GB/T 45211.5-2025 小麦抗病虫性评价技术规程 第5部分：纹枯病

　　ICS 65. 020. 01 CCS B 15

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 45211.5—2025

　　小麦抗病虫性评价技术规程

　　第 5 部分:纹枯病

　　Technicalcodeofpractice forevaluation ofresistanceto diseasesand

　　insectpestsin wheat—Part5:Sharp eyespot

　　2025-01-24发布 2025-08-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 45211.5—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　本文件是 GB/T 45211《小麦抗病虫性评价技术规程》的第 5 部分 。GB/T 45211 已经发布了以下部分 :

　　— 第 1部分 :条锈病 ;

　　— 第 2部分 : 叶锈病 ;

　　— 第 3部分 :秆锈病 ;

　　— 第 4部分 :赤霉病 ;

　　— 第 5部分 :纹枯病 ;

　　— 第 6部分 :黄矮病 ;

　　— 第 7部分 :蚜虫 ;

　　— 第 8部分 : 吸浆虫 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由中华人民共和国农业农村部提出并归 口 。

　　本文件起草单位 : 中国农业科学院植物保护研究所 。

　　本文件主要起草人 : 陈万权 、刘太国 、陈巨莲 、段霞瑜 。

　　Ⅰ

　　GB/T 45211.5—2025

　　引 言

　　GB/T 45211《小麦抗病虫性评价技术规程》旨在规范小麦抗病虫性鉴定技术方法 、操作程序和鉴定评价原则 ,为育种材料筛选 、杂交后代选择 、抗病基因发掘和品种评价审定等提供规范的标准化技术方法 ,对指导和推动我国小麦抗病育种 、品种布局和植物检疫等具有重要作用 。针对小麦生产中具有较大危害的 8种重要病虫害 ,GB/T 45211拟分为以下 8个部分 :

　　— 第 1部分 :条锈病 ;

　　— 第 2部分 : 叶锈病 ;

　　— 第 3部分 :秆锈病 ;

　　— 第 4部分 :赤霉病 ;

　　— 第 5部分 :纹枯病 ;

　　— 第 6部分 :黄矮病 ;

　　— 第 7部分 :蚜虫 ;

　　— 第 8部分 : 吸浆虫 。

　　Ⅱ

　　GB/T 45211.5—2025

　　小麦抗病虫性评价技术规程

　　第 5 部分:纹枯病

　　1 范围

　　本文件界定了小麦抗纹枯病评价技术的术语和定义 ,确立了评价程序 ,规定了接种体制备 、抗病性鉴定 、病情调查 、抗性评价等内容 ,描述了证实方法 。

　　本文件适用于小麦属植物对纹枯病抗性的田间和室内鉴定和评价 。

　　2 规范性引用文件

　　本文件没有规范性引用文件 。

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　3. 1

　　小麦纹枯病 wheatsharp eyespot

　　由禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis,同 Ceratobasidium cereale)引起的土传病害 。

　　3.2

　　抗病性 diseaseresistance

　　植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状 。

　　3.3

　　抗性评价 evaluation ofresistance

　　通过相应技术方法和标准鉴别寄主植物对特定病虫害反应程度和抵抗水平的过程 。 3.4

　　致病性 pathogenicity

　　病原物所具有的干扰寄主生长和引起病变的能力 。

　　3.5

　　人工接种 artificialinoculation

　　在适宜条件下 ,通过人工操作将病原物接种体放于植物体感病部位并使之发病的过程 。 3.6

　　病情级别 diseaseratingscale

　　植物个体或群体发病程度的人为数值化描述 。

　　注 : 包括病情指数和抗性评价 。

　　3.7

　　分离物 isolate

　　采用人工方法从植物发病部位获得的在特定环境条件下培养的病原物 。

　　3. 8

　　培养基 medium

　　能使病原物生长的基质 。

　　注 : 包括自然配制和人工配制 。

　　1

　　GB/T 45211.5—2025

　　3.9

　　接种体 inoculum

　　能侵染小麦并引起病害的病原体 。

　　3. 10

　　严重度 severity

　　发病植物单元上发病面积或体积占该单元总面积或总体积的百分率 。

　　注 : 也能用分级法表示 , 即将发病的严重程度由轻到重 划 分 出 几 个 级 别 ,分 别 用 一 些 代 表 值 表 示 ,说 明 病 害 发 生 的严重程度 。

