GB/T 14926.47-2008 实验动物 志贺菌检测方法

　　ICS 65 . 020 . 30 B 44

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 14926 . 47—2008代替 GB/T 14926 . 47—2001

　　实验动物 志贺菌检测方法

　　Laboratory animal—Method forexamination ofshigellaspp.

　　2008-12-03 发布 2009-03-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 14926 . 47—2008

　　前 言

　　GB/T 14926《实验动物》共 54 个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法 。

　　本部分自实施之日起代替 GB/T 14926 . 47—2001《实验动物 志贺菌检测方法》。

　　本部分与 GB/T 14926 . 47—2001 相比主要技术差异如下：

　　a) 对 GB/T 14926 . 47—2001《实验动物 志贺菌检测方法》部分内容进行了修订和增加;

　　b) 在原标准“5 培养基及试剂 ”中增加了“5 . 2 GN 增菌液 ”，将 原 标 准 中“5 . 3 S. S 琼 脂 ”修 改 为“5 . 4 XLD琼脂 ”;

　　c) 在原标准“6 检测程序 ”中增加了“GN 增菌液(36±1) ℃培养 6 h ~ 8 h”这一程序;

　　d) 在原标准“6 检测程序 ”中将“S. S琼脂 ”修改为 “XLD琼脂 ”;

　　e) 原标准“7 . 2 分离培养将已接种的麦康凯琼脂和 S. S 琼脂平皿置(36±1) ℃培养 18 ~ 24h 。”修改为“7 . 2 增菌分离培养将已接种的 GN 增菌液置(36±1) ℃培养 6 h ~ 8 h ,转种麦康凯琼脂和 XLD琼脂平皿，置(36±1) ℃培养 18 h ~ 24 h”;

　　f) 原标准“7 . 3 . 1 菌落特征志贺菌在麦康凯和 S. S 琼脂平皿上形成无色透明 、圆形 、扁平或微凸起，光滑湿润，边缘整齐，直径约 2 mm 的菌落 。宋内氏志贺菌菌落一般较大，半透明，有时可出现扁平，边缘不整齐的粗糙型菌落 。”修改为“7 . 3 . 1 菌落特征 志贺菌在麦康凯琼脂平皿上形成无色 、凸起 、直径 2 mm ~ 3 mm 的菌落 。在 XLD 琼脂平皿形成红色 、光滑 、直径 1 mm ~ 2 mm的菌落 。痢 疾 志 贺氏 菌 1 型 在 上 述 两 种 培 养 基 上 形 成 的 菌 落 较 其 他 志 贺 菌 属 菌 落要小 ”;

　　g) 原标准“7 . 3 . 5 表 1 志贺菌生化反应 ”中 “七叶苷脱羧酶 ”修改成 “七叶苷 ”。本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归 口 。

　　本部分由全国实验动物标准化技术委员会负责起草 。

　　本部分主要起草人：黄韧 。

　　本部分所代替标准的历次版本发布情况为：

　　—GB/T 14926 . 47—2001 。

　　Ⅰ

　　GB/T 14926 . 47—2008

　　实验动物 志贺菌检测方法

　　1 范围

　　GB/T 14926 的本部分规定了实验动物志贺菌的检测方法 。

　　本部分适用于猴志贺菌的检测 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过 GB/T 14926 的本部分的引用而成为本部分的条款 。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本 适 用 于 本部分 。

　　GB/T

　　14926 . 42 实验动物

　　细菌学检测

　　标本采集

　　GB/T

　　14926 . 43 实验动物

　　细菌学检测

　　染色法 、培养基和试剂

　　3

　　原理

　　志贺菌是革兰氏阴性短杆菌，在三糖铁或双糖铁等培养基上具有特定的生长和生化特征 。 因此，可通过选择性培养基培养 、生化和血清试验鉴定志贺菌 。

　　4 主要设备和材料

　　普通恒温培养箱 。

　　5 培养基及试剂

　　5 . 1 Cary-Blair运送培养基：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 2 GN增菌液：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 3 麦康凯琼脂：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 4 XLD琼脂：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 5 克氏双糖铁琼脂：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 6 三糖铁琼脂：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 7 西蒙氏柠檬酸盐培养基：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 8 氨基酸脱羧酶试验培养基：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 9 尿素琼脂：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 10 半固体琼脂：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 1 1 糖发酵培养基：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 12 氰化钾生长培养基：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 13 葡萄糖铵培养基：成分及配制方法见 GB/T 14926 . 43 。

　　5 . 14 志贺菌多价诊断血清 。

　　1

　　GB/T 14926 . 47—2008

　　6 检测程序

　　图 1 检测程序

　　7 操作步骤

　　7 . 1 采样

　　采取粪便或肛拭子标本，采样方法见 GB/T 14926 . 42 。

　　7 . 2 增菌分离培养

　　将已接种的 GN 增菌液置(36±1) ℃培养 6 h ~ 8 h ,转种麦康凯琼脂和 XLD 琼脂平皿，置(36 ± 1) ℃培养 18 h ~ 24 h 。

　　7 . 3 鉴定

　　7 . 3 . 1 菌落特征

　　志贺菌在麦康凯琼脂平皿上形成无色 、凸起 、直径 2 mm ~ 3 mm 的菌落 。在 XLD琼脂平皿形成红色 、光滑 、直径 1 mm ~ 2 mm 的菌落 。痢疾志贺氏菌 1 型在上述两种培养基上形成的菌落较其他志贺菌属菌落要小 。

　　7 . 3 . 2 菌体特征

　　革兰氏阴性小杆菌，无鞭毛，无芽孢 。

　　7 . 3 . 3 培养特性

　　本菌接种克氏双糖铁或三糖铁琼脂，(36±1) ℃培养 18 h ~ 24 h 后，斜面不产酸，底层产酸不产气，硫化氢阴性 。

　　2

　　GB/T 14926 . 47—2008

　　7 . 3 . 4 动力半固体试验阴性 。

　　7 . 3 . 5 本菌生化特征

　　见表 1 。

　　表 1 志贺菌生化反应

　　生化检测项 目

　　判 定 结 果

　　生化检测项 目

　　判 定 结 果

　　葡萄糖铵

　　—

　　赖氨酸脱羧酶

　　—

　　七叶苷

　　—

　　尿素

　　—

　　鸟氨酸脱羧酶a

　　—

　　西蒙氏柠檬酸盐

　　—

　　KCN 生长

　　—

　　水杨苷

　　—

　　注：“+ ”表示阳性，“- ”表示阴性 。

　　a C群 13 型和 D群为阳性 。

　　7 . 3 . 6 血清玻片凝集试验阳性 。

　　8 结果报告

　　凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告，不符合者作出阴性报告 。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺菌属的培养物 。

　　GB/T 1 4 92 6 4 7 2 0 0 8

　　—

　　.

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　　实验动物 志贺菌检测方法

　　GB/T 14926 . 47—2008

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　　2009 年 2 月第一版 2009 年 2 月第一次印刷

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