GB/T 23211-2008 牛奶和奶粉中493种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　ICS 67 . 050 X 04

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 2321 1—2008

　　牛奶和奶粉中 493 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　Determination of493 pesticidesand related chemicalsresidues

　　in milk and milk powder—LC-MS-MS method

　　2008-12-31 发布 2009-05-01 实施

　　中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 232 1 1—2008

　　目 次

　　前言 Ⅰ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 原理 1

　　4 试剂和材料 1

　　5 仪器 2

　　6 试样保存 2

　　7 测定步骤 2

　　8 结果计算 4

　　9 精密度 5

　　附录A(资料性附录) 493 种农药及相关化学品中 、英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和混合

　　标准溶液浓度 6

　　附录B(资料性附录) 493 种农药及相关化学品保留时间 、监测离子对 、源内碎裂电压和碰撞气

　　能量 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …附录 C(资料性附录) 493 种农药及相关化学品多反应监测( MRM)色谱图 … … … … … … … … …附录 D(资料性附录) 493 种农药及相关化学品精密度数据表 … … … … … … … … … … … … … … …附录 E(资料性附录) 493 种农药及相关化学品英文中文名称对照索引(按英文字母顺序) … … …

　　

　　22

　　39

　　65

　　80

　　GB/T 232 1 1—2008

　　前 言

　　本标准的附录 A 、附录 B、附录 C、附录 D 和附录 E 为资料性附录 。

　　本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归 口 。

　　本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 、山东农业大学 。

　　本标准主要起草人：庞国芳 、郑军红 、范春林 、王明林 、李岩 。

　　Ⅰ

　　GB/T 232 1 1—2008

　　牛奶和奶粉中 493 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

　　1 范围

　　本标准规定了牛奶和奶粉中 493 种农药及相关化学品(参见附录 A 和附录 E) 残留量液相色谱-串联质谱测定方法 。

　　本标准适用于牛奶中 482 种农药及相关化学品的定性鉴别，441 种农药及相关化学品的定量测定;适用于奶粉中 481 种农药及相关化学品的定性鉴别，427 种农药及相关化学品的定量测定 。

　　本标准定量测定的牛奶中 441 种农药及相关化学品的方法检出限为 0 . 01 μg/L ~ 2 . 41 mg/L(参见附录 A) ;定量测定的奶粉中 427 种农药及相关化学品的方法检出限为 0 . 04 μg/kg ~ 8 . 04 mg/kg(参见

　　附录 A) 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 。

　　GB/T 6379 . 1 测 量 方 法 与结 果 的 准 确度( 正 确度 与 精 密 度 ) 第 1 部 分：总 则 与 定 义(GB/T 6379 . 1—2004 , ISO 5725-1:1994 , IDT)

　　GB/T 6379 . 2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第 2 部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379 . 2—2004 , ISO 5725-2:1994 , IDT)

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682—2008 , ISO 3696:1987 , MOD)

　　3 原理

　　用乙腈提取试样，C18 固相萃取柱净化，用乙腈洗脱农药及相关化学品，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量 。

　　4 试剂和材料

　　水为 GB/T 6682 规定的一级水 。

　　4 . 1 乙腈：色谱纯 。

　　4 . 2 丙酮：色谱纯 。

　　4 . 3 异辛烷：色谱纯 。

　　4 . 4 甲苯：色谱纯 。

　　4 . 5 正己烷：色谱纯 。

　　4 . 6 甲醇：色谱纯 。

　　4 . 7 甲酸：优级纯 。

　　4 . 8 乙酸铵：优级纯 。

　　4 . 9 0 . 1%甲酸溶液 。

　　4 . 10 5 mmol/L 乙酸铵溶液 。

　　4 . 1 1 乙腈+水(3+2 , 体积比)。

　　1

　　GB/T 232 1 1—2008

　　4 . 12 氯化钠：分析纯 。

　　4 . 13 硫酸镁( MgSO4 ·7H2 O) ：分析纯 。

　　4 . 14 农药及相关化学品标准物质：纯度 ≥95% 。

　　4 . 15 农药及相关化学品标准溶液

　　4 . 15 . 1 标准储备溶液

　　分别称取 5 mg ~ 10 mg(精确至 0 . 1 mg)农药及相关化学品各标准物分别于 10 mL容量瓶中，根据标准物的溶解度选甲醇 、甲苯 、丙酮 、乙腈或异辛烷溶解并定容至刻度(溶剂选择参见附录 A) 。标准储备溶液避光 4 ℃保存，可使用一年 。

