T/SXSF 12-2025 沙棘叶中总黄酮含量的测定方法 分光光度比色法

ICS 65.020.01
CCS X 04
团体标准
T/SXSF 12—2025
沙棘叶中总黄酮含量的测定方法分光光度比色法
2024-12-30发布2024-12-30实施
山西省林学会发布

目次
前言.......................................................................................................................................................................II
1 范围....................................................................................................................................................................1
2 规范性引用文件............................................................................................................................................... 1
3 术语和定义....................................................................................................................................................... 1
4 仪器和设备....................................................................................................................................................... 1
5 材料和试剂..................................................................................................................................................... 1
6 标准曲线绘制................................................................................................................................................... 2
7 试样及待测溶液制备....................................................................................................................................... 2
8 测定....................................................................................................................................................................2
9 计算....................................................................................................................................................................2
10 精密度..............................................................................................................................................................3
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II
前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件由山西省林学会提出并监督管理。
本文件由山西省林学会团体标准化技术委员会归口。
本文件起草单位：山西省林业和草原科学研究院。
本文件主要起草人：刘英翠、马倩、张春媛、田建华、魏璐、史鹏、梁爱军、张娜、陈春。
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沙棘叶中总黄酮含量的测定方法分光光度比色法
1 范围
本文件规定了沙棘叶总黄酮含量的测定方法的材料和试剂、仪器和设备、标准曲线绘制、
试样及待测溶液制备、测定、计算和精密度等要求。
本文件适用于采用分光光度比色法测定沙棘叶总黄酮含量。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期
的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括
所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 仪器和设备
可见分光光度计、分析天平（精度0.0001 g）、超声波清洗机、电热恒温鼓风干燥箱、
植物粉碎机。
5 材料和试剂
5.1 通用材料
采用沙棘干叶或湿叶为试验材料，干叶不少于100 g，湿叶不少于500 g。
5.2 试剂
无水乙醇（ C2H5OH ，分析纯）、亚硝酸钠( NaNO2，分析纯)、硝酸铝( AL(NO3)3 ，
分析纯)、氢氧化钠( NaOH ，分析纯)、芦丁标准品( UV≥98% )、水。水质达到GB/T 6682
规定的三级及以上。
5.3 试剂
5.3.1 亚硝酸钠溶液（50 g/L）：用分析天平称取5 g亚硝酸钠加水溶解稀释至100 mL。
5.3.2 硝酸铝溶液（100 g/L）：用分析天平称取10 g硝酸铝加水溶解稀释至100 mL。
5.3.3 氢氧化钠溶液（40 g/L）：用分析天平称取4 g氢氧化钠加水溶解稀释至100 mL。
5.3.4 60%乙醇溶液：60 mL无水乙醇用水稀释至100 mL。
5.3.5 30%乙醇溶液：30 mL无水乙醇用水稀释至100 mL。
5.3.6 芦丁标准溶液（0.2 mg/mL）配制：用分析天平称取芦丁标准品20 mg，加60%乙醇溶
液适量，置水浴上微热使溶解，冷却后转移置50 mL容量瓶中，加60%乙醇溶液定容至刻度，
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摇匀。量取25 mL，置50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀，配置成浓度0.2 mg/mL的芦
丁标准溶液。
6 标准曲线绘制
吸取0.3 mL、0.6 mL、1 mL、1.5 mL、2 mL、3 mL 芦丁标准溶液，分别置25 mL 容量
瓶中，各加30%乙醇溶液至6.0 mL，分别加5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；
再加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；后加入4%氢氧化钠试液4 mL，用30%乙
醇溶液定容至100 mL，摇匀，放置15 min，以30%乙醇溶液为空白，配制成浓度为0.0024、
0.0048、0.008、0.012、0.016、0.024 mg/mL 的芦丁标准系列工作液。用可见分光光度计在
500 nm 波长处测定工作液吸光度值。以工作液浓度为横坐标，工作液吸光度为纵坐标，绘
制标准曲线，并采用最小二乘法求得直线回归方程，参数（R2≥0.999）。
7 试样及待测溶液制备
7.1 试样处理
将沙棘叶放入60℃烘箱中干燥至恒重，粉碎，过60目筛。
7.2 待测溶液制备
用分析天平称取沙棘叶粉测试样品1.0000 g（±0.01 g），共3 份，分别加入60 %乙醇
溶液20 mL于三角瓶中，用超声波清洗机处理20 min,超声温度40 ℃，静置过滤，收集滤液于
100 mL容量瓶中，加60 %乙醇溶液定容至刻度，得提取液。量取25 mL提取液置于50 mL容
量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得3 份待测溶液。
8 测定
量取待测溶液0.5 mL，置25 mL容量瓶中，加30 %乙醇溶液至6 mL，分别加5 %亚硝酸
钠溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；再加入10 %硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；再加
入4 %氢氧化钠溶液4 mL，用30 %乙醇溶液定容至刻度，摇匀，放置15 min，放入比色皿中，
作为待测溶液。吸取待测溶液0.5 mL，加30 %乙醇溶液定容到25 mL容量瓶中，放入比色皿
中作为空白溶液。将待测溶液和空白溶液同时置于可见分光光度计中，在500 nm波长处测定
吸光度值。
9 计算
沙棘叶中总黄酮含量按式（1）计算。
C×V×d
X = —————— × 100% …………………………(1)
W
式中：
X——总黄酮的含量，单位为百分率（%）；
C——由直线回归方程求出待测溶液中芦丁浓度，单位为毫克/毫升（mg/mL）；
V——待测溶液定容体积，单位为毫升（mL）（若使用7.2步骤时，即为100）；
d——样品定容后的稀释倍数（若使用8测定步骤时，即为100）；
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W——实际称取测试样品的质量，单位为毫克（mg）。
计算结果保留两位有效数字。
10 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的10 %。