GB/T 45625-2025 蜂王浆及蜂王浆冻干粉中羟甲基糠醛含量的测定 高效液相色谱法

　　ICS 65. 140 CCS B 47

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 45625—2025

　　蜂王浆及蜂王浆冻干粉中羟甲基糠醛含量的测定 高效液相色谱法

　　Determination ofhydroxymethylfurfuralcontentin royaljelly and royaljelly lyophilizedpowder—High-performanceliquid chromatography method

　　2025-04-25发布 2025-08-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 45625—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　本文件由中华全国供销合作总社提出 。

　　本文件由全国蜂产品标准化技术委员会(SAC/TC601)归 口 。

　　本文件起草单位 :杭州碧于天保健品有限公司 、浙江大学 、中国蜂产品协会 、南京天嘉检测服务有限公司 、桐庐县检验检测中心 、浙江省食品药品检验研究院 、杭州天厨蜜源保健品有限公司 、杭州和蜂园保健品有限公司 、安徽蜜之源食品集团有限公司 、山东丰采健康产业有限公司 、浙江江山恒亮蜂产品股份有限公司 、浙江江山健康蜂业有限公司 、上海冠生园蜂制品有限公司 、宜春学院 、华谱科仪(北京)科技有限公司 、陕西国蜂大健康产业有限公司 。

　　本文件主要起草人 :周萍 、尹 鑫 、胡 福 良 、李 珊 珊 、徐 锦 忠 、谭 丽 蕊 、梁 世 君 、李 樱 红 、王 磊 、周 星 联 、王燕 、李加芬 、张平 、郑浩亮 、徐韩波 、王前 、贾英杰 、郭孟萍 、陈静 、陈云 。

　　Ⅰ

　　GB/T 45625—2025

　　引 言

　　本文件的发布机构提请注意 ,声明符合本文件时 ,可能涉及第 4 章 ~ 第 10章与蜂王浆及其干粉中羟甲基糠醛含量的检测方法相关的专利的使用 。

　　本文件的发布机构对于该专利的真实性 、有效性和范围无任何立场 。

　　该专利持有人已向本 文 件 的 发 布 机 构 承 诺 , 他 愿 意 同 任 何 申 请 人 在 合 理 且 无 歧 视 的 条 款 和 条 件下 ,免费许可该专利的使用 。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案 。相关信息可以通过以下联系方式获得 :

　　专利持有人姓名 :杭州碧于天保健品有限公司 。

　　地址:浙江省杭州市桐庐县经济开发区桑园路 18号杭州碧于天保健品有限公司 。

　　请注意除上述专利外 ,本文件的某些内容仍可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　Ⅱ

　　GB/T 45625—2025

　　蜂王浆及蜂王浆冻干粉中羟甲基糠醛

　　含量的测定 高效液相色谱法

　　1 范围

　　本文件描述了蜂王浆及蜂王浆冻干粉中羟甲基糠醛含量的高效液相色谱测定方法 。

　　本文件适用于蜂王浆及蜂王浆冻干粉中羟甲基糠醛含量的测定 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义 。

