GB/T 30359-2021 蜂花粉

　　ICS 65 . 140 CCS B 47

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 30359—2021代替 GB/T 30359—2013

　　蜂 花 粉

　　Beepollen

　　2021-12-31 发布 2022-07-01 实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　发

　　布

　　GB/T 30359—202 1

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1 . 1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

　　本文件代替 GB/T 30359—2013《蜂花粉》，与 GB/T 30359—2013 相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：

　　a) 更改了适用范围(见第 1 章，2013 年版的第 1 章);

　　b ) 删除了术语和定义中“花粉壁”和“破壁蜂花粉”的条目(见 2013 年版的 3 .1 、3 .2 和 3 .6) ;

　　c) 删除了表 2 中的过氧化值(以脂肪计)项 目(见 2013 年版的 4.2) ;

　　d) 更改了表 2 中水分的指标，统一为小于或等于 10.0 g/100 g(见 4.2 , 2013 年版的 4.2) ;

　　e) 删除了单一品种蜂花粉的花粉率测定的第一法，保留第二法作为试验方法(见 5.2.3 , 2013 年版的 5 . 2 . 8) ;

　　f) 更改了蜂花粉包装材料要求(见 6.1 , 2013 年版的 6.1) ;

　　g) 删除了包装物或者标识上的部分要求(见 2013 年版的 6.2.1) ;

　　h) 删除了运输包装的要求(见 2013 年版的 6.2.2) ;

　　i) 更改了贮存的相关要求(见 6.3 , 2013 年版的 6.3) ;

　　j) 增加了高粱(sorghum bicolor)花粉单一品种色泽和细胞形态(见 A.1.17) ;

　　k) 增加了盐肤木花粉(俗称五倍子花粉)和高粱花粉电子显微镜下的细胞形态特征(见 B. 1. 16、 B. 1 . 17) 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中华全国供销合作总社提出。

　　本文件由全国蜂产品标准化工作组(SAC/SWG 2)归口 。

　　本文件起草单位：杭州仟源保灵药业有限公司、浙江公正检验中心有限公司、中国蜂产品协会、中国计量大学。

　　本文件主要起草人：虞英民、徐承智、陈青俊、孙国峰、李红亮、李福高、胡晓岚、朱金梁。

　　本文件所代替文件的历次版本发布情况为：

　　— 本文件于 2013 年首次发布，本次为第一次修订。

　　GB/T 30359—202 1

　　蜂 花 粉

　　1 范围

　　本文件规定了蜂花粉的术语和定义、技术要求、试验方法、包装、标志、储存和运输。

　　本文件适用于养蜂生产的初级农产品蜂花粉。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注 日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注 日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

　　GB 5009 . 3—2016 食品安全国家标准 食品中水分的测定

　　GB 5009 . 4 食品安全国家标准 食品中灰分的测定

　　GB 5009 . 5 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定

　　GB 5009 . 6—2016 食品安全国家标准 食品中脂肪的测定

　　GB 5009 . 7—2016 食品安全国家标准 食品中还原糖的测定

　　GB 5009 . 8 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　GB 7718 食品安全国家标准 预包装食品标签通则

