GB/T 44364-2024 牙膏中丙烯酰胺的测定 高效液相色谱串联质谱法

　　ICS 71.100.40 CCS Y 43

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 44364—2024

　　牙膏中丙烯酰胺的测定 高效液相色谱

　　串联质谱法

　　Determination of acrylamide in toothpaste—

　　High performance liquid chromatography tandem mass spectrometry

　　2024-08-23 发布 2025-03-01 实施

　　发

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　布

　　GB/T 44364—2024

　　目 次

　　前言 Ⅲ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 术语和定义 1

　　4 原理 1

　　5 试剂和材料 1

　　6 仪器设备 2

　　7 试验步骤 2

　　7.1 试样溶液的制备 2

　　7.2 测定 2

　　7.3 标准工作曲线绘制 3

　　7.4 试样测定 3

　　7.5 空白试验 4

　　8 结果计算 4

　　9 回收率 4

　　10 精密度 4

　　11 检测限和定量限 4

　　附录 A (资料性) 丙烯酰胺标准物质/标准样品及内标信息 5

　　附录 B (资料性) 丙烯酰胺及其内标标准溶液的多反应监测色谱图 6

　　Ⅰ

　　GB/T 44364—2024

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分 ：标准化文件的结构和起草规则》 的规定起草。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

　　本文件由中国轻工业联合会提出。

　　本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会 (SAC/TC 492)归口。

　　本文件起草单位： 苏州世谱检测技术有限公司、苏科世谱生物技术(苏州) 有限公司、苏州质量检测科学研究院、苏州市科耐瑞检测技术有限公司、广州舒客实业有限公司、广州质量监督检测研究院、黑龙江省轻工科学研究院、无限极( 中国 )有限公司、福建爱洁丽日化有限公司、柳州两面针股份有限公司 、重庆登康口腔护理用品股份有限公司 、浙江方圆检测集团股份有限公司 、河北省食品检验研究院 、江苏省产品质量监督检验研究院 、江苏省食品药品监督检验研究院 、完美(广东) 日用品有限公司、清华大学、深圳大学、海南大学、苏州大学、常州大学、常州市食品药品纤维质量监督检验中心、苏州市药品检验检测研究中心、山东华素健康护理品有限公司。

　　本文件主要起草人： 张岩 、卢剑 、方方 、何霜 、朱丹丹 、郑卫 、结莉 、李建祥 、刘斌 、秦天依、叶竹洪 、刘文玉 、 陈敏珊 、高艳 、蔡丽萍 、胡永志 、张环 、杨铭 、 肖俊芳 、代丹 、 陈晓珍 、郭新东、王怡 、黄金凤 、张迎阳 、黄志宁 、宋淑文 、聂炎炎 、卢应红 、姜雷 、高龙 、顾盼 、刘群林 、高红影、朱钇蓉、唐文金。

　　Ⅲ

　　GB/T 44364—2024

　　牙膏中丙烯酰胺的测定 高效液相色谱

　　串联质谱法

　　警示─使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关规定的条件。

　　1 范围

　　本文件描述了牙膏中丙烯酰胺的高效液相色谱串联质谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、试验步骤、结果计算、 回收率和精密度、允许差等内容。

　　本文件适用于牙膏中丙烯酰胺的测定。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义。

　　4 原理

　　牙膏中丙烯酰胺经水提取、正己烷净化后，采用高效液相色谱串联质谱仪多反应监测模式检测，以保留时间和特征碎片离子丰度比定性，内标法定量。

　　5 试剂和材料

　　5.1 除另有说明，所用试剂均为色谱纯，水为符合 GB/T 6682 要求的一级水。

　　5.2 乙腈。

　　5.3 正己烷。

　　5.4 甲酸。

　　5.5 0.1%(体积分数) 甲酸溶液 ：取 1 mL 甲酸(5.4) ，用水稀释至 1 L，混合均匀 。

　　5.6 标准物质/标准样品： 丙烯酰胺标准物质/标准样品的英文名称、CAS 号、分子式、相对分子质量和化学结构式见附录 A 中表 A.1，纯度不小于98%。

　　5.7 同位素内标： 13C3﹘丙烯酰胺的英文名称、CAS 号、分子式、相对分子质量和化学结构式见表A.1，纯度不小于 98%。

　　5.8 标准储备液： 准确称取丙烯酰胺标准物质/标准样品(5.6)10 mg(精确至0.000 1 g)于 10 mL 容量瓶中，用乙腈(5.2) 溶解并稀释至刻度，即得质量浓度为 1 000 µg/mL 的标准储备液 。于 2 ℃~8 ℃避光保存，可保存 12 个月。