　　3. 11

　　病情指数 disease index

　　全面衡量普遍程度与严重程度的综合指标 。

　　4 评价程序

　　小麦抗纹枯病评价程序包括接种体制备 、接种方法 、病情调查 、成株期抗性评价 。小麦抗纹枯病评价程序见图 1。

　　图 1 小麦抗纹枯病评价程序流程图

　　2

　　GB/T 45211.5—2025

　　5 接种体制备

　　5. 1 病原物分离

　　从发病植株茎和叶鞘基部的典型病斑上以组织分离法分离纹枯病病原物 。分离物经形态学 、细胞学和菌丝融合群鉴定(方法见附录 A 中 A. 1、A. 2) ,确认为禾谷丝核菌 Rhizoctonia cerealis及其所属菌丝融合群后 ,进行分离物纯化 ,经致病性测定后 ,转至马铃薯葡萄糖琼脂(PDA) 培养基斜面 , 直接保存或用石蜡油封存于 4 ℃下备用 。

　　5.2 病原物接种体的制备

　　将致病性强的禾谷丝核菌 Rhizoctonia cerealis的菌株参照 A. 3 的方法制成接种体备用 。

　　6 抗病性鉴定

　　6. 1 盆栽鉴定

　　将干燥后的病菌培养物按一定量与麦种充分混匀(2. 5 g培养物拌 25粒种子) ,撒播后盖土 , 随机区组排列 ,重复 6 次 。 冬 小 麦 需 事 先 进 行 春 化 处 理 , 播 种 时 接 种 。 灌 浆 后 期 至 蜡 熟 初 期 , 每 个 盆 钵 取20茎 ,按 0 级 ~ 5 级病级指标调查记载纹枯病 ,计算病情指数 。

　　6.2 大田鉴定

　　6.2. 1 鉴定圃选址

　　鉴定圃设置在小麦纹枯病适发区 ,选择具备良好自然发病环境和可控灌溉条件 、地势平坦 、土壤肥沃的地块 。

　　6.2.2 鉴定圃田间设置和播种

　　6.2.2. 1 田间设置

　　鉴定圃采用开畦条播 、等行距设置方式 , 畦宽 1. 5 m。 每个鉴定材料种植 1 行 ,行长 100 cm ,行距33 cm ,鉴定圃四周设保护行 。也可采用穴播方式 ,每穴间隔 25 cm。

　　6.2.2.2 播种

　　播种时间与当地大田生产一致 。条播方式每份材料播种 1行 ,每隔 20份鉴定材料播 1行感病对照(矮抗 58或其他当地高感品种) 。鉴定材料和对照每行均匀播种 100粒 。穴播方式 ,每份鉴定材料播种3 穴 ,每穴 20粒种子 。

　　6.2.3 人工接种

　　6.2.3. 1 接种期

　　条播于小麦分蘖期 、拔节初期各接种 1 次 。穴播在拔节期接种 1 次 。

　　6.2.3.2 接种方法

　　条播在每行小麦的 茎 基 均 匀 撒 纹 枯 病 病 麦 粒 50粒 左 右 , 撒 后 用 土 覆 盖 病 麦 粒 。 穴 播 采 用 直 径11 cm、长度 11 cm 聚氯乙烯(PVC)管套在小麦茎基部 ,放入纹枯病病麦粒 20粒 。

　　3

　　GB/T 45211.5—2025

　　6.2.3.3 人工接种前后田间管理

　　选择雨前或雨后接种 。接种前后若遇持续干旱 ,接种前后应进行喷水或灌溉 ,保持土表潮湿 ,促进病菌生长和侵染 。鉴定圃内不施用任何杀菌剂 。

　　7 病情调查

　　7. 1 调查时间

　　收获前 15 d~ 20 d调查 1 次 。

　　7.2 调查方法

　　鉴定每份材料的发病状况 ,重点部位为小麦下部叶鞘和茎秆 ,根据病害症状描述 , 以鉴定材料为单元逐株调查 ,记载病情级别 。条播调查样本每次重复不得少于 30茎/份材料 , 穴播调查每穴全部样本调查 。

　　7.3 病情分级

　　田间病情调查茎秆 ,其严重度分级及对应的症状描述见表 1。

　　表 1 小麦纹枯病严重度分级及其症状描述

　　严重度分级

　　症状描述

　　0

　　无症状

　　1

　　叶鞘变褐 ,有病斑 ,但病菌未侵入茎秆

　　2

　　病菌侵入茎秆 ,病斑环绕茎秆不超过 1/2

　　3

　　病斑环绕茎秆的 1/2(含) ~ 3/4

　　4

　　病斑环绕茎秆的 3/4(含)以上

　　5

　　出现枯 、白穗或整株死亡

　　7.4 发病率和病情指数计算

　　7.4. 1 发病率记载及计算

　　发病率按照公式(1)计算 。

　　P = (l/t) × 100 …………………………( 1 )

　　式中 :

　　P — 普遍率 , % ;

　　l — 发病叶片数 ;

　　t — 总叶片数 。

　　7.4.2 病情指数计算

　　病情指数按照公式(2)计算 。

　　DI × 100 … … … … … … … … … …

　　4

　　GB/T 45211.5—2025

　　式中 :