　　4 原理

　　样品经氨水溶液溶解 ,用乙酸乙酯提取羟甲基糠醛 ,离心 ,取上清液蒸干 ,超声溶解后过滤膜 ,用高效液相色谱仪检测 ,外标法定量 。

　　5 试剂和材料

　　除非另有说明 ,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合 GB/T 6682规定的一级水 。

　　5. 1 试剂

　　5. 1. 1 氨水(NH3 · H2 O) :含氨(NH3 )25% ~ 28% 。

　　5. 1.2 乙酸乙酯(CH3COOC2 H5 ) 。

　　5. 1.3 磷酸(H3PO4 ) :色谱纯 ,含量不小于 85% 。

　　5. 1.4 甲醇(CH3 OH) :色谱纯 。

　　5. 1.5 无水硫酸钠 。

　　5.2 试剂配制

　　5.2. 1 磷酸溶液(0. 4% ,体积分数) :取 4 mL磷酸(5. 1. 3) ,用水稀释至 1 000 mL。

　　5.2.2 氨水溶液(1. 5% ,体积分数) :取 1. 5 mL氨水(5. 1. 1) ,用水稀释至 100 mL。

　　5.2.3 甲醇溶液(6% ,体积分数) :取 6 mL 甲醇(5. 1. 4) ,用水稀释至 100 mL。

　　1

　　GB/T 45625—2025

　　5.3 羟甲基糠醛标准品

　　羟甲基糠醛(C6 H6 O3 ,CAS号 :67-47-0) :纯度不小于 98% ,或羟甲基糠醛标准物质/标准样品 。

　　5.4 溶液配制

　　5.4. 1 羟甲基糠醛贮备液(1mg/mL) :称取羟甲基糠醛(5. 3)25 mg(精确至 0. 1 mg) ,用甲醇溶解并定容至 25 mL。 -18 ℃下有效期为 12个月 。

　　5.4.2 羟甲基 糠 醛 中 间 液 (100 mg/L) : 取 1. 0 mL 羟 甲 基 糠 醛 贮 备 液 (5. 4. 1) , 用 甲 醇 稀 释 定 容 至10 mL。0 ℃ ~4 ℃下有效期为 2个月 。

　　5. 4.3 羟甲基糠醛工作液 Ⅰ (10mg/L) :取 1. 0 mL羟甲基糠醛中间液(5. 4. 2) ,用水稀释定容至 10mL。现配现用 。

　　5.4.4 羟甲基糠醛工作液 Ⅱ (1mg/L) :取 1. 0 mL羟甲基糠醛中间液(5. 4. 2) ,用水稀释定容至 10 mL。现配现用 。

　　5.5 材料

　　滤膜 :0. 22 μm ,有机相型 。

　　6 仪器和设备

　　6. 1 高效液相色谱仪 :配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。

　　6.2 电子天平 :感量为 0. 1 mg和 0. 01g。

　　6.3 超声波清洗器 。

　　6.4 离心机 :最高转速不小于 4 500 r/min。

　　6.5 旋转蒸发仪 。

　　7 分析步骤

　　7. 1 制备与保存

　　7. 1. 1 蜂王浆试样

　　冷冻蜂王浆样品应在 0 ℃ ~ 8 ℃下解冻 ,取适量解冻后的蜂王浆样品 ,室温下混匀 。将制备好的试样密封 ,于 0 ℃ ~ 8 ℃环境下避光保存 ,供检测用 。若试样保存超过 1周 ,应在 -18℃环境下避光保存 。

　　7. 1.2 蜂王浆冻干粉试样

　　蜂王浆冻干粉样品应在 0 ℃ ~ 8 ℃下避光保存 。

　　称取 5. 0 g 蜂 王 浆 冻 干 粉 样 品 (精 确 至 0. 01 g) 于 50 mL 烧 杯 中 , 精 确 加 入 10 g 水 (精 确 至0. 01 g) , 用玻璃棒每隔 5 min搅拌一次 ,直至试样呈均匀的浆状 ,无颗粒 ,得到蜂王浆冻干粉试样 ,现配现用 。

　　7. 1.3 试样溶液制备

　　称取 1. 0 g(精确至 0. 01 g) 试样(7. 1. 1 或 7. 1. 2) 于 50 mL离心管中 ,加入 3. 0 mL 1. 5%氨水溶液(5. 2. 2) ,涡旋溶解 1 min,立即加入 20 mL 乙酸乙酯 , 涡旋提取 1 min,加入 5 g无水硫酸钠 ,振荡至糊状 ,涡旋提取 1 min,再 次 振 荡 至 糊 状 , 涡 旋 提 取 1 min, 4 500 r/min离 心 3 min, 吸 取 全 部 上 清 液 于

　　2

　　GB/T 45625—2025

　　50 mL鸡心瓶中 ,40 ℃下旋转蒸发至干 , 加入 1. 0 mL 6%甲 醇 溶 液(5. 2. 3) , 超 声 溶 解 , 过 0. 22 μm 滤膜 ,得到试样溶液 ,供高效液相色谱测定 。

　　7. 1.4 标准系列工作溶液制备

　　分别取 1 mg/L羟甲基糠醛工作液 Ⅱ (5. 4. 4)0. 20 mL、0. 50mL、2. 0 mL, 10 mg/L羟甲基糠醛工作液 Ⅰ (5. 4. 3)0. 50mL、2. 0 mL,用 6%甲醇溶液(5. 2. 3)稀释并定容至 10mL,得到标准系列工作溶液 。标准系列工作溶液的质量浓度分别为 20 μg/L、50 μg/L、200 μg/L 、500 μg/L、2 000 μg/L。

