GB/T 28086-2011 长针线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法

　　ICS 65. 020. 01 B 16

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 28086—2011

　　长针线虫属(传毒种类) 检疫鉴定方法

　　Detection and identification ofLongidorusspp. asvirusvectors

　　2011-12-30发布 2012-06-01实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 28086—2011

　　前 言

　　本标准按照 GB/T 1. 1—2009给出的规则起草 。

　　本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271) 提出并归 口 。

　　本标准起草单位 : 中华人民共和国珠海出入境检验检疫局 、中华人民共和国宁波出入境检验检疫局 、中华人民共和国云南出入境检验检疫局和珠海市质量计量监督检测所 。

　　本标准主要起草人 : 陈其文 、张卫东 、廖力 、蒋立琴 、顾建锋 、杜宇 、徐淼锋 、迟远丽 、乐海洋 、张慧娟 、彭仁 。

　　Ⅰ

　　GB/T 28086—2011

　　长针线虫属(传毒种类) 检疫鉴定方法

　　1 范围

　　本标准规定了长针线虫属传毒种类的检疫鉴定方法 。

　　本标准适用于植物根系 、土壤及栽培介质中长针线虫属传毒种类的检疫鉴定 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注 日期的引用文件 ,仅注 日期的版本适用于本文件 。凡是不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　GB/T 24830 拟毛刺线虫属(传毒种类) 检疫鉴定方法

　　SN/T 1157 进出境植物苗木检疫规程

　　SN/T 1158 进出境植物盆景检疫规程

　　3 长针线虫属(传毒种类) 基本信息

　　中文名 :长针线虫属传毒种类 。

　　学名 :Longidorusspp. 。

　　英文名 :virus vectors species ofNeedle nematodes。

　　剑线虫属传毒种类隶属于线虫门 Nematoda (Rudolphi,1808) Lankester,1877、无侧尾腺纲 Adeno- phoreaLinstow,1905、矛线 目 Dorylaimida Pearse,1942、长 针 线 虫 科 Longidoridae(Thorne, 1935) Fil- ipjev,1934、长针线虫属 Longidorus(Micoletzky,1922) Filipjev,1934。

　　长针线虫属传毒种类是植物根系的迁移性外寄生线虫 , 主要依靠土壤 、介质土和带根苗木 、球茎等寄主植物材料的调运传播 。

　　长针线虫属传毒种类的其他信息参见附录 A。

　　4 方法原理

　　将现场检疫中发现的介质土 、土壤以及植株 ,经漏斗法或浅盘法分离获得线虫 ,制成临时或永久玻片 ,显微镜下对雌 、雄虫主要鉴定特征仔细观察并测量数据 ,依据本标准描述的长针线虫属传毒种类形态鉴定特征与其基本生物学信息 ,按系统分类学方法 ,鉴定其生物学种类 。

　　5 仪器和用具

　　仪器和用具按 GB/T 24830执行 。

　　6 试剂

　　试剂按 GB/T 24830执行 ,分样筛选用 300 目 。

　　1

　　GB/T 28086—2011

　　7 现场检疫

　　对苗木 、球茎等寄主材料进行检查 ,注意观察苗木的生长状况 、根部为害状 , 以及是否带介质 、土壤等 。重点选取植株矮化 、萎缩 ,根畸形 、粗短 、侧根消失等症状的苗木及根际介质或土壤 ,如无可疑症状则按要求随机取样 。取样后立即置密封塑料袋 ,标记后及时送实验室检测 。

　　具体抽样比例按 SN/T 1157和 SN/T 1158执行 。

　　8 实验室检验

　　8. 1 线虫分离

　　线虫分离按 GB/T 24830执行 。

　　8. 2 体视显微镜镜检

　　分离获得的水样在 10倍以上体视显微镜检查 ,观察线虫的形态结构 。

　　8. 3 标本制作

　　标本制作按 GB/T 24830执行 。

　　8. 4 生物显微镜观察、摄影和测量

　　应针对雌 、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影 ,重点包括整体形态 、齿尖针 、前唇区形态 、侧器囊形态 、雌虫阴道骨化结构及雄虫交合刺等 ,并在每张图片上加相应标尺 。需观察 、测量获得多岐检索表中各鉴定特征数字代码(参见附录 B) ,并计算 a、b、c和 V 等值 。