　　GB 31636—2016 食品安全国家标准 花粉

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件。

　　3.1

　　花粉 pollen

　　由一个营养细胞和一个至二个生殖细胞组成的显花植物的雄性种质。

　　3.2

　　蜂花粉 beepollen

　　工蜂采集花粉(3 . 1),用唾液和花蜜混合后形成的物质。

　　3.3

　　单一品种蜂花粉 monofloralbeepollen

　　工蜂采集一种植物的花粉(3 . 1)形成的蜂花粉(3 . 2) 。

　　3.4

　　杂花粉 multifloralbeepollen

　　工蜂采集两种以上植物的花粉(3 . 1)形成的蜂花粉(3 . 2) ,或两种以上单一品种蜂花粉的混合物。

　　3.5

　　碎蜂花粉 beepollendebris

　　蜂花粉(3 . 2)团粒破碎后形成的蜂花粉粉末。

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　　3.6

　　工蜂 workerbee

　　在蜂群内担当采集、守卫、清理、哺育等内外勤工作的生殖器官发育不完全的雌性蜜蜂。

　　4 技术要求

　　4 . 1 感官要求

　　感官要求应符合表 1 的规定。

　　表 1 蜂花粉的感官要求

　　4 . 2 理化要求

　　产品等级和理化要求应符合表 2 要求。

　　表 2 蜂花粉的等级和理化指标

　　4 . 3 单一品种蜂花粉的定性鉴别要求

　　单一品种蜂花粉的定性鉴别应符合附录 A 的要求，电子显微镜下形态特征见附录 B 中的 B. 1 。

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　　5 试验方法

　　5 . 1 感官要求检验

　　5 . 1 . 1 色泽、状态

　　取适量试样置于洁净的白色(瓷盘或同类容器)盘中，在自然光下用肉眼观察色泽和状态，检查有无异物、虫蛀、霉变。

　　5 . 1 . 2 气味

　　取适量试样置于洁净的白色(瓷盘或同类容器)盘中，用鼻嗅其气味。

　　5 . 1 . 3 滋味

　　取适量试样，用温开水漱口后品其滋味。

　　5 . 2 理化要求检验

　　5 . 2 . 1 水分

　　按 GB 5009 . 3—2016 规定的第二法执行。

　　5 . 2 . 2 碎蜂花粉率

　　用天平称取试样约 50 g,精确到 0.1 g,用孔径 0.9 mm(20 目)筛筛出碎粒及碎粉末并称重。按公

　　式(1)计算。

　　x …………………………( 1 )

　　式中：

　　xS — 碎蜂花粉率;

　　m1 — 筛出的碎花粉粉末质量，单位为克(g) ;

　　m0 — 试样质量，单位为克(g)。

　　5 . 2 . 3 单一品种蜂花粉率

　　称取试样约 10 g,拣出其中该品种蜂花粉团粒，分别称量，按公式(2)计算。

　　x …………………………( 2 )

　　式中：

　　xd — 单一品种花粉率;

　　m1 — 为该品种蜂花粉团粒质量，单位为克(g) ;

　　m0 — 试样蜂花粉团粒质量，单位为克(g)。

　　5 . 2 . 4 蛋白质

　　按 GB 5009 . 5 规定的方法执行。

　　5 . 2 . 5 脂肪

　　按 GB 5009 . 6—2016 规定的第二法执行。

　　GB/T 30359—202 1

　　5 . 2 . 6 总糖(以还原糖计)

　　样品按 GB 5009 . 8 中的盐酸水解处理后，再按 GB 5009 . 7—2016 规定的第一法执行。

　　5 . 2 . 7 黄酮类化合物(以无水芦丁计)

　　按附录 C规定的方法执行。

　　5 . 2 . 8 灰分

　　按 GB 5009 . 4 规定的方法执行。

　　5.2.9 酸度(以 PH值表示)

　　按 GB 31636—2016 的表 2 理化指标中酸度(以 pH 值表示)项目检验方法执行。

　　5 . 3 单一品种蜂花粉的定性鉴别方法

　　附录 A所列单一品种蜂花粉，显微定性鉴别按 A. 2 的规定的方法;如果在光学显微镜下观察不能明确判断时，按 B. 2 规定的方法进行电子显微镜下鉴别。 如是杂花粉，则按各单一品种蜂花粉依次鉴别。

　　6 包装、标志、贮存和运输

　　6 . 1 包装

　　蜂花粉包装材料应符合相关安全要求，包装容器牢固、严密、整洁、无破损、无泄漏。

　　6 . 2 标志

　　6 . 2 . 1 包装物或者标识上应当按照规定标明产品的品名、产地、生产者、生产 日期、保质期、产品质量等级等内容。

　　6 . 2 . 2 预包装食品标签应符合 GB 7718 的要求。

　　6 . 3 贮存

　　6 . 3 . 1 应于阴凉干燥处密封存放，或根据贸易双方约定协议贮存。

　　6 . 3 . 2 贮存场所应清洁卫生，防高温、防风雨、远离污染源。

　　6 . 4 运输

　　6 . 4 . 1 运输工具应清洁卫生。 运输过程中，要避免高温，防曝晒、防雨淋、防湿。

　　6 . 4 . 2 轻装轻卸，不应与有毒、有害、有异味、易污染的物品同装混运。

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　　附 录 A

　　(规范性)

