GB/T 24316-2009 致命鹅膏的物种鉴定

　　ICS 67 . 080 . 20 X 26

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 24316—2009

　　致命鹅膏的物种鉴定

　　Identification ofAmanitaexitialis

　　2009-09-30 发布 2009-12-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 24316—2009

　　前 言

　　本标准的附录 A 、附录 C 为资料性附录，附录 B 为规范性附录 。

　　本标准由中华全国供销合作总社提出并归 口 。

　　本标准起草单位：广东省微生物分析检测中心 。

　　本标准主要起草人：李泰辉 、邓旺秋 、宋斌 、沈亚恒 。

　　Ⅰ

　　GB/T 24316—2009

　　引 言

　　致命鹅膏 Amanitaexitialis Zhu L. Yang & T. H . Li 是华南地区特有的野生剧毒蘑菇种类，不可食用 。制定本标准，旨在帮助人们正确识别致命鹅膏，以减少误食中毒事件的发生 。

　　Ⅱ

　　GB/T 24316—2009

　　致命鹅膏的物种鉴定

　　1 范围

　　本标准规定了致命鹅膏 Amanitaexitialis Zhu L. Yang & T. H . Li(子实体)的形态学鉴定方法和操作规程 。

　　本标准适用于致命鹅膏 Amanitaexitialis(子实体)的物种鉴定 。

　　2 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本标准 。

　　2 . 1

　　菌环 annulus

　　某些伞菌菌柄上呈环状的内菌幕残余物 。

　　[GB/T 12728—2006 ,定义 2 . 2 . 45]

　　2 . 2

　　菌托 volva

　　位于菌柄基部的外菌幕残留物 。也称脚苞 。

　　[GB/T 12728—2006 ,定义 2 . 2 . 46]

　　2 . 3

　　菌髓 trama

　　一些担子菌组成菌盖或产生子实层组织的中心部分 。

　　[GB/T 12728—2006 ,定义 2 . 2 . 49]

　　2 . 4

　　担孢子 basidiospore

　　在担子上产生的有性孢子 。如香菇的担孢子 。

　　[GB/T 12728—2006 ,定义 2 . 2 . 25]

　　2 . 5

　　外菌幕 universalveil

　　包裹在整个原基或菌蕾外面的膜状物 。

　　[GB/T 12728—2006 ,定义 2 . 2 . 44]

　　2 . 6

　　菇蕾(菌蕾) button

　　由原基分化的有菌盖和菌柄的幼小子实体 。

　　[GB/T 12728—2006 ,定义 2 . 2 . 14]

　　2 . 7

　　淀粉质 amyloid

　　与梅氏试剂反应变蓝色的性质 。

　　3 原理

　　3 . 1 分类地位

　　致命鹅膏 Amanitaexitialis属真菌界(Fungi) 、担子菌门(Basidiomycota) 、伞菌纲 (Agaricomyce-

　　1

　　GB/T 24316—2009

　　tes) 、伞菌目(Agaricales) 、鹅膏科(Amanitaceae) 、鹅膏属(Amanita)。

　　3 . 2 共生植物

　　致命鹅膏 A.exitialis的共生植物为壳斗科 Fagaceae植物，目前发现其与黧蒴栲 castanopsisfissa (又称黧蒴 、大叶锥 、大叶栎)共生(参见附录 A) 。黧蒴栲在我国贵州南部 、广西 、广东 、湖南 、福建 、江西等省区均有分布 。

　　3 . 3 鉴定原理

　　根据样品的宏观形态和微观形态特征进行分类鉴定 。

　　4 试剂

　　4 . 1 氢氧化钾：分析纯 (AR) 。

　　4 . 2 氢氧化钾溶液(50 g/L) ：准确称取氢氧化钾 50 g,加蒸馏水溶解并定容至 1 000 mL 。

　　4 . 3 碘：分析纯(AR) 。

　　4 . 4 碘化钾：分析纯(AR) 。

　　4 . 5 水合三氯乙醛：分析纯(AR) 。

　　4 . 6 梅氏试剂：准确称取碘 0 . 5 g、碘化钾 1 . 5 g 以及水合三氯乙醛 22 g,混合溶于 22 mL蒸馏水中 。

　　4 . 7 刚果红：分析纯 (AR) 。

　　4 . 8 刚果红溶液 (10 g/L) ：准确称取刚果红 10 g,溶于 100 mL蒸馏水中 。

　　4 . 9 浸镜油 。

　　5 仪器和设备

　　5 . 1 光学显微镜 。

　　5 . 2 目镜测微尺 。

　　5 . 3 放大镜 。

　　5 . 4 盖玻片 。

　　5 . 5 载玻片 。

　　5 . 6 刀片 。

　　5 . 7 镊子 。

　　5 . 8 刻度尺 。

　　6 致命鹅膏 Amanitaexitialis的形态特征(见附录 B)

