GB/T 41710-2022 化妆品中禁用物质林可霉素和克林霉素的测定 液相色谱-串联质谱法

　　ICS 71 . 100 . 70 CCS Y 42

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 41710—2022

　　化妆品中禁用物质林可霉素和克林霉素的测定 液相色谱-串联质谱法

　　Determination of prohibited lincomycin and clindamycin in cosmetics—

　　Liquid chromatography-tandem mass spectrometry

　　2022-10-12 发布 2023-05-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 41710—2022

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由中国轻工业联合会提出 。

　　本文件由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口 。

　　本文件起草单位:江苏省产品质量监督检验研究院 、苏州绿叶 日用品有限公司 、上海相宜本草化妆品股份有限公司 、扬州完美日用品有限公司 、苏州世谱检测技术有限公司 、欧诗漫生物股份有限公司 、苏州质量检测科学研究院 、广州质量监督检测研究院 、无限极(中国)有限公司 、上海香料研究所 、河北省食品检验研究院 、江苏省食品药品监督检验研究院 。

　　本文件主要起草人:卢剑 、汪晨霞 、朱丹丹 、曲梅 、方方 、郭燕华 、张晓强 、曹玲 、刘冬 、吕智 、康薇 、曹倩文 、黄宏霞 、方兆华 、刘贤钊 、寻知庆 、杨洋 、张征 、张岩 、顾洁 、张秋艳 、欧国利 、何霜 、叶嘉荣 、郭新东 、黄金凤 、李佩斯 、代丹 、叶竹洪 、李淑琴 、陈炎欢 、章芳 、濮鑫 、武中平 。

　　I

　　GB/T 41710—2022

　　引 言

　　本文件的被测物质是我国《化妆品安全技术规范(2015 年版)》规定的禁用原料 。

　　禁用原料是指不得作为化妆品原料使用的物质 。《化妆品安全技术规范(2015 年版)》规定:若技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时,国家有限量规定的应符合其规定;未规定限量的,应进行安全性风险评估,确保在正常 、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害 。

　　目前我国尚未规定这些物质的限量值,本文件的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法 。

　　"

　　GB/T 41710—2022

　　化妆品中禁用物质林可霉素和克林霉素的

　　测定 液相色谱-串联质谱法

　　警示 — 使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验 。本文件并未指出所有可能的安全问题 。使用者有责任采取适当的安全和健康措施 , 并保证符合国家有关规定的条件 。

　　1 范围

　　本文件描述了化妆品中林可霉素和克林霉素的液相色谱-串联质谱测定方法的原理 、试剂和材料 、仪器设备 、试验步骤 、试验数据处理 、回收率 、精密度等内容 。

　　本文件适用于水剂类 、非蜡基膏霜类 、乳液类化妆品中林可霉素和克林霉素的测定 。

　　本文件中林可 霉 素 和 克 林 霉 素 的 方 法 检 出限 和 定 量 限: 检 出限 均 为 0. 1 mg/kg , 定 量 限 均 为0. 3 mg/kg 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 , 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件 , 其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义 。

　　4 原理

　　试样用酸化乙腈水溶液提取 , 提取液经正己烷净化 、离心 、过滤后 , 用液相色谱-串联质谱法测定 , 外标法定量 。

　　5 试剂和材料

　　除非另有规定 , 所用试剂均为色谱纯 。

　　5 . 1 水: GB/T 6682 , 一级 。

　　5 . 2 乙腈 。

　　5 . 3 正己烷 。

　　5 . 4 甲酸 。

　　5 . 5 0. 1%甲酸溶液:准确量取 1 mL甲酸(5 . 4)至 1 000 mL容量瓶中 , 用水稀释并定容至刻度 。

　　5 . 6 0. 1%甲酸乙腈溶液:准确量取 1 mL 甲酸(5 . 4)至 1 000 mL容量瓶中 , 用乙腈(5 . 2)稀释并定容至刻度 。

　　5 . 7 50%乙腈溶液(含 1%甲酸) :准确量取 250 mL乙腈(5 . 2)至 500 mL容量瓶中 , 加入 5 . 0 mL 甲酸

　　1

　　GB/T 41710—2022

　　(5 . 4) , 用水稀释并定容至刻度 。

　　5 . 8 乙腈饱和的正己烷:分别量取 20 mL 乙腈(5 . 2)和 50 mL正己烷(5 . 3)至 100 mL具塞锥形瓶中 , 混匀静置 , 上层为乙腈饱和的正己烷 。

