GB/T 41716-2022 漆树中主要有效成分含量的测定 高效液相色谱法

　　ICS 65 . 020 CCS B 60

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 41716—2022

　　漆树中主要有效成分含量的测定

　　高效液相色谱法

　　Determ,nat,on of ma,n act,ve ,ngred,ent ,n lacquer trees—

　　H,gh preformance l,qu,d chromatography

　　2022-10-12 发布 2023-1 1-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 41716—2022

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由国家林业和草原局提出 。

　　本文件由全国林化产品标准化技术委员会(SAC/TC558)归口 。

　　本文件起草单位:中国林业科学研究院林产化学工业研究所 、中国标准化研究院 、北京林业大学 、南京林业大学 、深圳市标准技术研究院 、浙江科技学院 、中华全国供销合作总社西安生漆涂料研究所 、中山内得农业科技有限公司 。

　　本文件主要起草人:李文君 、王成章 、汪咏梅 、刘 军 利 、杨 中 志 、周 昊 、陈 虹 霞 、席 兴 军 、雷 建 都 、黄超伯 、杨志花 、刘铁兵 、兰韬 、李东旭 、任红艳 、李艳 、施珊玲 。

　　I

　　GB/T 41716—2022

　　漆树中主要有效成分含量的测定

　　高效液相色谱法

　　1 范围

　　本文件描述了高效液相色谱法测定漆树中主要有效成分含量的方法 。

　　本文件适用于漆树的枝 、干 、皮和叶等部位中漆酚(饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚 、三不饱和漆酚)和黄酮(黄颜木素 、漆黄素 、硫黄菊素和紫铆花素)化合物单个或多个组分含量的测定 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 , 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件 , 其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB/T 36055 林业生物质原料分析方法 含水率的测定

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　3.1

　　饱和漆酚 saturated urush,ol

　　漆酚分子侧链脂肪烷烃中不含有碳碳双键的漆酚分子化合物 。

　　3.2

　　单不饱和漆酚 monounsaturated urush,ol

　　漆酚分子侧链脂肪烷烃中具有一个碳碳双键的漆酚分子化合物 。

　　3.3

　　二不饱和漆酚 d,unsaturated urush,ol

　　漆酚分子侧链脂肪烷烃中具有二个碳碳双键的漆酚分子化合物 。

　　3.4

　　三不饱和漆酚 tr,unsaturated urush,ol

　　漆酚分子侧链脂肪烷烃中具有三个碳碳双键的漆酚分子化合物 。

　　4 原理

　　在同一个分析周期内 , 按一定时间程序调节流动相配比 , 使漆树中主要有效成分按各自适宜的容量因子达到良好的分离目的 。利用饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚 、三不饱和漆酚 、黄颜木素 、漆黄素 、硫黄菊素和紫铆花素在特定波长下有最大紫外吸收 , 在其对应波长条件下进行检测 , 并用标准物质外标法直接定量分析 。

　　1

　　GB/T 41716—2022

　　5 试剂或材料

　　本文件所用试剂除特别说明外 , 皆为分析纯试剂 , 用水为 GB/T 6682 规定的一级水或同等纯度水 ;未指明用何种溶剂配制时 , 均指水溶液 。

　　5 . 1 甲醇 , 乙腈:色谱纯 。

　　5 . 2 三氯甲烷 , 无水乙醇 , 醋酸 , 乙酸乙酯 。

　　5 . 3 漆树漆酚标准物质(纯度 ≥95%) :饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚 、三不饱和漆酚 。

　　5 . 4 漆树黄酮标准物质(纯度 ≥98%) :黄颜木素 、漆黄素 、硫黄菊素和紫铆花素 。

　　5 . 5 有机相微孔滤膜:孔径 0. 22 μm 。

　　5 . 6 漆树漆酚标准储备溶液(2 . 00 mg/mL) :分别准确称取 20 mg 5 . 3 中各漆酚标准物质分置于 10 mL棕色容量瓶中 , 甲醇溶解 、定容 、混匀 , 配制 2 . 00 mg/mL的饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚 、三不饱和漆酚标准储备溶液 。

　　5 . 7 漆树黄酮标准储备溶液(2 . 00 mg/mL) :分别准确称取 20 mg 5 . 4 中各黄酮标准物质分置于 10 mL棕色容量瓶中 , 甲醇溶解 、定容 、混匀 , 配制 2 . 00 mg/mL的黄颜木素 、漆黄素 、硫黄菊素和紫铆花素标准储备溶液 。

　　5 . 8 漆树漆酚标准工作溶液: 分别吸取适量的 5 . 6 中各漆树漆酚标准储备溶液配 制 质 量 浓 度 为0 mg/mL、0. 10 mg/mL、0. 50 mg/mL、1 . 00 mg/mL、1 . 50 mg/mL、2 . 00 mg/mL 的标准工作溶液 , 现配现用 。

　　5 . 9 漆树黄酮标准工作溶液: 分别吸取适量的 5 . 7 中各漆树黄酮标准储备溶液配 制 质 量 浓 度 为0 mg/mL、0. 10 mg/mL、0. 50 mg/mL、1 . 00 mg/mL、1 . 50 mg/mL、2 . 00 mg/mL 的标准工作溶液 , 现配现用 。