　　宏观特征：菌蕾早期是由白色[1A1] 外菌幕包被的卵圆形个体 。成熟担子果小型至中等，偶大型 。菌盖直径 4 cm ~ 9( ~ 15)cm,扁平至平展，有时中央稍下陷，白色[1A1],但中央常米黄色[2A2 , 2A3] ,光滑，常无菌 幕 残 余，湿 时 稍 沾;菌 盖 边 缘 平 滑 无 沟 纹 。 菌 肉 白 色，不 变 色 。 菌 褶 离 生，白 色 [1A1 , 1A2],稠密;短菌褶近菌柄端渐窄 。菌柄长 7 cm ~ 13( ~ 20)cm,直径 0 . 5 cm ~ 1 . 5( ~ 3 . 5)cm,近圆柱形或向上稍变细，白色[1A1],光滑或被白色纤毛状鳞片;内部实心至松软，白色，不变色;基部近球形，直径 1 cm ~ 2(3)cm 。菌柄基部菌幕残余(菌托)浅杯状，游离托檐高达 1(2)cm,薄，两面白色[1A1];菌环顶生，白色[1A1],膜质，宿存，有时在菌盖展开时被撕破消失 。

　　显微特征：菌褶两侧型：中央菌髓宽 30 μm ~ 40 μm,由菌丝(直径 2 μm ~ 6 μm) 和椭圆形至梭形的膨大细胞(60 μm ~ 90 μm × 12 μm ~ 20 μm) 构成，稀见油质菌丝;侧生菌髓中膨大细胞较多至丰富，棒状至近梭形(40 μm ~ 70 μm × 10 μm ~ 20 μm) , 其 间 夹 杂 有 丰 富 的 菌 丝(直 径 2 μm ~ 6 μm) 。 担 子27 μm ~ 55 μm×10 μm ~ 15 μm,棒状，具 2 小梗，偶具 1 小梗;小梗长 5 μm ~ 7(9)μm;担子基部横隔上无锁状联合 。担孢子(9 . 0) 9 . 5 μm ~ 12 . 0(14 . 5)μm × (8 . 5) 9 . 0 μm ~ 11 . 5(13 . 0)μm(Q= 1 . 0 ~ 1 . 15 , Q= 1 . 08) ,球形至近球形，稀宽椭圆形，淀粉质，无色，光滑，薄壁;侧生小尖细小 。褶缘不育，有大量膨

　　2

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　　大细胞，近球形至球头短柄状(14 μm ~ 25 μm × 13 μm ~ 20 μm) 或宽棒状(20 μm ~ 25 μm × 12 μm ~ 15 μm) , 薄壁，无色，项生，单 个 或 2 个 ~ 3 个 连 成 念 珠 状 。 菌 盖 表 皮 厚 30 μm ~ 50 μm, 其 中 上 层 厚

　　15 μm ~ 30 μm,由近辐射状排列的菌丝组成，菌丝直径 2 μm ~ 5 μm,胶化，无色透明;下层厚 15 μm ~

　　30 μm,由近辐射状排列紧密的菌丝组成，菌丝直径 3 μm ~ 8 μm,不胶化，无色透明 。 菌柄基部托檐内部主要由不规则 、紧密排列的菌丝组成，其直径 2 μm ~ 7 μm,无色透明，壁薄或稍厚(厚达 0 . 5 μm) , 其间夹杂的膨大细胞稀少至少量，居间膨大时近梭形(60 μm ~ 120 μm × 15 μm ~ 20 μm) ,偶尔顶生则为卵形(50 μm ~ 100 μm × 35 μm ~ 80 μm) ,无色透明，壁薄;托檐外表面的结构与托檐内部的相同，托檐内表面由胶化的菌丝组成，其直径 1 μm ~ 5 μm 。菌柄菌髓主要由纵向排列的棒状膨大细胞(200 μm ~ 400 μm×20 μm ~ 35 μm)构成，常单个顶生，其间夹杂的菌丝稀少(在菌髓内部)至较多(在菌柄表面)，直径 2 μm ~ 8 μm 。茵环由膨大细胞及稀疏排列的菌丝组成：菌丝丰富至大量，直径 2 μm ~ 7 μm,无色透明，壁薄;其间夹杂的膨大细胞丰富，棒状至宽棒状(30 μm ~ 70 μm × 10 μm ~ 25 μm) ,无色透明，壁薄，常单个顶生 。担子果各部位皆无锁状联合 。

