GB/T 44349-2024 蜂花粉总多酚的检测 福林酚试剂比色法

　　ICS 65.140 CCS B 47

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 44349—2024

　　蜂花粉总多酚的检测 福林酚试剂

　　比色法

　　Detection of total polyphenols in bee pollen—Colorimetric method using

　　Folin-Ciocalteu reagent

　　2024-09-29 发布 2025-04-01 实施

　　发

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　布

　　GB/T 44349—2024

　　目 次

　　前言 Ⅲ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 术语和定义 1

　　4 原理 1

　　5 试剂和材料 1

　　6 仪器设备 2

　　7 分析步骤 2

　　7.1 试样制备 2

　　7.2 试样前处理 2

　　7.3 空白试验 2

　　7.4 标准曲线的制作 2

　　7.5 试样测定 2

　　8 结果计算 3

　　9 定量限 3

　　10 精密度 3

　　附录 A (资料性) 福林酚试剂 (Folin﹘Ciocalteu reagent)配制方法 4

　　参考文献 5

　　Ⅰ

　　GB/T 44349—2024

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分 ：标准化文件的结构和起草规则》 的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华全国供销合作总社提出。

　　本文件由全国蜂产品标准化技术委员会 (SAC/TC 601)归口。

　　本文件起草单位： 中国计量大学、安徽省王巢食品有限公司、广东正当年生物科技股份有限公司、中科标准(宁德) 科技有限公司、睿科集团(厦门) 股份有限公司、深圳职业技术大学、秦皇岛海关技术中心、阜阳职业技术学院、南京众谱生物科技有限公司、浙江省农业科学院、浙江省中医药研究院、中国农业科学院蜜蜂研究所、青海省花宝蜂业股份合作公司、杭州天厨蜜源保健品有限公司、兰溪市产品商品质量检测研究院、山东世通检测评价技术服务有限公司、陕西国蜂大健康产业有限公司、江西汪氏蜜蜂园有限公司。

　　本文件主要起草人： 李红亮 、 胡童霞 、 岳振峰 、 吴帆 、 崔宗岩 、 徐锦忠 、 曹联飞 、 韩亚超 、张敬群、王磊、赵光培、蒋先志、陈璇、李强强、董捷、李平、林影、李斌、车延年、陈云、汪玲。

　　Ⅲ

　　GB/T 44349—2024

　　蜂花粉总多酚的检测 福林酚试剂

　　比色法

　　1 范围

　　本文件描述了测定蜂花粉中总多酚的福林酚试剂比色方法。

　　本文件适用于蜂花粉中总多酚含量的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件。

　　GB 5009.3—2016 食品安全国家标准 食品中水分的测定

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　蜂花粉 bee pollen

　　工蜂采集花粉，用唾液和花蜜混合后形成的物质。

　　[ 来源： GB/T 30359—2021 ，3.2]

　　4 原理

　　蜂花粉经 75% 乙醇溶液超声提取的总多酚物质的酚羟基在碱性条件下，与福林酚试剂中磷钨钼酸的六价钨离子(W6+ )反应生成蓝色的五价钨离子(W5+ )，可在 765 nm 波长处产生最大吸收 。在一定浓度范围内，其吸光度与总多酚类化合物含量成正比 。与没食子酸标准曲线比较，可定量测定总多酚化合物的含量。

　　5 试剂和材料

　　除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

　　5.1 水，GB/T 6682，三级。

　　5.2 无水乙醇。

　　5.3 无水碳酸钠。

　　5.4 福林酚试剂 (Folin﹘Ciocalteu reagent)：1 mol/L (或 1 N) ，以棕色瓶分装， 4 ℃ 避光保存。直接购买或配制，配制方法见附录 A。

　　5.5 75%(体积分数) 乙醇溶液 ：加 25 mL 水至 75 mL 无水乙醇(5.2) 中，混合摇匀。

　　5.6 碳酸钠溶液(10 . 0%)： 称取 10.00 g±0.02 g 无水碳酸钠(5 . 3) ，加水溶解并稀释至 100 mL，

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　　GB/T 44349—2024

　　摇匀。

　　5.7 没食子酸(C 7H6O5) 标准品： CAS 号为 149﹘91﹘7，纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

　　5.8 没食子酸标准储备液(5.0 mg/mL)： 准确称取 0.500 0 g±0.000 1 g没食子酸标准品(5.7) 于小烧杯中，用约 5 mL 无水乙醇进行溶解，转移至 100 mL 容量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀。