　　6 仪器设备

　　6 . 1 高效液相色谱(HPLC)仪 , DAD检测器(波长范围 190 nm~400 nm) 。

　　6 . 2 分析天平:感量 0. 1 mg 。

　　6 . 3 粉碎机:筛板孔径 0. 180 mm 。

　　6 . 4 旋转蒸发仪 。

　　6 . 5 水浴锅 。

　　6 . 6 真空干燥箱 。

　　7 样品

　　7 . 1 样品的制备

　　将漆树不同部位的原料在 40 ℃经真空干燥箱干燥处理后 , 含水率不应超过 5% , 按照 GB/T 36055的规定测定 , 用粉碎机将其粉碎后过筛板 , 得到漆树样品 , 装入洁净干燥器中 , 于常温下密闭 、干燥保存备用 。

　　7 . 2 样品溶液的制备

　　7 . 2 . 1 漆树漆酚样品溶液的制备

　　称取漆树样品 5 . 0 g 于 250 mL 圆底烧瓶中 , 加 100 mL无水乙醇常温下浸泡 3 h , 过滤 , 滤液在

　　2

　　GB/T 41716—2022

　　50 ℃下用旋转蒸发仪减压回收溶剂 , 所得提取物用 150 mL三氯甲烷-水(体积比 3 : 1)溶液萃取3 次 , 收集三氯甲烷层 , 用旋转蒸发仪减压回收溶剂后 , 所得漆树漆酚提取物样品浸膏用适量甲醇溶解并定容于 25 mL容量瓶中 , 摇匀后即得漆树漆酚的样品溶液 。

　　7 . 2 . 2 漆树黄酮样品溶液的制备

　　称取漆树样品 5 . 0 g 于 250 mL圆底烧瓶中 , 加 100 mL无水乙醇 , 80 ℃(或根据实际大气压设定温度为保持溶剂微沸即可)下 , 提取 3 次 , 每次 1 h;过滤 , 合并滤液 , 在 50 ℃下用旋转蒸发仪减压回收溶剂 , 所得提取物先用其 10 倍质量的乙酸乙酯溶液萃取 , 然后再用同体积的水进行反向萃取 , 整个萃取过程重复 3 次 , 收集乙酸乙酯层 , 用旋转蒸发仪减压回收溶剂后 , 所得漆树黄酮提取物样品用适量甲醇溶解并定容于 25 mL容量瓶中 , 摇匀后即得漆树黄酮的样品溶液 。

　　8 试验步骤

　　8 . 1 高效液相色谱参考条件

　　8 . 1 . 1 漆树漆酚高效液相色谱参考条件

　　漆树漆酚高效液相色谱参考条件如下:

　　a) 色谱柱: C18 , 250 mm×4 . 6 mm(内径) , 粒径 5 μm , 或柱效相当者 ;

　　b) 流动相:乙腈-水(体积比 91 : 9) ;

　　c) 流速:0 . 60 mL/min ;

　　d) 进样量 : 5 μL;

　　e) 检测波长:277 nm ;

　　f) 柱温:室温 。

　　8 . 1 . 2 漆树黄酮高效液相色谱参考条件

　　漆树黄酮高效液相色谱参考条件如下:

　　a) 色谱柱: C18 , 250 mm×4 . 6 mm(内径) , 粒径 5 μm , 或柱效相当者 ;

　　b) 流动相 : 甲醇(A)-0 . 5%醋酸水溶液(B) , 采用梯度洗脱 , 1 min ~ 10 min , 65% B; 10 min ~ 25 min , 50%B;25 min~50 min , 25%B;50 min~60 min , 10%B;60 min~65 min , 65%B;

　　c) 流速:1 . 00 mL/min ;

　　d) 进样量 : 5 μL;

　　e) 检测波长:278 nm(黄颜木素) 、248 nm(漆黄素) 、257 nm(硫黄菊素)和 261 nm(紫铆花素) ;

　　f) 柱温:室温 。

　　8 . 2 标准曲线的制作

　　8 . 2 . 1 漆树漆酚标准曲线

　　分别向高效液相色谱柱中注入质量浓度为 0 mg/mL、0. 10 mg/mL、0. 50 mg/mL、1 . 00 mg/mL、 1 . 50 mg/mL、2 . 00 mg/mL的饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚和三不饱和漆酚的标准工作溶液 , 在 8. 1 . 1 色谱条件下得到相应色谱峰面积 , 以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线 。饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚和三不饱和漆酚的标准样品溶液(2 . 00 mg/mL) 的高效液相色谱图参见附录 A中图 A. 1 , 其标准样品信息表参见表 A. 1 。