　　9 形态鉴定特征

　　9. 1 长针线虫属鉴定特征

　　9. 1. 1 雌虫

　　虫体细长,热杀死后虫体直到弯成“C”形 ,有 1 排 ~ 2 排侧体孔 。 头部圆 , 连续或缢缩 ;侧器口小孔状 、不明显 ,侧器囊袋状 。齿尖针长 、针状 ,不高度硬化 ,齿尖针基部平滑 、不分叉 ,齿托长约为齿尖针长的三分之二 、中等硬化 ,基部略厚但不呈凸缘状 ;齿针导环为单环 ,距头端的距离通常小于 2 倍头宽 ,偶尔位置较后(距头端距离达齿尖针长的 40%) ;有 1 个背食道腺和 2 个腹亚侧腺 ,背食道腺细胞核位于背食道腺开口后一段距离 、小于腹亚侧腺细胞核 ; 阴门横裂 、位于虫体中部 ,双卵巢对伸 、转折 。尾短 ,呈弓圆锥形 ,端细圆或宽圆 ,有几对尾孔 。

　　9. 1. 2 雄虫

　　长针线虫属部分种类雄虫未发现 ,雄虫双生殖腺 、对伸 ,后精巢转折 ,交合刺粗大 、向腹面弯 ,交合刺顶端部有短的附导片 ,斜纹交配肌显著 、延伸至泄殖腔前几倍体宽处 ,泄殖腔区有 1对交配乳突(有的种有 2对 ~ 3对) ,在其前有 1 列 腹 中 交 配 乳 突 , 最 多 有 20个 , 有 些 种 的 部 分 腹 中 交 配 乳 突 交 错 排 列 成双排 。

　　长针线虫属与近似属的区别见表 1。

　　2

　　GB/T 28086—2011

　　表 1 长针线虫科各属的主要鉴别特征

　　鉴定特征

　　线 虫 种 类

　　长针线虫属Longidorus

　　类长针线虫属Longidoroides

　　拟长针线虫属 Paralongidorus

　　剑针线虫属Xiphidorus

　　拟剑针线虫属

　　Paraxiphidorus

　　剑线虫属 Xiphinema

　　诱导环

　　单 环 , 位 于齿尖针前部

　　单 环 , 位 于齿尖针前部

　　单 环 , 位 于齿尖针前部

　　单 环 , 位 于齿尖针后部

　　单 环 , 位 于齿尖针后部

　　双 环 , 位于 齿 尖 针后部

　　齿尖针基部

　　平滑

　　平滑

　　平滑或叉状

　　叉状

　　叉状

　　叉状

　　齿托基部

　　不呈凸缘状

　　不呈凸缘状

　　不呈凸缘状

　　凸缘状

　　凸缘状

　　凸缘状

　　侧器 口

　　孔状

　　横裂缝状

　　横裂缝状

　　小裂缝状或孔状

　　宽横裂缝状

　　宽 横 裂缝状

　　侧器囊

　　袋状

　　袋状

　　漏斗状至倒马镫状

　　袋状

　　倒马镫状

　　漏斗状至倒马镫状

　　背 食 道 腺核 大 小 及 其位置

　　小 , 位 于 背食道 腺 开 口 后一段距离

　　小 , 位 于 背食道 腺 开 口 后一段距离

　　小 , 位 于 背食道 腺 开 口 后一段距离

　　小 , 位 于 背食道 腺 开 口 后一段距离

　　小 , 位 于 背食道 腺 开 口 后一段距离

　　大 , 紧 接背 食 道 腺开口

　　9. 2 长针线虫属传毒种类形态鉴定特征(参见附录 B 和附录 C)

　　9. 2. 1 阿普尔长针线虫(Longidorusapulus Lamberti, 1977)

　　雌虫虫体细长 (5. 1 mm ~ 9. 1 mm) , 热 杀 死 后 呈 “C”字 形 ; 唇 区 扁 平 , 有 轻 微 缢 缩 , 唇 区 宽 度

　　14μm~ 17μm ,虫体前端至 诱 导 环 的 长 度 27 μm ~ 34 μm;侧 器 囊 大 多 对 称 二 裂 ; 齿 尖 针 弱 , 长 度 为

　　91 μm~ 112 μm ,齿托较长 60 μm~ 88μm;尾部呈圆锥形 。雄虫稀少 。

　　9. 2. 2 Longidorusarthensis Brown, 1994

　　雌虫虫体细长(5. 1 mm~ 7. 6 mm) ,热杀死后虫体弯曲呈 “C”形 ;唇区钝圆 ,有轻微缢缩 ,唇区的宽度大约为 16μm;侧器囊大而明显 ,存在二裂 ,延伸到口腔到导环距离的三分之二处 ;尾部钝圆锥形 ,尾长约为肛门处体宽 。雄虫有发现 ,交合刺典型矛形 。