　　单一品种蜂花粉的定性鉴别和显微镜检验方法

　　A.1 单一品种蜂花粉色泽和细胞形态

　　A.1 . 1 油菜(BrassicacampestrisL.)花粉

　　油菜花粉为黄色。

　　细胞呈近似长球形，按形态特征分为白菜型、甘蓝型、芥菜型。 极面观为三列片状，三道萌发沟明

　　显;赤道面观为圆形或椭圆形。电子显微镜下观察外壁具网状雕纹。白菜型长径为 32 μm~39 μm,甘蓝型和芥菜型长径为 40 μm~46 μm。见图 A.1。

　　a)油菜花粉赤道面观形态 ( × 400) b)油菜花粉极面观形态 ( × 400)

　　图 A.1 油菜花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 .2 芝麻(sesamum orientaleL.)花粉

　　芝麻花粉为白色或咖啡色。

　　细胞呈扁球形(似扁南瓜)，少数为球形。 赤道面观为阔椭圆形，极面观为 12 裂圆形。 表面有瘤状

　　雕纹，从正面观察为负 网状，35. 3 μm × 40. 1 μm。具有 10 ~ 13 道萌发沟，间 隙较宽。极面直径约65 μm, 赤道面直径约 45 μm。见图 A.2。

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　　a)芝麻花粉赤道面观形态 ( × 100) b)芝麻花粉极面观形态 ( × 100)

　　图 A.2 芝麻花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 .3 荞麦(Fagopyrumesculentum Moench.)花粉

　　荞麦花粉为暗黄色。

　　花粉细胞呈长球形，表面有细网状雕纹，赤道面观为椭圆形，极面观为 3 裂圆形。 极面观察可见 3

　　道明显萌发沟。极面直径约 44 μm。赤道面直径约 31 μm。见图 A.3。

　　a)荞麦花粉赤道面观形态 ( × 100) b)荞麦花粉极面观形态 ( × 100)

　　图 A.3 荞麦花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 .4 向 日葵(HelianthusannuusL.)花粉

　　向 日葵花粉为橘黄色。

　　花粉细胞呈圆球形，赤道面观为椭圆形，极面观为 3 裂圆形，直径约为 35 μm。外壁有尖刺，刺长3 μm~5 μm。表面有 3 孔沟，间隔 5 μm~10 μm。见图 A.4。

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　　a) 向 日葵花粉赤道面观形态( × 100) b) 向 日葵花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.4 向 日葵花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 .5 玉米(zeamaysL.)花粉

　　玉米花粉为淡黄色。

　　花粉细胞呈近似球形，直径约 80 μm。外壁光滑，有一个圆的萌发孔。见图 A.5。

　　a)玉花粉赤道面观形态( × 100) b)玉米花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.5 玉米花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 .6 紫云英(AstragalussinicusL.)花粉

　　紫云英花粉为橘红色。

　　花粉细胞呈长球形，赤道面观长椭圆形，极面观为钝三角形或三裂片状。极面直径约 30 μm,赤道面直径约 15 μm。表面具细网状雕纹，有三孔沟。见图 A.6。

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　　a)紫云英花粉赤道面观形态( × 100) b)紫云英花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.6 紫云英花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 .7 蚕豆(viciafaba L.)花粉

　　蚕豆花粉为黑绿色。

　　花粉细胞呈长球形，赤道面观为椭圆形，极面观为钝三角形，大小约为 30 μm× 50 μm。表面具细

　　颗粒雕纹，有三条萌发沟。 见图 A. 7 。

　　a)蚕豆花粉赤道面观形态( × 100) b)蚕豆花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.7 蚕豆花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 .8 西瓜[citrulluslanatus(Thunb.)Matsum.& Nakai]花粉