　　7 鉴定

　　7 . 1 样品选取

　　在检验的样品中选取个体成熟 、外观比较完整的进行鉴定 。

　　7 . 2 宏观特征观察

　　用肉眼或放大镜观察样品的各宏观结构，包括菌盖(大小 、形状 、颜色 、边缘有无絮状物 、表面附属物 、是否粘或干)、菌肉(用刀片 切 开 观 察 其 颜 色 、是 否 有 伤 变 色 、厚 度 等)、菌 褶(颜 色 、密 度 、宽 度 、形状 、生长方式等)、菌环(颜色 、着生位置 、质地 、脱落难易等)、菌柄(大小 、形状 、颜色 、柄基 、表面附属物等)和菌托(颜色 、形状)等特征，并做详细记录 。颜色采用国际真菌学家通用的“Methuen Handbook of Colour”(即《Methuen 色谱手册》)进行描述 。

　　7 . 3 显微特征观察

　　7 . 3 . 1 制片：用锋利的刀片将样品组织块切成薄片，其中对菌褶进行横向切片，菌托进行纵向切片，菌环和菌盖表皮则进行径向切片 。将薄片置 于 氢 氧 化 钾 溶 液(或 梅 氏 液) 中 复 水 。 然 后 小 心 轻 按 组 织块，除去组织块中的空气，盖上盖玻片 。

　　7 . 3 . 2 显微观察：在显微镜的明视野下，观察在氢氧化钾溶液中样品的颜色 、菌丝和膨大细胞的排列方向 。然后，用镊子圆钝的后端轻轻敲击盖玻片，使菌丝和膨大细胞适度分散，进一步观察研究 。最后，用刚果红试剂染色，在明视野或相差下观察 、记录 。从样品的菌褶上切取细小组织块，用梅氏试剂检测其担孢子壁是否为淀粉质 。担孢子的大小在梅氏试剂或氢氧化钾溶液中测量，量其侧面观的长度和宽度，担孢子的侧生小尖不记入长度 。根据微观结构的大小，可在不同放大倍数的显微镜物镜下观察，在 100倍物镜观察时需在盖玻片上滴浸镜油 。

　　7 . 3 . 3 特征描述：担孢子的长或宽以(a)b ~ c(d) 表示，90%的测量数值落在 b ~ c 之间，a 、d 分别为测量数据中的最小值和最大值;担孢子的长宽比用 Q 表示，而 Q(黑体)为多个担孢子长宽比的算术平均值 。担孢子的形状术语(如球形 、近球形等)严格按 Bas(1969)界定的概念 。

　　7 . 4 判定

　　根据样品的宏观特征和显微特征的观察结果，参照致命鹅膏的形态描述，确定样品是否为致命鹅膏Amanitaexitialis。

　　3

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　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　致命鹅膏的共生植物

　　共生 植 物：壳 斗 科 Fagaceae 植 物，目 前 已 知 可 与 黧 蒴 栲 castanopsisfissa(Champ . ) Rehd. & Wils.(又称黧蒴 、大叶锥 、大叶栎)共生，见图 A. 1 。

　　图 A.1 黧蒴栲 castanopsisfissa形态图

　　4

　　GB/T 24316—2009

　　附 录 B

　　(规范性附录)

　　致命鹅膏子实体 、担子 、担孢子图

　　致命鹅膏子实体 、担子 、担孢子见图 B. 1 。

　　1 , 2 , 3 — 子实体;

　　4 — 担子;

　　5 — 担孢子 。

　　图 B.1 致命鹅膏子实体 、担子 、担孢子图

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　　附 录 犆

　　(资料性附录)

　　致命鹅膏近似种的分类检索

　　致命鹅膏 A.exitialis主要特点是担子果小型至中等，白色，菌环顶生至近顶生，菌托牢固，担子具2 小梗，担 孢 子 球 形 至 近 球 形，较 大，淀 粉 质，锁 状 联 合 缺 乏 。 在 我 国，致 命 鹅 膏 外 表 酷 似 欧 氏 鹅 膏A.oberwinklerana Zhu L. Yang & Yoshim. Doi 和黄盖鹅膏白色变种 A.subjunquillea var. alba Zhu L. Yang 。它们均为白色有毒的鹅膏菌种类 。它们之间的区别在于：后二者的绝大多数担子具 4 小梗 。此外，欧氏鹅膏菌环较低，菌托易破 、含有大量膨大细胞，担孢子较小 、椭圆形;而黄盖鹅膏白色变种的菌环着生位置较低，孢子明显较小 。

　　6

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　　参 考 文 献

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　　[5] 龚庆芳，魏宝阳，肖桂林，等 .RP-HPLC 法测定鹅膏菌中毒患者体液中的 α-amanitin[J] . 湖南师范大学自然科学学报，2005 (28) 2 : 67-69 .

　　[6] 杨祝良.中国真菌志 第二十七卷 鹅膏科[ M] . 北京：科学出版社，2005 : 177-180 .

　　[7] GB/T 12728—2006 食用菌术语