　　1

　　GB/T 44364—2024

　　5.9 标准中间液： 准确移取 0.1 mL 标准储备液(5.8) 于 50 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，即得质量浓度为 2.0 µg/mL 的标准中间液。于 2 ℃~8 ℃ 避光保存。

　　5.10 内标储备液： 准确称取13C3-丙烯酰胺内标 5 mg(5.7) 于 10 mL 容量瓶中，用乙腈(5.2) 溶解并稀释至刻度，即得质量浓度为 500 µg/mL 的内标储备液。于 2 ℃~8 ℃ 避光保存，可保存 12 个月。

　　5.11 内标工作液： 准确移取0.1 mL 内标储备液(5.10) 于 50 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，即得质量浓度为 1.0 µg/mL 的内标工作液。于 2 ℃~8 ℃ 避光保存。

　　5.12 微孔滤膜 ：孔径 0.22 µm，材质为尼龙 66。

　　6 仪器设备

　　6.1 高效液相色谱串联三重四极杆质谱仪 ：配电喷雾离子源 (ESI)。

　　6.2 电子天平 ：感量 0.001 g 和 0.000 1 g。

　　6.3 漩涡振荡器 ：最大转速不低于 2 500 r/min。。

　　6.4 超声波清洗仪 ：工作频率不低于40 kHz。

　　6.5 离心机 ：最高转速不低于4 000 r/min。

　　6.6 移液管或移液器：1 mL、10 mL。

　　7 试验步骤

　　7.1 试样溶液的制备

　　称取 1 g(精确至 0.001 g) 试样，置于 50 mL 具塞离心管中，准确加入 0.2 mL 内标工作液(5.11) ，涡旋混合均匀 。准确加入 10 mL 水，具塞后涡旋混合混匀，超声5 min。然后加入 5 mL 正己烷(5.3) ，涡旋 1 min ，于 4 000 r/min 离心 5 min。取下层水溶液，经微孔滤膜(5.12)过滤后待测。

　　7.2 测定

　　7.2.1 高效液相色谱参考条件

　　高效液相色谱测定参考条件如下：

　　a) 色谱柱规格： C18色谱柱， 1.8 μm ，100 mm × 2.1 mm ，或性能相当者;

　　b) 流动相： 乙腈(5.2) 和0.1%甲酸溶液(5.5) ，梯度洗脱程序见表1;

　　c) 流速：0.3 mL/min;

　　d) 柱温：30 ℃;

　　e) 进样量：5 μL。

　　表 1 流动相梯度洗脱条件

　　时间/min

　　乙腈/%

　　0.1%甲酸溶液/%

　　0

　　5

　　95

　　2

　　5

　　95

　　3

　　80

　　20

　　4.5

　　80

　　20

　　4.6

　　5

　　95

　　6

　　5

　　95

　　2

　　GB/T 44364—2024

　　7.2.2 质谱参考条件

　　质谱参考条件如下：

　　a) 离子源： 电喷雾离子源 (ESI);

　　b) 扫描方式 ：正离子扫描;

　　c) 喷雾电压：5 500 V;

　　d) 离子源温度：400 ℃;

　　e) 载气： 高纯氮气，纯度≥99.999%;

　　f) 雾化气压力：0.345 MPa;

　　g) 辅助气压力：0.414 MPa;

　　h) 气帘气压力：0.138 MPa;

　　i) 检测方式： 多反应监测 (MRM);

　　j) 去簇电压：80 V; 碰撞室出口电压：10 V;

　　k) 化合物母离子、子离子及碰撞能量见表2。

　　表 2 丙烯酰胺及其内标的质谱参数

　　化合物

　　母离子( m/≈)

　　子离子( m/≈)