　　9. 2. 3 浙狭长针线虫(Longidorusattenuates Hooper, 1961)

　　雌虫虫体细长(5. 2 mm~ 7. 5 mm) ,热杀死后 ,虫体后半部形成稍大的弯曲 ,成 “C”形 。 头部扁平 ,稍阔 ,有明显缢缩 ,缢缩处体宽为导环处体宽四分之三 。侧器囊大 ,基部对称二裂 ,延伸到口腔到导环距离的二分之一 ,侧器囊几乎围绕着头部 ,侧器孔很小 ;齿尖针细长 ,是齿托的 2 倍长 ,并与齿托有简单的交叉 ;尾部背面凸起 ,呈锥形 ,尾长是肛门处体宽的 1. 5 倍 ~ 1. 75倍 。雄虫稀有 ,交合刺长 45 μm。侧附导片末端二裂 。

　　9. 2. 4 短环长针线虫(Longidorusbreviannulatus Norton, 1975)

　　雌虫虫体细长(4. 0 mm~ 5. 9 mm) ,热杀死后常弯曲成“C”形 ,有时不规则 ;体细 ,平均体宽 50 μm (除尾端部分) ; 阴门处有轻微突起 , 阴门孔倾斜 ;唇区扁平 ,有缢缩 ;侧器囊二裂 ,延伸到几乎接近导环 ,侧气孔模糊 ,位于唇区后部 ;尾部圆锥形 ,但在有些成虫尾端有短而宽的突起 。雄虫未发现 。

　　3

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　　9. 2. 5 草皮长针线虫(Longidoruscaespiticola Hooper, 1961)

　　雌虫虫体细长(5. 2 mm~ 8. 2 mm) ,热杀死后虫体成 “C”形 ; 唇区圆球状 ,表面光滑 ,有缢缩 ,缢缩处体宽少于导环处体宽的二分之一 ;侧器囊大 ,不二裂 ,呈长瓶状或袋状 ,延伸到口腔到导环距离的三分之二处 ;齿尖针细长 ,与齿托有简单的交叉 ,齿托略微超过齿尖针长度的二分之一 ;尾部背面凸起 ,呈圆至钝圆锥形 ,尾长接近与肛门处的体宽 。发现雄虫 ,交合刺长 90 μm ,有附导片 ,雄虫与雌虫的比例通常为 1 ∶ 2。

　　9. 2. 6 折环长针线虫(Longidorusdiadecturus Eveleigh, 1982)

　　雌虫虫体 细 长(3. 3 mm~ 4. 0 mm) , 热 杀 死 后 虫 体 直 到 弯 成 “C”形 。 虫 体 前 端 至 诱 导 环 的 长 度50 μm~ 64μm;齿尖针和齿托的长度分别为 109μm~ 121μm 和 55μm~ 66μm ,尾部钝圆形 。雄虫未发现 。

　　9. 2. 7 移去长针线虫[Longidoruselongatus(deMan,1876) Thorne,1936]

　　雌虫虫体细长(4. 5 mm~ 6. 4 mm) ,热杀死后虫体直到弯成 “C”形 。 唇区扁平 ,微缢缩 ,缢缩处体宽占导环处体宽的二分之一到三分之二 , 口孔有 16个乳突 ;侧器囊大 ,袋状 ,延伸到口腔到导环位置的距离的二分之一处 ,侧器口孔状 ,难辨认 ,位于唇区基部 ;齿尖针细长 ,与齿托有细微交叉 ,齿托为齿尖针的二分之一长度 ;尾部背面凸起 ,腹面平或稍凹陷 ,呈圆锥形 ,尾长是肛门处体宽的 1 倍 ~ 1. 3倍 。雄虫在大多数种群中通常稀有或没有 。

　　9. 2. 8 卫矛长针线虫(Longidoruseuonymus Mali, 1974)