　　7.2 高效液相色谱参考条件

　　色谱柱 :C18色谱柱 (4. 6 mm×250 mm ,5 μm) ;或等效色谱柱 。

　　流动相 :流动相 A,0. 4%磷酸溶液(5. 2. 1) ;流动相 B, 甲醇 。流动相梯度参考洗脱条件见表 1。

　　流速 :见表 1。

　　柱温 :35 ℃ 。

　　检测波长 :285 nm。

　　进样量 :20 μL。

　　表 1 流动相梯度参考洗脱条件

　　时间/min

　　流动相 A/%

　　流动相 B/%

　　流速/(mL/min)

　　0. 0

　　94

　　6

　　1. 0

　　12. 0

　　94

　　6

　　1. 0

　　12. 01

　　0

　　100

　　1. 5

　　15. 0

　　0

　　100

　　1. 5

　　15. 01

　　94

　　6

　　1. 0

　　23. 0

　　94

　　6

　　1. 0

　　7.3 标准曲线制作

　　将标准系列工作溶液分别注入高效液相色谱仪中 ,测定相应的峰面积 , 以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标 , 以峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 。标准溶液的参考色谱图见附录 A。

　　7.4 试样溶液测定

　　将试样溶液注入高效液相色谱仪中 ,得到峰面积 ,根据标准曲线得到试样溶液中羟甲基糠醛的质量浓度 。试样溶液中羟甲基糠醛的浓度应在标准曲线范围内 ,若浓度过高 ,应稀释后进样测定 。蜂王浆试样溶液和蜂王浆冻干粉试样溶液的参考色谱图见附录 B。

　　7.5 空白试验

　　除不称取样品外 ,按与样品完全相同的步骤操作 。

　　8 结果计算与表述

　　8. 1 结果计算

　　样品中羟甲基糠醛含量(X)以微克每千克(μg/kg)表示 ,按公式(1)计算 :

　　3

　　GB/T 45625—2025

　　X …………………………( 1 )

　　式中 :

　　X — 样品中羟甲基糠醛的含量 ,单位为微克每千克(μg/kg) ;

　　ρ — 从羟甲基糠醛标准曲线上计算得到的质量浓度 ,单位为微克每升(μg/L) ;

　　V — 试样溶液最终复溶体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　m — 试样质量 ,单位为克(g) 。

　　k — 样品稀释倍数 ,蜂王浆样品 k= 1,蜂王浆冻干粉样品 k= 3;

　　8.2 结果表述

　　结果保留 3位有效数字 。

　　9 精密度

　　在重复性条件下获得的 2 次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 10% 。

　　10 其他

　　蜂王浆检 出限 为 20 μg/kg,定 量 限 为 50 μg/kg;蜂 王 浆 冻 干 粉 检 出限 为 60 μg/kg,定 量 限 为150μg/kg。

　　4

　　GB/T 45625—2025

　　附 录 A

　　(资料性)

　　标准溶液参考色谱图

　　羟甲基糠醛标准溶液参考色谱图见图 A. 1。

　　标引序号说明 :

　　1— 羟甲基糠醛 。

　　图 A. 1 羟甲基糠醛标准溶液参考色谱图

　　5

　　GB/T 45625—2025

　　附 录 B

　　(资料性)

　　蜂王浆试样溶液和蜂王浆冻干粉试样溶液参考色谱图

　　B. 1 蜂王浆试样溶液参考色谱图

　　蜂王浆试样溶液参考色谱图见图 B. 1。

　　标引序号说明 :

　　1— 羟甲基糠醛 。

　　图 B. 1 蜂王浆试样溶液参考色谱图

　　B.2 蜂王浆冻干粉试样溶液参考色谱图

　　蜂王浆冻干粉试样溶液参考色谱图见图 B. 2。

　　标引序号说明 :

　　1— 羟甲基糠醛 。

　　图 B.2 蜂王浆冻干粉试样溶液参考色谱图

　　6