　　4 . 15 . 2 混合标准溶液(混合标准溶液 A 、B、C、D、E 、F 和 G)

　　按照农药及相关化学品的保留 时 间，将 493 种 农 药 及 相 关 化 学 品 分 成 A 、B、C、D、E 、F 和 G 七 个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度 。本标准对493 种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度参见附录 A 。

　　依据每种农药及相关化学品的分组 、混合标准溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于 100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度 。 混合标准溶液避光 4 ℃保存，可使用一个月 。

　　4 . 15 . 3 基质混合标准工作溶液

　　农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用样品空白溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液 A 、B、C、D、E 、F 和 G ,用于做标准工作曲线 。

　　基质混合标准工作溶液应现用现配 。

　　4 . 16 微孔过滤膜(尼龙)：13 mm×0 . 2 μm 。

　　4 . 17 ENVITM -18 固相萃取柱1) : 12 mL , 2 000 mg 或相当者 。

　　5 仪器

　　5 . 1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源 。

　　5 . 2 分析天平：感量 0 . 1 mg 和 0 . 01 g 。

　　5 . 3 具塞离心管：50 mL 。

　　5 . 4 均质器：最低转速不低于 12 000 r/min 。

　　5 . 5 离心机：最低转速不低于 4 200 r/min 。

　　5 . 6 鸡心瓶：100 mL 。

　　5 . 7 移液器：1 mL 和 10 mL 。

　　5 . 8 旋转蒸发器 。

　　5 . 9 氮气吹干仪 。

　　5 . 10 样品瓶：2 mL,带聚四氟乙烯旋盖 。

　　6 试样保存

　　奶粉试样密封常温保存;牛奶试样置于 0 ℃ ~ 4 ℃保存 。

　　7 测定步骤

　　7 . 1 提取

　　奶粉：称取 3 . 0 g奶粉(精确至 0 . 01 g)于 50 mL离心管中，加入 20 mL 乙腈以及 4 g 硫酸镁，用均

　　1) ENVITM -18 柱是 SUPELCO公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可 。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。

　　2

　　GB/T 232 1 1—2008

　　质器 15 000 r/min均质提取 1 min,在 4 200 r/min 条件下离心 5 min 。上清液收集于 100 mL 鸡心瓶中，残渣用 20 mL 乙 腈 重 复 提 取 一 次，离 心 后，合 并 两 次 提 取 液，将 提 取 液 于 40 ℃水 浴 旋 转 蒸 发 至1 mL左右，待净化 。

　　牛奶：量取 10 mL 牛奶于 50 mL离心管中，加入 20 mL 乙腈以及 4 g硫酸镁和 1 g 氯化钠 。 于振荡器上剧烈振荡 10 min,在 4 200 r/min 条 件 下 离 心 8 min , 收 集 上 清 液 于 100 mL 鸡 心 瓶 中，残 液 用20 mL乙腈重复提取一次，离心后，合并两次提取液，于 40 ℃水浴旋转蒸发至 1 mL左右，待净化 。

　　7 . 2 净化

　　用 10 mL 乙腈活化 ENVITM -18 固相萃取柱后，将浓缩的提取液转移至固相萃取柱中 。用 5 mL 乙腈洗涤样品瓶，将洗涤液 并 入 固 相 萃 取 柱 中，重 复 此 操 作 两 次 。 收 集 流 出 液 于 100 mL 鸡 心 瓶 中，用10 mL 乙腈洗脱固相萃取柱，合并流出液 。40 ℃水浴旋转蒸发至 0 . 5 mL 左右 。 于 45 ℃下氮气吹干，用 1 mL 乙腈+水(3+2 , 体积比)定容，经 0 . 2 μm微孔滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱仪分析 。

　　同时取不含农药及相关化学品的牛奶或奶粉样品，按 7 . 1 和 7 . 2 步骤制备样品空白提取液，用于配制基质混合标准工作溶液 。

　　7 . 3 液相色谱-串联质谱测定

　　7 . 3 . 1 A、B、C、D、E 和 F 组条件

　　a) 色谱柱：ZORBAX SB-C18 , 3 . 5 μm , 100 mm×2 . 1 mm(内径)或相当者;