　　碰撞能量/eV

　　丙烯酰胺

　　71.9

　　55.0 a ，44.1

　　16 ，26

　　13C3﹘丙烯酰胺

　　74.9

　　58.0

　　16

　　a 定量离子 。

　　7.3 标准工作曲线绘制

　　分别吸取适量标准中间液(5 . 9)0 . 015 mL、0 . 025 mL、0 . 050 mL、0 . 100 mL、0 . 250 mL 和0.500 mL，以及 0.20 mL 内标工作液(5 . 11) ，用水稀释至 10mL，得到系列标准工作溶液(现配现用)。其中丙烯酰胺的质量浓度分别为 0.003 µg/mL、0.005 µg/mL、0.010 µg/mL、0.020 µg/mL、 0.050 µg/mL 和 0.100 µg/mL，内标浓度为0.020 µg/mL。 将系列标准工作溶液按高效液相色谱和质谱参考工作条件(7.2.1 和 7.2.2) 进行测定，以目标物定量离子色谱峰的峰面积与内标离子峰面积比值为纵坐标，与其对应的溶液浓度比值为横坐标作图，绘制标准工作曲线 。丙烯酰胺及其内标标准溶液的多反应监测色谱图见附录 B 图 B.1。

　　7.4 试样测定

　　按液相色谱和质谱参考条件(7.2.1 和 7.2.2) 测定试样溶液(7.1)。 如果试样中待测物质的色谱峰保留时间与标准溶液的一致，并且在扣除背景后的试样质谱图中，所选择的离子均出现，而且选择离子的相对丰度与标准物质的进行比较，相对偏差不超过表 3 规定的范围，可判定为试样中含有对应的待测物 。记录目标化合物定量离子和内标化合物色谱峰的峰面积，以内标法定量 。试样溶液中被测物的响应值均应在标准曲线的线性范围之内，超出线性范围的试样溶液可用水稀释后进行测定。

　　3

　　GB/T 44364—2024

　　表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

　　相对离子丰度( k) /%

　　k ≥ 50

　　20 ≤k< 50

　　10 ≤k< 20

　　k <10

　　最大允许偏差 /%

　　± 20

　　± 25

　　± 30

　　± 50

　　7.5 空白试验

　　除不称取试样外，均按 7.1～7.2 步骤进行测定。

　　8 结果计算

　　试样中丙烯酰胺含量按公式(1) 计算：

　　Xi k …………………………(1)

　　式中：

　　Xi ─试样中丙烯酰胺的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

　　ρi ─从标准曲线得到的试样溶液中丙烯酰胺的质量浓度，单位为微克每毫升 (μg/mL);

　　ρ0 ─从标准曲线得到的空白样品溶液中丙烯酰胺的质量浓度，单位为微克每毫升 (μg/mL);

　　V ─加入水的体积，单位为毫升(mL);

　　1 000 ─换算系数;

　　m ─试样的质量，单位为克(g);

　　k ─超线性范围的稀释倍数。

　　计算结果以两次平行测定结果的算术平均值表示，保留三位有效数字。

　　9 回收率

　　在添加浓度为 0.03 mg/kg～0.5 mg/kg 范围内，回收率在 80%～110%之间。

　　10 精密度

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 15%。

　　11 检测限和定量限

　　按本文件规定条件下，丙烯酰胺的检出限为0.01 mg/kg、定量限为0.03 mg/kg。

　　4

　　GB/T 44364—2024

　　附 录 A

　　(资料性)

　　丙烯酰胺标准物质/标准样品及内标信息

　　丙烯酰胺标准物质/标准样品及内标的中文名称、英文名称、CAS 号、分子式、相对分子质量及化学结构式见表 A.1。

　　表 A.1 丙烯酰胺标准物质/标准样品及内标信息

　　序号

　　中文名称

　　英文名称

　　CAS号

　　分子式

　　相对分子质量

　　化学结构式

　　1

　　丙烯酰胺

　　Acrylamide

　　79﹘06﹘1

　　C3H5NO

　　71.08

　　2

　　13C3﹘丙烯酰胺

　　13C3﹘Acrylamide

　　287399﹘26﹘2

　　13C3H5NO

　　74.09

　　5

　　GB/T 44364—2024

　　附 录 B

　　(资料性)

　　丙烯酰胺及其内标标准溶液的多反应监测色谱图

　　丙烯酰胺及其内标标准溶液的多反应监测色谱图见图B.1。

　　图 B.1 丙烯酰胺及其内标标准溶液的多反应监测色谱图

　　6