　　3

　　GB/T 41716—2022

　　8 . 2 . 2 漆树黄酮标准曲线

　　分别向高效液相色谱柱中注入质量浓度为 0 mg/mL、0. 10 mg/mL、0. 50 mg/mL、1 . 00 mg/mL、 1 . 50 mg/mL、2 . 00 mg/mL的黄颜木素 、漆黄素 、硫黄菊素和紫铆花素的标准工作溶液 , 在 8. 1 . 2 色谱条件下得到相应色谱峰面积 , 以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线 。 黄颜木素 、漆黄素 、硫黄菊素和紫铆花素的标准样品溶液(2 . 00 mg/mL)的高效液相色谱图参见附录 A 中图 A. 2 , 其标准样品信息表参见表 A. 2 。

　　8 . 3 样品溶液的测定

　　对同一样品平行做两份试验 。取待测样品溶液(7 . 2 . 1 或 7 . 2 . 2)中的样品溶液 , 经过 0. 22 μm 滤膜过滤后 , 液相色谱进样 , 在相应的色谱条件下 , 以保留时间定性 , 检测得到相应色谱峰面积 , 根据相应标准曲线计算得到样品溶液中饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚 、三不饱和漆酚 、黄颜木素 、漆黄素 、硫黄菊素和紫铆花素的浓度 。

　　8 . 4 空白实验

　　以相同体积的甲醇 , 采用与 8. 3 中相同的测定步骤进行测定 。

　　9 试验数据处理

　　试验中漆树饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚 、三不饱和漆酚 、黄颜木素 、漆黄素 、硫黄菊素和紫铆花素含量利用数据处理系统计算或按式(1)计算 。

　　xi ……………………( 1 )

　　式中:

　　xi — 样品中漆树饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚 、三不饱和漆酚 、黄颜木素 、漆黄素 、紫铆花素和硫黄菊素的含量 , 单位为毫克每克(mg/g) ;

　　pi — 样品中漆树饱和漆酚 、单不饱和漆酚 、二不饱和漆酚 、三不饱和漆酚 、黄颜木素 、漆黄素 、紫

　　铆花素和硫黄菊素的质量浓度 , 单位为毫克每毫升(mg/mL) ; v — 试验样品的定容体积 , 单位为毫升(mL) ;

　　mi — 样品的质量 , 单位为克(g) 。

　　测定结果以平行测定的算术平均值表示 , 计算结果保留至小数点后两位 。

　　10 精密度

　　在同一实验室 , 由同一操作者使用相同设备 , 按相同的测试方法 , 并在短时间内对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的 5% 。

　　1 1 注意事项

　　样品吸 收 峰 应 在 漆 树 漆 酚 和 黄 酮 标 准 曲 线 的 校 准 范 围 内 , 若 待 测 样 品 溶 液 的 吸 收 峰 高于2 . 00 mg/mL质量浓度的标准工作溶液的吸收峰 , 则应稀释样品溶液进行测定 。另外 , 液相色谱操作推荐使用如上参考条件 , 但可以根据实际情况适当调节以达到最佳分离效果 。

　　4

　　GB/T 41716—2022

　　12 试验报告

　　试验报告应包括以下项 目 :

　　a) 样品信息:试验或测试样品的名称 、种类 、质量 、取样信息等 ;

　　b) 所使用的标准,包括标准编号 、标准名称 ;

　　c) 所使用的试验方法 ;

　　d) 试验结果 ;

　　e) 试验中观察到的异常现象 ;

　　f) 试验人员 、日期。

　　5

　　GB/T 41716—2022

　　附 录 A

　　(资料性)

　　标准样品溶液的高效液相色谱图

　　图 A. 1 给出了漆树漆酚标准样品溶液(2 . 00 mg/mL)高效液相色谱图 , 图 A. 2 给出了漆树黄酮标准样品溶液(2 . 00 mg/mL)高效液相色谱图 。表 A. 1 给出了漆树漆酚标准样品信息 , 表 A. 2 给出了漆树黄酮标准样品信息 。

　　标引序号说明 :

　　1 — 三不饱和漆酚 ;

　　2 — 二不饱和漆酚 ;

　　3 — 单不饱和漆酚 ;

　　4 — 饱和漆酚 。

　　图 A. 1 漆树漆酚标准样品溶液(2 . 00 mg/mL)高效液相色谱图

　　6

　　GB/T 41716—2022

　　表 A. 1 漆树漆酚标准样品信息表

　　化合物种类

　　检测波长/nm

　　参考出峰时间/min

　　结构式

　　三不饱和漆酚

　　277

　　13 . 74

　　二不饱和漆酚

　　17 . 97

　　单不饱和漆酚

　　25 . 94

　　饱和漆酚

　　41 . 30

　　标引序号说明 :

　　1 — 黄颜木素 ;

　　2 — 漆黄素 ;

　　3 — 硫黄菊素 ;

　　4 — 紫铆花素 。

　　图 A. 2 漆树黄酮标准样品溶液(2 . 00 mg/mL)高效液相色谱图

　　7

　　GB/T 41716—2022

　　表 A. 2 漆树黄酮标准样品信息表

　　化合物种类

　　检测波长/nm

　　参考出峰时间/min

　　结构式

　　黄颜木素

　　278

　　12 . 04

　　漆黄素

　　248

　　31 . 86

　　硫黄菊素

　　257

　　36 . 81

　　紫铆花素

　　261

　　39 . 21

　　8