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 1 ;

　　表 1 流动相及梯度洗脱条件

　　步骤

　　总时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(0 . 1%甲酸水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0

　　0 . 00

　　400

　　99 . 0

　　1 . 0

　　1

　　3 . 00

　　400

　　70 . 0

　　30 . 0

　　2

　　6 . 00

　　400

　　60 . 0

　　40 . 0

　　3

　　9 . 00

　　400

　　60 . 0

　　40 . 0

　　4

　　15 . 00

　　400

　　40 . 0

　　60 . 0

　　5

　　19 . 00

　　400

　　1 . 0

　　99 . 0

　　6

　　23 . 00

　　400

　　1 . 0

　　99 . 0

　　7

　　23 . 01

　　400

　　99 . 0

　　1 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：10 μL ;

　　e) 电离源模式：电喷雾离子化;

　　f) 电离源极性：正模式;

　　g) 雾化气：氮气;

　　h) 雾化气压力：0 . 28 MPa ;

　　i) 离子喷雾电压：4 000 V ;

　　j) 干燥气温度：350 ℃ ;

　　k) 干燥气流速：10 L/min ;

　　l) 监测离子对 、碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 2 G 组测定条件

　　a) 色谱柱：ZORBAX SB-C18 , 3 . 5 μm , 100 mm×2 . 1 mm(内径)或相当者;

　　b) 流动相及梯度洗脱条件见表 2 ;

　　3

　　GB/T 232 1 1—2008

　　表 2 流动相及梯度洗脱条件

　　步骤

　　总时间/min

　　流速/(μL/min)

　　流动相 A(5 mmol/L 乙酸铵水)/%

　　流动相 B(乙腈)/%

　　0

　　0 . 00

　　400

　　99 . 0

　　1 . 0

　　1

　　3 . 00

　　400

　　70 . 0

　　30 . 0

　　2

　　6 . 00

　　400

　　60 . 0

　　40 . 0

　　3

　　9 . 00

　　400

　　60 . 0

　　40 . 0

　　4

　　15 . 00

　　400

　　40 . 0

　　60 . 0

　　5

　　19 . 00

　　400

　　1 . 0

　　99 . 0

　　6

　　23 . 00

　　400

　　1 . 0

　　99 . 0

　　7

　　23 . 01

　　400

　　99 . 0

　　1 . 0

　　c) 柱温：40 ℃ ;

　　d) 进样量：10 μL ;

　　e) 电离源模式：电喷雾离子化;

　　f) 电离源极性：负模式;

　　g) 雾化气：氮气;

　　h) 雾化气压力：0 . 28 MPa ;

　　i) 离子喷雾电压：4 000 V ;

　　j) 干燥气温度：350 ℃ ;

　　k) 干燥气流速：10 L/min ;

　　l) 监测离子对 、碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录 B 。

　　7 . 3 . 3 定性测定

　　在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致(相对丰度 >50%,允许 ±20%偏 差;相 对 丰 度 >20% ~ 50%,允 许 ±25%偏 差;相 对 丰 度 >10% ~ 20%,允许 ±30%偏差;相对丰 度 ≤10%,允 许 ±50%偏 差)，则 可 判 断 样 品中 存 在 这 种 农 药 或 相 关 化学品 。

　　7 . 3 . 4 定量测定

　　本标准中液相色谱-串联质谱采用外标-校准曲线法定量测定 。 为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线，并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内 。493 种农药及相关化学品多反应监测( MRM)色谱图参见附录 C 。

　　7 . 4 平行试验

　　按以上步骤对同一试样进行平行试验 。

　　7 . 5 空白试验

　　除不称取试样外，均按上述步骤进行 。

　　8 结果计算

　　液相色谱-串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按式(1)计算：

　　xi = ci ……………………………( 1 )

　　式中：

　　xi— 试样 中 被 测 组 分 残 留 量，单 位 为 毫 克 每 千 克 或 毫 克 每 升(奶 粉 以 mg/kg 计，牛 奶 以

　　4

　　GB/T 232 1 1—2008

　　mg/L计);

　　ci— 从标准曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升(μg/mL) ;