　　6 仪器设备

　　6.1 分光光度计 ：波长范围为400 nm~800 nm ，配 1 cm标准比色皿。

　　6.2 离心机 ：配 50 mL 离心管容量转子，最高转速大于4 000 r/min。

　　6.3 电子天平 ：感量 0.000 1 g 和 0.01 g 各 1 台。

　　6.4 超声波清洗器： 功率不小于 200 W，水浴温度能恒定保持至50 ℃。

　　6.5 食品粉碎机： 功率不小于200 W。

　　7 分析步骤

　　7.1 试样制备

　　取适量蜂花粉，用食品粉碎机完全研磨为粉状。

　　7.2 试样前处理

　　用电子天平称取研磨好的样品质量( m )为 1.000 g±0.005 g 的蜂花粉试样至 50 mL 具盖离心管中，加入 20 mL 75% 乙醇溶液(5.5) ，充分混匀，放置超声波清洗器中超声处理 20 min，功率设为200 W，水浴温度设为 50 ℃。 冷却至室温，置于离心机中 以 4 000 r/min 离心 10 min。 转移全部上清液至50 mL( V)容量瓶中， 以 75% 乙醇溶液定容至刻度，摇匀，待测定。

　　7.3 空白试验

　　除不加样品外，其他步骤同7.2。

　　7.4 标准曲线的制作

　　7.4.1 分别吸取没食子酸标准储备溶液(5 . 8) 0.25 mL、0 . 5 mL、1 . 0 mL、1 . 5 mL、2 . 0 mL、 2.5 mL、3 . 0 mL、3 . 5 mL ，置 于 50 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，获得质量浓度依次为0.025 mg/mL、0 . 05 mg/mL、0 . 10 mg/mL、0 . 15 mg/mL、0 . 20 mg/mL、0 . 25 mg/mL、 0.30 mg/mL、0.35 mg/mL 的没食子酸标准溶液。

　　7.4.2 依次取 0.2 mL 各浓度没食子酸标准溶液置于 10 mL 比色管中，分别加入福林酚试剂(5 . 4) 0.5 mL，摇匀，放置3 min。分别加入 1.5 mL 10.0% 碳酸钠溶液(5.6) ，用水定容至刻度，室温避光静置 20 min。

　　7.4.3 以 75% 乙醇为空白对照，用分光光度计于 765 nm 波长处依次测定吸光度， 以 7.4.1 方法中0.025 mg/mL~ 0.35 mg/mL 的没食子酸溶液质量浓度(mg/mL) 为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制方法标准曲线和线性方程。

　　7.5 试样测定

　　7.5.1 分别吸取 0.2 mL试样溶液和空白样品溶液至 10 mL 比色管中， 加 0.5 mL 福林酚试剂(5.4) ，摇匀，放置 3 min。 再加入 1.5 mL 10.0% 碳酸钠溶液(5 . 6) 混匀，用水定容至刻度，室温避光静置

　　2

　　GB/T 44349—2024

　　20 min。

　　7.5.2 以空白试样溶液为参比， 在 765 nm 波长处测定样液吸光度，从标准曲线计算出测试样液中总多酚的浓度( P )(若浓度超过线性范围，可适当稀释后仍取 0.2 mL 样液测定)。

　　8 结果计算

　　试样中总多酚含量( 以没食子酸计，干基) 按公式(1) 计算：

　　X …………………………(1)

　　式中：

　　X ─试样中总多酚含量(以没食子酸计，干基) ，单位为毫克每克(mg/g);

　　P ─ 由标准曲线得到的样液中总多酚质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);

　　V ─样液体积，单位为毫升(mL);

　　m ─样品质量，单位为克(g);

　　X W ─水分含量，单位为克每百克(g/100 g)，按照GB 5009.3—2016中第二法测定。

　　注： 计算结果保留小数点后 2 位。

　　9 定量限

　　方法定量限为 1.25 mg/g。

　　10 精密度

　　在重复性测试条件下 2 次平行测定结果的绝对差值不超过其算术平均值的5%。

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　　GB/T 44349—2024

　　附 录 A (资料性)

　　福林酚试剂( Folin-Ciocalteu reagent )配制方法

　　福林酚试剂(1 mol/L)： 精密称取 10 g 钨酸钠(Na2WO4·2H2O)和 2.5 g 钼酸钠(NaMoO4·2H2O)于圆底烧瓶中， 用 70 mL 水溶解，加入 5 mL 85% 的磷酸溶液和 10 mL 浓盐酸，充分混匀，文火缓慢回流10 h，再加入 10 g 硫酸锂 (Li2SO4)、5 mL 水及数滴液溴。将烧瓶敞口继续沸腾 15 min，以使反应完全并除去多余的溴，冷却后呈黄色(如呈绿色，可再滴加数滴液溴后继续煮沸，直至溶液呈黄色)。 稀释定容至 200 mL，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中，即得 1 mol/L 福林酚试剂。4 ℃ 避光保存备用， 6 个月内有效。使用前，宜用 1 mol/L NaOH 标准溶液标定，以酚酞为指示剂。

　　4

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　　参 考 文 献

　　[1] GB/T 30359—2021 蜂花粉

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