　　西瓜花粉为紫黄色。

　　花粉细胞呈近似球形，约 55 μm×60 μm。外壁表面具有较大的网状雕纹，有 3 孔沟。极面观为三

　　裂片状。 见图 A. 8 。

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　　a)西瓜花粉赤道面观形态( × 100) b)西瓜花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.8 西瓜花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 .9 南瓜[cucurbitamoschata(DuchesneexLam.)Duchesneexpoir.]花粉

　　南瓜花粉为深黄色。

　　花粉细胞呈圆球形，直径 150 μm。表面有尖刺，刺长 5 μm~10 μm。见图 A.9。

　　a)南瓜花粉赤道面观形态( × 100) b)南瓜花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.9 南瓜花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 . 10 柑橘(citrusreticulata Blanco)花粉

　　柑橘花粉为黄色。

　　花粉细胞呈近似球形，赤道面观为椭圆形或近似矩形。极面观为 4~5 裂圆形。具 4~5 孔沟，表面具网状雕纹。近似球形的直径约 30 μm。椭圆形的赤道直径为 28 μm,极面直径为 32 μm。见图 A.10。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)柑橘花粉赤道面观形态( × 100) b)柑橘花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.10 柑橘花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 . 1 1 党参[codonopsispilosula(Franch.)Nannf.]花粉

　　党参花粉为黄色。

　　花粉细胞呈近似球形，赤道面观近扁圆形，极面观为 6 裂圆形，表面有颗粒状雕纹，有 6~7 道细条状萌发沟。大小约 35 μm×40 μm。见图 A.11。

　　a)党参花粉赤道面观形态 ( × 100) b)党参花粉极面观形态 ( × 100)

　　图 A.1 1 党参花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 . 12 蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)花粉

　　蒲公英花粉为黄色。

　　花粉细胞呈近似球形，直径约 28.3 μm。表面有明显刺网状雕纹，有三孔沟。见图 A.12。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)蒲公英花粉赤道面观形态( × 100) b)蒲公英花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.12 蒲公英花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 . 13 荷花(NelumbonuciferaGaertn.)花粉

　　荷花花粉为黄色。

　　花粉细胞呈近似球形。赤道面观椭圆形，极面观为三裂圆形，直径 65 μm~68 μm。具三沟，沟宽。壁厚 4.4 μm~5.2 μm。表面有颗粒状纹。见图 A.13。

　　a)荷花花粉赤道面观形态( × 100) b)荷花花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.13 荷花花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 . 14 茶花(camelliajaponica L.)花粉

　　茶花花粉为黄色。

　　花粉细胞呈近似球形。赤道面观椭圆形，极面观为钝三角形或 3 裂圆形，直径 34 μm~52 μm。有

　　三孔沟，内孔大，横长。 表面有细网状纹。 见图 A. 14 。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)茶花赤道面观形态( × 100) b)茶花花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.14 茶花花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 . 15 玫瑰(Rosarugosa Thunb.)花粉

　　玫瑰花粉为黄色。

　　花粉细胞呈近似球形。赤道面观椭圆形，极面观为三裂圆形，直径 17 μm~22 μm。具三沟。表面

　　有细网状或脑状雕纹。 见图 A. 15 。

　　a)玫瑰花粉赤道面观形态( × 100) b)玫瑰花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.15 玫瑰花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 . 16 盐肤木(Rhuschinensis Mill.)花粉(俗称五倍子花粉)

　　盐肤木花粉为黄色。

　　花粉细胞呈近似球形。赤道面观椭圆形，极面观为近球形，极面观 6 裂圆形，花粉大小约 25 μm× 23 μm。见图 A.16。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)盐肤木花粉赤道面观形态( × 100) b)盐肤木花粉极面观形态( × 100)

