NY/T 4655-2025 动物源性食品中裂头拗检测方法

NY/T 4655-2025《动物源性食品中裂头蚴检测方法》主要内容总结：

​​1. 标准概述​​

• ​​标准名称​​：动物源性食品中迭宫绦虫裂头蚴的检测方法。
• ​​适用范围​​：适用于猪、鸡、蛙、鱼等动物产品及其制品中裂头蚴的检测。
• ​​发布与实施​​：2025年1月9日发布，2025年5月1日实施。
• ​​归口单位​​：全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181），起草单位为中国农业科学院上海兽医研究所。

​​2. 背景与意义​​

• ​​裂头蚴危害​​：迭宫绦虫幼虫（裂头蚴）可寄生在多种动物体内，导致动物生长缓慢、消瘦等症状，威胁食品安全。
• ​​检测必要性​​：因裂头蚴形态差异大且症状不典型，需标准化检测方法确保食品质量安全。

​​3. 检测方法​​

标准规定了三种检测方法，需综合判定结果：

1. ​​目检法​​

   • ​​步骤​​：观察组织样品中乳白色/淡黄色、蜷曲状、筋膜样长条状虫体（0.5–80 cm）。
   • ​​判定​​：发现疑似虫体需进一步镜检或PCR确认。
   • ​​附录A​​：提供裂头蚴形态参考图（如蛙肌肉中寄生的虫体）。

2. ​​显微镜检法​​

   • ​​步骤​​：用生理盐水制片，显微镜下观察虫体结构（吸槽、石灰小体、网状实质等）。
   • ​​判定​​：发现吸槽、石灰小体等特征可确诊阳性。

3. ​​PCR检测法​​

   • ​​靶基因​​：线粒体细胞色素c氧化酶亚基1（cox1）基因片段（约440 bp）。
   • ​​引物​​：JB3/JB4.5（序列见附录C）。
   • ​​流程​​：样品DNA提取→PCR扩增→琼脂糖凝胶电泳→结果判读。
   • ​​质控​​：需设阳性和阴性对照，阳性条带为440 bp。

​​4. 样品处理要求​​

• ​​采样部位​​：
  • ​​猪​​：腹膜下板脂、膈肌脚、腰肌等。
  • ​​鸡​​：胸大肌、肌胃外围脂肪等。
  • ​​蛙/鱼​​：腿部肌肉、腹腔表面等。
• ​​保存与运输​​：
  • 24小时内送检，短期存于2–8℃，长期存于-20℃或-80℃（虫体可保存于70%酒精）。

​​5. 试剂与仪器​​

• ​​关键试剂​​：PBS、TAE缓冲液、EB染料、蛋白酶K、DNA提取试剂盒等（配制方法见附录B）。
• ​​仪器​​：PCR仪、离心机、电泳系统、显微镜等。

​​6. 结果判定​​

• ​​综合判定​​：显微镜检或PCR任一阳性即判为裂头蚴阳性。
• ​​PCR有效性​​：阳性对照出现440 bp条带且阴性无条带时试验有效。

​​7. 附录内容​​

• ​​附录A​​：裂头蚴形态图例（如蛙肌肉中虫体照片）。
• ​​附录B​​：试剂配制方法（如PBS、TAE缓冲液）。
• ​​附录C​​：引物序列、cox1基因参考序列及PCR扩增图。

​​8. 其他说明​​

• ​​专利声明​​：标准可能涉及专利，但发布机构不承担识别责任。
• ​​安全提示​​：使用EB染料时需注意防护（建议替代核酸染料）。

核心要点：

该标准系统规范了动物源性食品中裂头蚴的采样、检测流程及判定标准，结合形态学与分子生物学方法，确保检测的准确性和可操作性，为食品安全监管提供技术依据。