 1L3 . 18 …………………………( A. 5 )

　　♂：w = 0 . 014 4L3 . 05 …………………………( A. 6 )

　　式中：

　　w— 鱼体体重，单位为克(g) ;

　　L— 鱼体体长，单位为厘米(cm) ;

　　0 . 006 1 — 系数;

　　0 . 014 4 — 系数 。

　　6