　　5 . 9 标准物质:林可霉素和克林霉素标准物质的英文名称 、CAS号 、分子式 、相对分子质量及化学结构式见附录 A 中表 A. 1 , 各标准物质纯度均不小于 98% 。

　　5 . 10 混合标准中间溶液:分别准确称取适量标准物质(5 . 9)(精确至 0. 1 mg) , 用乙腈(5 . 2)配制成质量浓度为 1 000 μg/mL的单标标准储备液(于 4 ℃避光保存 , 可保存 3 个月) 。准确移取各单标标准储备液 0. 1 mL, 置于 10 mL棕色容量瓶中 , 用乙腈(5 . 2)定容 , 制得混合标准中间溶液(各为 10. 0 μg/mL, 临用前现配) 。

　　6 仪器设备

　　6 . 1 液相色谱-质谱联用仪:配有电喷雾电离源和三重四极杆质量分析器 。

　　6 . 2 分析天平:精度 0. 001 g 和 0. 000 1 g 。

　　6 . 3 涡旋混合器 。

　　6 . 4 超声波清洗仪:工作频率不低于 40 KHz 。

　　6 . 5 离心机:最高转速不低于 4 000 r/min 。

　　6 . 6 滤膜:孔径为 0. 22 μm 的聚四氟乙烯滤膜 。

　　7 试验步骤

　　7 . 1 试样处理

　　称取 0. 5 g(精确至 0. 001 g)试样 , 置于 25 mL具塞比色管中 , 准确加入 8 mL50%乙腈溶液(含 1%甲酸)(5 . 7) , 具塞后于涡旋混合器上振荡混匀后 , 超声提取 15 min , 冷却至室温 , 用 50%乙腈溶液(含1%甲酸)(5 . 7)定容至 10. 0 mL, 然后加入 5 mL 乙腈饱和的 正 己 烷 (5 . 8) , 涡 旋 振 荡 1 min , 然 后4 000 r/min 离心 2 min , 下层清液经滤膜过滤后供液相色谱-质谱联用仪测定 。

　　平行做两份试验 。

　　7 . 2 测定

　　7 . 2 . 1 液相色谱参考条件

　　液相色谱参考条件如下:

　　a) 色谱柱: C18 柱 , 2 . 2 μm , 100 mm × 2 . 0 mm(内径)或相当者 ;

　　b) 流动相:0 . 1%甲酸乙腈溶液(5 . 6)和 0. 1%甲酸溶液(5 . 5) , 梯度洗脱条件见表 1 ;

　　c) 流速:0 . 3 mL/min ;

　　d) 柱温 : 30 ℃ ;

　　e) 进样量 : 5 μL。

　　表 1 液相色谱梯度洗脱条件

　　时间/min

　　0. 1%甲酸乙腈溶液/%

　　0. 1%甲酸溶液/%

　　0.0

　　10

　　90

　　2.0

　　10

　　90

　　2

　　GB/T 41710—2022

　　表 1 液相色谱梯度洗脱条件 (续)

　　时间/min

　　0. 1%甲酸乙腈溶液/%

　　0. 1%甲酸溶液/%

　　8.0

　　80

　　20

　　10 . 0

　　80

　　20

　　10 . 1

　　10

　　90

　　12 . 0

　　10

　　90

　　7 . 2 . 2 质谱参考条件

　　质谱参考条件如下:

　　a) 离子源:电喷雾离子源(ESI) 。

　　b) 扫描方式:正离子扫描 。

　　c) 喷雾电压 : 5 500 v 。

　　d) 离子源温度 :400 ℃ 。

　　e) 雾化气压力 :0 . 345 Mpa 。

　　f) 辅助气压力 :0 . 414 Mpa 。

　　g) 气帘气压力 :0 . 138 Mpa 。

　　h) 检测方式:多反应监测(MRM) 。

　　i) 去簇电压:80 v;碰撞室出 口 电压 : 10 v 。

　　j) 化合物母离子 、子离子 、保留时间及碰撞电压见表 2 。

　　表 2 林可霉素和克林霉素的质谱参数

　　化合物

　　保留时间/min

　　母离子 m /≈

　　子离子 m /≈

　　碰撞电压/v

　　林可霉素

　　4 . 39

　　407 . 2

　　126 . 1 a , 359 . 0

　　33 . 0 , 24 . 0

　　克林霉素

　　4 . 61

　　425 . 2

　　126 . 1 a , 377 . 0

　　35 . 0 , 25 . 0

　　a 定量离子 。

　　7 . 2 . 3 标准工作曲线绘制

　　分别吸取适量混合标准中间溶液(5 . 10)15 . 0 μL、30. 0 μL、50. 0 μL、100 μL、200 μL和 300 μL, 用乙腈(5 . 2)稀释至 10 mL, 得到质量浓度分别为 15 . 0 μg/L、30. 0 μg/L、50. 0 μg/L、100 μg/L、200 μg/L 和300 μg/L的系列混合标准工作溶液(现用现配) 。 将混合标准工作溶液按液相色谱和质谱参考条件(7 . 2 . 1 和 7 . 2 . 2)进行测定 , 以 目标物定量离子色谱峰的峰面积为纵坐标 , 其对应的溶液质量浓度为横坐标作图 , 绘制标准工作曲线 。林可霉素和克林霉素标准物质溶液的多反应监测色谱图见附录 B 中图B. 1 。

　　7 . 2 . 4 试样测定

　　按液相色谱和质谱参考条件(7 . 2 . 1 和 7 . 2 . 2)测定试样溶液(7 . 1) 。如果试样中待测物质的色谱峰保留时间与标准溶液的一致 , 在扣除背景后的试样质谱图中所选择的离子均出现 , 而且选择离子的相对丰度与标准物质的进行比较 , 最大允许偏差不超过表 3 规定的范围 , 可判定为试样中含有对应的待测物 。

　　3

　　GB/T 41710—2022

　　记录目标化合物定量离子色谱峰的峰面积 , 以外标法定量 。试样溶液中被测物的响应值均应在标准曲线的线性范围之内 , 超出线性范围的试样溶液可用 50%乙腈溶液(含 1%甲酸)(5 . 7)稀释后进行测定 。

　　表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

　　相对离子丰度 K/%

　　K>50

　　50≥K>20

　　20≥K>10

　　K≤10

　　最大允许偏差/%

　　±20

　　±25

　　±30

　　±50

　　7 . 3 空白试验

　　除不称取试样外 , 均按 7 . 1~7 . 2 步骤进行测定 。

　　8 试验数据处理

　　试样中被测组分含量按式(1)计算 。

　　xi k ……………………( 1 )

　　式中:

　　xi — 试样中被测组分的含量 , 单位为毫克每千克 (mg/kg) ;

　　c i — 从标准曲线得到的试样溶液中被测组分的质量浓度 , 单位为微克每升 (μg/L) ;

　　c 0 — 从标准曲线得到的空白样品溶液中被测组分的质量浓度 , 单位为微克每升 (μg/L) ;

　　v — 50%乙腈溶液(含 1%甲酸)定容体积 , 单位为毫升 (mL) ;

　　m — 试样质量 , 单位为克 (g) ;

　　k — 稀释倍数 。

　　结果以两次平行测定结果的算术平均值表示 , 保留三位有效数字 。

　　9 回收率

　　在添加浓度为 0. 3 mg/kg~3 . 0 mg/kg 范围内 , 回收率在 80%~110%之间 。

　　10 精密度

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 10% 。

　　4

　　GB/T 41710—2022

　　附 录 A

　　(资料性)

　　林可霉素和克林霉素标准物质的信息

　　林可霉素和克林霉素的英文名称 、CAS号 、分子式 、相对分子质量及化学结构式见表 A. 1 。

　　表 A. 1 林可霉素和克林霉素标准物质的信息

　　序号

　　中文名称

　　英文名称

　　CAS号

　　分子式

　　相对分子质量

　　化学结构式

　　1

　　林可霉素

　　Lincomycin

　　154-21-2

　　C18 H34 N2 O6 S

　　406 . 21

　　2

　　克林霉素

　　Clindamycin

　　18323-44-9

　　C18 H33 ClN2 O5 S

　　424 . 18

　　5

　　GB/T 41710—2022

　　附 录 B

　　(资料性)

　　林可霉素和克林霉素标准物质溶液的多反应监测色谱图

　　林可霉素和克林霉素标准物质溶液的多反应监测色谱图见图 B. 1 。

　　图 B. 1 林可霉素和克林霉素标准物质溶液的多反应监测色谱图

　　6