　　V— 样品溶液定容体积，单位为毫升(mL) ;

　　m— 样品溶液所代表试样的质量或体积，单位为克或毫升(奶粉以 g计，牛奶以 mL计)。

　　计算结果应扣除空白值 。

　　9 精密度

　　本标准精密度数据是按照 GB/T 6379 . 1 和 GB/T 6379 . 2 的规定确定的，获得重复性和再现性的值是以 95%的可信度来计算 。本标准方法的精密度数据参见附录 D 。

　　5

　　GB/T 232 1 1—2008

　　附 录 A

　　(资料性附录)

　　493 种农药及相关化学品中 、英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和混合标准溶液浓度

　　493 种 农 药 及 相 关 化 学 品 中 、英 文 名 称 、方 法 检 出限 、分 组 、溶 剂 选 择 和 混 合 标 准 溶 液 浓 度 见表 A. 1 。

　　表 A.1 493 种农药及相关化学品中 、英文名称 、方法检出限 、分组 、溶剂选择和混合标准溶液浓度

　　序号

　　中文名称

　　英文名称

　　牛奶检出限/ (μg/L)

　　奶粉检出限/ (μg/kg)

　　溶剂

　　混合标准溶液浓度/ (mg/L)

　　A组

　　1

　　苯胺灵

　　propham

　　27 . 50

　　91 . 67

　　甲苯

　　11 . 00

　　2

　　异丙威

　　isoprocarb

　　0 . 58

　　1 . 92

　　甲醇

　　0 . 23

　　3

　　3 , 4 , 5-混杀威

　　3 , 4 , 5-trimethacarb

　　0 . 08

　　0 . 25

　　甲醇

　　0 . 03

　　4

　　环莠隆

　　cycluron

　　0 . 05

　　0 . 17

　　甲醇

　　0 . 02

　　5

　　甲萘威

　　carbaryl

　　2 . 58

　　8 . 58

　　甲醇

　　1 . 03

　　6

　　毒草胺

　　propachlor

　　0 . 08

　　0 . 25

　　甲醇

　　0 . 03

　　7

　　吡咪唑

　　rabenzazole

　　0 . 33

　　1 . 08

　　甲醇

　　0 . 13

　　8

　　西草净

　　simetryn

　　0 . 03

　　0 . 08

　　甲醇

　　0 . 01

　　9

　　绿谷隆

　　monolinuron

　　0 . 90

　　3 . 00

　　甲醇

　　0 . 36

　　10

　　速灭磷

　　mevinphos

　　0 . 40

　　1 . 33

　　甲苯

　　0 . 16

　　11

　　叠氮津

　　aziprotryne

　　0 . 35

　　1 . 17

　　甲醇

　　0 . 14

　　12

　　密草通

　　secbumeton

　　0 . 03

　　0 . 08

　　甲醇

　　0 . 01

　　13

　　嘧菌磺胺

　　cyprodinil

　　0 . 18

　　0 . 58

　　甲醇

　　0 . 07

　　14

　　播土隆

　　buturon

　　2 . 25

　　7 . 50

　　甲醇

　　0 . 90

　　15

　　双酰草胺

　　carbetamide

　　0 . 90

　　3 . 00

　　甲醇

　　0 . 36

　　16

　　抗蚜威

　　pirimicarb

　　0 . 05

　　0 . 17

　　甲醇

　　0 . 02

　　17

　　异 噁草松

　　clomazone dimethazone

　　0 . 10

　　0 . 33

　　甲醇

　　0 . 04

　　18

　　扑草净a

　　prometryne

　　0 . 05

　　0 . 17

　　甲醇

　　0 . 02

　　19

　　对氧磷

　　paraoxon methyl

　　0 . 20

　　0 . 67

　　甲醇

　　0 . 08

　　20

　　4 , 4 ′-二氯二苯甲酮ab

　　4 , 4 ′-dichlorobenzophenone

　　3 . 40

　　11 . 33

　　甲醇

　　1 . 36

　　21

　　噻虫啉

　　thiacloprid

　　0 . 10

　　0 . 33

　　甲醇

　　0 . 04

　　22

　　吡虫啉

　　imidacloprid

　　5 . 50

　　18 . 33

　　甲醇

　　2 . 20

　　23

　　磺噻隆