　　雌虫虫体狭长(6. 0 mm ~ 7. 6 mm) , 热 杀 死 后 虫 体 向 腹 部 弯 区 ; 唇 区 圆 滑 , 前 端 扁 平 , 唇 宽 约14μm ,深度缢缩 , 口孔周围有 16个乳突 ;侧器囊大 ,延伸到口腔到导环位置的二分之一距离 ,侧器囊基部不明显 ,有轻微的二裂 。齿尖针长而细 ,齿托约为齿尖针的三分之二 。尾长是肛门处体宽的 1. 3 倍 ,尾部呈钝圆形 。雄虫未发现 。

　　9. 2. 9 横带长针线虫(Longidorusfasciatus Roca, 1981)

　　雌虫虫体细长(6. 6 mm~ 8. 5 mm) , 热杀死后稍呈 “C”形 。 唇区 5 μm~ 6 μm 高 , 宽度 12 μm~

　　14μm, 口孔处呈圆形 ,不缢缩 ;侧器囊不对称二裂 ,两裂片间有一定深度 ;齿尖针细长 ,长度为 102 μm~

　　119μm ,有齿托 ;尾部钝圆形 。雄虫未发现 。

　　9. 2. 10 瘦头长针线虫(Longidorusleptocephalus Hooper, 1961)

　　雌虫虫体细长(3. 5 mm~ 6. 3 mm) ,热杀死后弯曲成“C”形 ;唇区圆形 ,有轻微缢缩 ,缢缩处体宽占导环处体宽的二分之一到三分之二 , 口孔处有 16个乳突 ;侧器囊大 ,基部对称二裂 ,延伸至口腔到导环距离的二分之一 ,侧器孔不明显 ,位于唇乳突的外环 ;尾部背面凸起 , 圆锥形 ,腹侧有轻微的凹陷 ,约为肛门处体宽的 1倍 ~ 1. 4倍 。雄虫很少发现 。

　　9. 2. 11 大体长针线虫(Longidorusmacrosoma Hooper, 1961)

　　雌虫虫体粗壮(6. 8 mm~ 12 mm) ,热杀后虫体向腹部弯曲 ;唇区扁平至轻微凹陷 ,有缢缩 ,缢缩处体宽约占导环处体宽的二分之一 ;侧器大 ,呈长瓶状 ,基部有二裂 ,但从背腹面看则呈袋状 ;齿尖针细长 ,齿托超过齿尖针长度的二分之一 ,尾部短 ,半圆形到钝圆形 ,为肛门处体宽的二分之一到三分之二 。雄虫普遍 ,交合刺大 ,长 105 μm ,钝弓形 。

　　4

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　　9. 2. 12 马丁长针线虫(LongidorusmartiniMerny, 1966)

　　雌虫虫体细长(3. 2 mm~4. 3 mm) ,热杀死后虫体向腹部弯区 ;虫体前端明显变细 ,唇区有明显缢缩 ;虫体前端至诱导环 的 长 度 大 于 50 μm;侧 器 囊 呈 袋 状 , 没 有 明 显 的 基 部 裂 片 ; 尾 部 较 长 27 μm ~ 29μm ,呈圆至钝圆锥形 。雄虫有发现 。

　　9. 2. 13 Longidorusprofundorum Hooper, 1966

　　雌虫虫体细长(6. 0 mm~ 12. 0 mm) ,唇区平截状 ,不缢缩 ,唇宽约为食道基部体宽的四分之 一 , 口孔处有 16个乳突 ,侧器囊大而明显 ,二裂 ,延伸至口腔到导环距离的三分之二处 ;齿尖针长而细 ,齿托超过齿尖针长度的二分之一 ;尾长约为肛门处体宽的四分之三 ,尾圆锥形 。雄虫有发现 ,交合刺矛形 ,有附导片 。