　　图 A.16 盐肤木花粉细胞显微镜下的形态

　　A.1 . 17 高粱(sorghum bicolor)花粉

　　花粉为淡黄色。

　　花粉颗粒呈球形，赤道面观圆形，极面观为钝三角形或三裂片状。极面直径约 30 μm ,赤道面直径约 30 μm。表面细网状，有三孔沟。见图 A.17。

　　a)高粱花粉赤道面观形态( × 400) b)高粱花粉极面观形态( × 400)

　　图 A.17 高粱花粉细胞显微镜下的形态

　　A.2 蜂花粉品种的鉴别 — 显微镜镜析法

　　A.2 . 1 仪器

　　光学显微镜：10 × 10 倍、10 × 40 倍。

　　GB/T 30359—202 1

　　A.2 . 2 步骤

　　取蜂花粉 10~15 粒置于刻度指形管中，加入硫酸和冰乙酸的混合液(1 ∶ 9) ,浸没花粉粒。用玻璃棒捣碎花粉后，加热至沸，保持 5 min。冷却后加蒸馏水转移至离心管中离心，离心后弃去上清液，再加

　　蒸馏水摇匀离心，共离心 3 次 。沉淀物加甘油数滴搅匀。 用玻璃棒蘸取 1 滴涂在载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下检视。

　　A.2 . 3 结果判断

　　如为 A. 1 所列品种，则按 A. 1 的图谱对照鉴别。

　　GB/T 30359—202 1

　　附 录 B

　　(规范性)

　　蜂花粉品种的鉴别和电子显微镜检验法

　　B.1 电子显微镜下蜂花粉的形态特征

　　B.1 . 1 油菜花粉细胞电镜下的形态见图 B. 1 。

　　a)油菜花粉赤道面观形态 ( × 4 000) b)油菜花粉极面观形态 ( × 6 000)

　　图 B.1 油菜花粉细胞电镜图

　　B.1 . 2 芝麻花粉细胞电镜下的形态见图 B. 2 。

　　a)芝麻花粉赤道面观形态 ( × 2 000) b)芝麻花粉极面观形态 ( × 2 500)

　　图 B.2 芝麻花粉细胞电镜下的形态

　　GB/T 30359—202 1

　　B.1 . 3 荞麦花粉细胞电镜下的形态见图 B. 3 。

　　a)荞麦花粉赤道面观形态 ( × 2 500) b)荞麦花粉极面观形态 ( × 3 000)

　　图 B.3 荞麦花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 4 向 日葵花粉细胞电镜下的形态见图 B. 4 。

　　a) 向 日葵花粉赤道面观形态( × 3 000) b) 向 日葵花粉极面观形态( × 3 000)

　　图 B.4 向 日葵花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 5 玉米花粉细胞电镜下的形态见图 B. 5 。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)玉米花粉粒形态( × 2 000) b)玉米花粉外壁雕纹与萌发孔形态( × 2 000)

　　图 B.5 玉米花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 6 紫云英花粉细胞电镜下的形态见图 B. 6 。

　　a)紫云英花粉赤道面观(视 2 孔沟)形态( × 7 000) b)紫云英花粉极面观形态( × 6 000)

　　图 B.6 紫云英花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 7 蚕豆花粉细胞电镜下的形态见图 B. 7 。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)蚕豆花粉赤道面观(视 2 孔沟)形态( × 3 000) b)蚕豆花粉极面观形态( × 4 000)

　　图 B.7 蚕豆花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 8 西瓜花粉细胞电镜下的形态见图 B. 8 。

　　a)西瓜花粉赤道面观形态( × 3 000) b)西瓜花粉极面观形态( × 3 000)

　　图 B.8 西瓜花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 9 南瓜花粉细胞电镜下的形态见图 B. 9 。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)南瓜花粉表面雕纹形态( × 1 000) b)南瓜花粉粒形态( × 1 000)

　　图 B.9 南瓜花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 10 柑橘花粉细胞电镜下的形态见图 B. 10 。

　　a)柑橘花粉赤道面观形态(视 2 孔沟( × 7 000) b)柑橘花粉极面观形态( × 7 000)