　　DI — 病情指数 ;

　　i — 病级数(0~n) ;

　　Xi —i级的单元数 ;

　　Si —i级严重度的代表值 ;

　　Smax— 严重度最高级值 。

　　8 抗性评价

　　8. 1 鉴定有效性判别

　　当鉴定圃中的感病或高感对照材料达到其相应感病程度(4级或 5 级) ,且发病率高于 60% ,则该批次抗纹枯病鉴定视为有效 。

　　8.2 重复鉴定

　　初次鉴定中表现为抗病 、中抗 、中感的材料 ,次年用相同的病原菌进行重复鉴定 。

　　8.3 抗性评价分级

　　8.3. 1 依据鉴定材料病情级别(病情指数)确定其对纹枯病的抗性水平 ,划分级别见表 2。

　　表 2 小麦对纹枯病抗性评价

　　病情指数

　　抗性评价

　　0

　　免疫 Immune(I)

　　0

　　抗病 Resistant(R)

　　10

　　中抗 Moderately Resistant(MR)

　　20

　　中感 Moderately Susceptible (MS)

　　40

　　感病 Susceptible (S)

　　DI>60

　　高感 Highly susceptible (HS)

　　8.3.2 根据两年抗性鉴定结果对鉴定材料进行抗病性评价 ,抗性以统计的最高病情指数为准 。

　　9 鉴定记载表格

　　小麦抗纹枯病鉴定结果按附录 B 中表 B. 1进行记载 。

　　5

　　GB/T 45211.5—2025

　　附 录 A

　　(资料性)

　　病原物鉴定和接种体制备

　　A. 1 病原物形态和细胞核数目鉴定

　　将获得的分离物在 PDA培养基上培养 ,菌落白色至浅褐色 ,匍匐菌丝直径 3. 8 μm~ 7. 6 μm ,菌核直径大于 0. 05 mm、小于 3. 0 mm , 白色至褐色 , 生长适温为 20 ℃ ~ 25 ℃的可初步鉴定为禾谷丝核菌Rhizoctonia cerealis (同 Ceratobasidium cereale) 。

　　采用插片培养法 , 即将灭菌的盖玻片斜插到 PDA培养基上的菌落边缘 ,待菌丝长到盖玻片上后取出染色 。将 DAPI或 Hoechst33258等荧光染料滴到菌丝上 ,或者直接将长有菌丝的盖玻片置于染色缸中 ,黑暗染色 3 min~ 5 min。取出后 ,用去离子水洗去染液 ,置于载玻片上用荧光显微镜观察 。 因荧光染料有半衰期 ,建议 染 色 后 尽 快 观 察 。 镜 检 细 胞 核 数 目 , 具 有 双 核 细 胞 的 为 禾 谷 丝 核 菌 Rhizoctonia cerealis。

　　A.2 菌丝融合群鉴定

　　用于抗性鉴定接种的分离物应首先进行菌丝融合群鉴定 。将处于生长状态的菌株与标准菌株同时从 PDA培养基上移到清洁玻片上 ,距离 2 cm~ 3 cm ,保湿培养 ,对峙生长 。菌丝生长至前沿相互接触时 ,用考马斯亮兰或苯胺蓝染液染色 ,在显微镜下观察菌丝融合 。

　　A.3 病原物接种体制备

　　取适量小麦 ,室温(22 ℃ ~ 25 ℃)下清水浸泡 24h~48h, 以手捏麦粒软而有弹性 ,但不碎为度 ,取出后清洗并沥干水分 ,分装到三角瓶或灭菌袋中 121℃高温高压灭菌 1 h。从培养基上的菌落边缘取菌块接种于上述灭菌麦粒中 ,在 22 ℃ ~ 25 ℃下培养 14 d~ 21 d,期间每隔 3 d~ 5 d摇动一次 ,使纹枯菌均匀生长至所有麦粒都长满菌丝 。使用前 ,将长满病菌的麦粒取出 , 阴凉通风处晾干 , 晾干后可直接使用或保存于 4 ℃冰箱中备用 。

　　6

　　GB/T 45211.5—2025

　　附 录 B

　　(规范性)

　　鉴定结果记载表

　　表 B. 1规定了小麦抗纹枯病鉴定结果记载表样式 。

　　表 B. 1 年小麦抗纹枯病鉴定结果记载表

　　编号

　　品种名称

　　来源

　　病级株数

　　病情指数

　　抗性评价

　　0 级

　　1 级

　　2 级

　　3 级

　　4级

　　5 级

　　鉴定地点 接种病原菌分离物编号

　　接种 日期 菌丝融合群类型

　　感病对照品种名称 调查 日期

　　鉴定技术负责人(签字) :

　　7