　　9. 3 长针线虫属主要传毒种类测计值

　　长针线虫属传播种类的测计值见表 2。

　　表 2 长针线虫属传毒种类测计值

　　测 计 值

　　ODS

　　ODP

　　μm

　　60~ 80

　　64~ 66

　　65~ 75

　　64~ 76

　　36~ 45

　　38~ 40

　　28~ 45

　　OGR

　　μm

　　24~ 34

　　31

　　30~ 38

　　V

　　L

　　mm

　　传毒线虫种类

　　b c

　　a

　　μm

　　%

　　♀

　　♂

　　♀

　　♂

　　♀

　　♂

　　♀

　　♂

　　♀

　　♂

　　♀

　　♂

　　♀

　　♂

　　♀

　　♂

　　♀

　　♂

　　91~ 112

　　102~ 103

　　98~ 111

　　102~ 116

　　73~ 93

　　80~ 84

　　76~ 88

　　128~ 216

　　142~ 143

　　123~ 184

　　117~ 174

　　82~ 147

　　99~ 114

　　111~ 154

　　10. 7~ 18. 3

　　13. 8~ 15. 3

　　11. 9~ 15. 7

　　10. 5~ 14. 8

　　12. 7~ 22. 5

　　12. 9~ 17. 1

　　12. 3~ 23. 8

　　5. 1~ 9. 1

　　6. 2~ 6. 3

　　5. 1~ 7. 6

　　4. 6~ 7. 0

　　5. 2~ 7. 5

　　5. 5~ 6. 3

　　4. 0~ 5. 9

　　110~ 169

　　129~ 131

　　74. 5~ 118

　　49~ 54

　　阿普尔长针线虫

　　—

　　L. apulus

　　48~ 53

　　L. arthensis

　　—

　　—

　　88. 0~ 99. 7

　　27~ 32

　　30~ 32

　　21~ 26

　　109~ 210

　　119~ 171

　　86~ 119

　　44~ 55

　　浙狭长针线虫

　　—

　　L. attenuatus

　　43. 1~ 50. 2

　　短环长针线虫

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　L. breviannulatus

　　100~ 120

　　99~ 115

　　101~ 121

　　83~ 162

　　76~ 173

　　122~ 177

　　30~ 41

　　32~ 45

　　50~ 64

　　5. 2~ 8. 2

　　5. 4~ 7. 5

　　3. 3~ 4. 0

　　10. 4~ 17. 0

　　10. 0~ 16. 2

　　63~ 84

　　64~ 86

　　56~ 90

　　52~ 80

　　55~ 66

　　44~ 58

　　草皮长针线虫

　　—

　　L. caespiticola

　　—

　　—

　　—

　　折环长针线虫

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　L. diadecturus

　　34~ 71

　　43~ 58

　　45~ 76

　　9. 7~ 17. 5

　　11. 5~ 15. 3

　　13. 3~ 22. 8

　　28~ 37

　　30~ 33

　　26~ 33

　　73~ 141

　　89~ 155

　　125~ 198

　　81~ 102

　　72~ 98

　　81~ 90

　　4. 5~ 6. 4

　　5. 0~ 6. 4

　　6. 1~ 7. 8

　　76~ 123

　　93~ 127

　　124~ 186

　　45~ 53

　　移去长针线虫

　　—

　　L. elongatus

　　47~ 56

　　卫矛长针线虫

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　L. euonymus

　　11. 8~ 25. 5

　　187~ 283

　　102~ 119

　　121~ 143

　　6. 6~ 8. 5

　　45~ 70

　　33~ 39

　　42~ 52

　　横带长针线虫

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　L. fasciatus

　　瘦头长针线虫

　　L. leptocephalus

　　♀ 3. 5~ 6. 3 74~ 137 8. 0~ 20. 0 75~ 154 58~ 78 30~ 62 25~ 32 45~ 59

　　♂

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　—

　　5

　　GB/T 28086—2011

　　表 2 (续)

　　传毒线虫种类

　　测 计 值

　　L

　　mm

　　a

　　b

　　c

　　ODS μm

　　ODP μm

　　OGR μm

　　V

　　%

　　大体长针线虫L. macrosoma

　　♀

　　6. 8~ 12. 0

　　66~ 142

　　11. 0~ 21. 0

　　148~ 290

　　119~ 150

　　53~ 95

　　37~ 48

　　41~ 59

　　♂

　　6. 7~ 11. 1

　　76~ 120

　　11. 0~ 19. 9

　　148~ 268

　　113~ 147

　　53~ 97

　　40~ 47

　　—

　　马丁长针线虫L. martini

　　♀

　　3. 2~ 4. 3

　　81~ 160

　　9. 1~ 17

　　110~ 184

　　83~ 96

　　51~ 61

　　51~ 66

　　52~ 56

　　♂

　　2. 8~ 3. 9

　　93~ 133

　　10. 2~ 13. 5

　　68~ 162