　　图 B.10 柑橘花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 1 1 党参花粉细胞电镜下的形态见图 B. 11 。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)党参花粉赤道面观形态( × 4 000) b)党参花粉极面观形态( × 4 000)

　　图 B.1 1 党参花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 12 蒲公英花粉细胞电镜下的形态见图 B. 12 。

　　a)蒲公英花粉赤道面观形态( × 7 000) b)蒲公英花粉极面观形态( × 7 000)

　　图 B.12 蒲公英花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 13 荷花花粉细胞电镜下的形态见图 B. 13 。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)荷花花粉赤道面观形态( × 2 000) b)荷花花粉极面观形态( × 2 500)

　　图 B.13 荷花花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 14 茶花花粉细胞电镜下的形态见图 B. 14 。

　　a)茶花花粉赤道面观形态( × 3 000) b)茶花花粉极面观形态( × 4 000)

　　图 B.14 茶花花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 15 玫瑰花粉细胞电镜下的形态见图 B. 15 。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)玫瑰花粉赤道面及表面雕纹形态( × 8 000) b)玫瑰花粉极面观形态( × 7 000)

　　图 B.15 玫瑰花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 16 盐肤木花粉(俗称五倍子花粉)细胞电镜下的形态见图 B. 16 。

　　a)盐肤木花粉赤道面观形态( × 5 000) b)盐肤木花粉极面观形态( × 5 000)

　　图 B.16 盐肤木花粉细胞电镜下的形态

　　B.1 . 17 高粱花粉细胞电镜下的形态见图 B. 17 。

　　GB/T 30359—202 1

　　a)高粱花粉赤道面观形态( × 2 500) b)高粱花粉极面观形态( × 2 500)

　　图 B.17 高粱花粉细胞电镜下的形态

　　B.2 蜂花粉品种的鉴别 — 电子显微镜镜析法

　　B.2 . 1 仪器

　　扫描电镜，放大倍数：20~10 000 倍;离子溅射仪。

　　B.2 . 2 步骤

　　B.2.2. 1 样品称取和净化：用四分法均匀选取花粉样品，在万分之一电子天平上称取 0. 1 g 放入 2 mL指型管中，加入纯净水(25 ℃ ) 1.5 mL,置于超声波清洗器中超声 10 min,静止 3 min 后弃去上层清洗液，重复 2 次 。 同法再用丙酮(分析纯)和无水乙醇(分析纯)进行漂洗，然后将样品平摊在中性滤纸上自然风干。

　　B.2 . 2 . 2 样品贴台和镀膜：在粘有双面碳导电胶带的扫描电镜样品台上，用取样杆将样品均匀撒落在样品台上并轻轻展开，放入离子溅射仪中，在真空度优于 0.1 Torr,电源开关在 HV,电压旋钮为 5,电流表读数在 4 mA~6 mA 时，进行溅射 5 min,取出后待电镜观察。

　　B.2.2.3 扫描电镜观察：将待观察的样品台放入扫描电镜内、在放大倍数：20~ 10 000 倍、加速电压： 15 kV、室内温度：15 ℃ ~25 ℃、相对湿度小于或等于 70%、电源 110 VA、频率 50/60 Hz 的条件下，调到最佳的清晰度、亮度、对比度和放大倍数，进行图像扫描拍摄。

　　GB/T 30359—202 1

　　附 录 C

　　( 规范性)

　　花粉中黄酮类化合物的分析测定方法

　　C.1 试剂

　　除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

　　C.1 . 1 水，GB/T 6682,二级 。

　　C.1 .2 无水乙醇。

　　C.1 .3 亚硝酸钠。

　　C.1 . 4 硝酸铝 。

　　C.1 .5 氢氧化钠。

　　C.1 .6 70%(体积分数)乙醇：水 30 mL加无水乙醇 70 mL。

　　C.1 .7 5%亚硝酸钠溶液：称取 5.0 g 亚硝酸钠，用水定容至 100 mL。

　　C.1 .8 10%硝酸铝溶液：称取 17.6 g 硝酸铝，用水定容至 100 mL。

　　C.1 .9 氢氧化钠试液：称取 4.3 g 氢氧化钠，用水定容至 100 mL。

　　C.1 . 10 芦丁(C27 H30 O16)标准品(纯度大于或等于 98%)。

　　a) 芦丁标准品贮备液：准确称取芦丁标准品 50 mg,置 50 mL 容量瓶中，加 70%乙醇(C. 1.6)适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，配成浓度为 1 mg/mL 的标准储备液，4 ℃条件下保存。

　　b) 芦丁标准品使用溶液：准确吸取 10 mL芦丁标准品贮备液[C.1.10a)],置 50 mL 容量瓶中，加70%乙醇(C.1.6)适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，配成浓度为 0.2 mg/mL 的标准溶液，4 ℃条件下保存。

　　C.2 仪器设备

　　C.2. 1 紫外可见分光光度计(波长范围 190 nm~900 nm)。

　　C.2.2 天平，精度为 0.000 1 g。

　　C.3 试样的制备

　　称取磨碎花粉样品 1.0 g~3.0 g,精确至 0.000 1 g,加 70%乙醇(C.1.6)40 mL,加热回流 2 h,冷却，过滤至 50 mL(V0)容量瓶中，以 70%乙醇(C.1 .6 )洗涤残渣，洗液并入容量瓶中，用 70%乙醇(C.1 .6 )定容至刻度，摇匀。准确量取 2 mL 置 10 mL容量瓶中，用 70%乙醇(C.1.6)稀释至刻度，摇匀。样品制备

　　时同时制备空白样品(除不加样品外其他步骤同样品一样)，同一操作者用同一方法独立制备两份样品。

　　C.4 分析步骤

　　C.4 . 1 标准曲线的制备

　　准确量取芦丁标准品使用溶液[C. 1. 10b)] 0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL,分别至25 mL 容量瓶中，各加水至 6 .0 mL,加 5%亚硝酸钠溶液(C.1 .7 )和 10%硝酸铝溶液(C.1 .8 )各 1 mL,摇匀，放置 6 min,加氢氧化钠试液(C. 1. 9) 10 mL,加水至刻度，摇匀，放置 15 min。配成浓度分别为0 mg/mL、0.008 mg/mL、0.016 mg/mL、0.024 mg/mL、0.032 mg/mL、0.040 mg/mL、0.048 mg/mL的标准工作溶液。在 510 nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

　　GB/T 30359—202 1

　　C.4 . 2 样品的测定

　　吸取按 C.3 制备好的样品溶液 2 mL(V1) ,至 25 mL(V2)容量瓶中，加水至 6.0 mL,加 5%亚硝酸钠溶液(C.1.7)和 10%硝酸铝溶液(C.1.8)各 1 mL,摇匀，放置 6 min,加氢氧化钠试液(C.1.9) 10 mL,加水至刻度，摇匀，放置 15 min。按照分光光度法测定，在 510 nm 波长处测定吸光度，从标准曲线得到所测

　　样液中黄酮的浓度。 同一操作者在短时间内用同一方法独立测定两份样品，测定同时做样品空白试验(除不加样品外其他步骤同样品一样)。

　　C.5 计算

　　C.5 . 1 黄酮含量按公式(C.1)计算。

　　X

　　式中：

　　X — 黄酮含量(以芦丁计)，单位为毫克每百克(mg/100 g) ;

　　c — 由标准曲线上得到的样液中黄酮质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL) ;

　　V0 — 样品的提取体积，单位为毫升(mL) ;

　　V1 — 吸取稀释后样液体积，单位为毫升(mL) ;

　　V2 — 比色时最终定容体积，单位为毫升(mL) ;

　　m — 样品的质量，单位为克(g)。

　　C.5.2 计算结果用百分数表示，保留到小数点后两位。

　　C.6 精密度

　　在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相

　　互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的 3%。