GB/T 46258-2025 化妆品中乌洛托品的测定 液相色谱-串联质谱法

　　ICS 71. 100.70 CCS Y 42

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 46258—2025

　　化妆品中乌洛托品的测定

　　液相色谱-串联质谱法

　　Determination ofhexamethylenetetraminein cosmetics—

　　Liquid chromatography-tandem massspectrometry

　　2025-08-29发布 2026-03-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 46258—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由中国轻工业联合会提出 。

　　本文件由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归 口 。

　　本文件起草单位 :苏州世谱检测技术有限公司 、苏州市科耐瑞检测技术有限公司 、苏科世谱生物技术(苏州)有限公司 、苏州质量检测科学研究院 、完美(广东) 日用品有限公司 、广州质量监督检测研究院 、欧诗漫生物股份有限公司 、广州麻尚会生物科技有限公司 、珀莱雅化妆品股份有限公司 、上海香料研究所有限公司 、江苏省产品质量监督检验研究院 、江苏省药品监督检验研究院 、河北省食品检验研究院 、江苏省计量科学研究院 、广州华鑫检测技术有限公司 、苏州市药品检验检测研究中心 、苏州工业园区药品管理中心(江苏省药品监督管理局审评核查苏州分中心) 、吉林化工学院 、海南大学 、苏州海关综合技术中心 、苏州市吴江区食品药品监督所 、中国药科大学 、苏州大学 、清华大学 、上海其然生物科技有限公司 、上海晓创检测技术有限公司 。

　　本文件主要起草人 :廖华勇 、褚堃琦 、张科峰 、潘凯 、卢易 、姜雷 、徐振东 、何霜 、卢剑 、黄瑞娟 、杨安全 、张岩 、代丹 、王 婷 、结 莉 、叶 竹 洪 、陈 来 成 、方 方 、朱 丹 丹 、张 丽 华 、杨 斌 、李 建 祥 、刘 丹 阳 、孙 淑 蓉 、高 龙 、郑锦荣 、都新丰 、康薇 、赵维俊 、王怡 、王洋 、寻知庆 、黄金凤 、郭新东 、顾盼 、卢应红 、刘群林 、邵平 、袁旻嘉 、李琦 、王莹 、吴梅芳 。

　　Ⅰ

　　GB/T 46258—2025

　　引 言

　　本文件的被测物质是我国《化妆品安全技术规范(2015年版)》规定的禁用原料 。

　　禁用原料是指不得作为化妆品原料使用的物质 。《化妆品安全技术规范(2015年版)》规定 “若技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时 , 国家有限量规定的应符合其规定 ;未规定限量的 ,应进行安全性风险评估 ,确保在正常 、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害 。”

　　目前我国尚未规定该物质的限量值 ,本文件的制定 ,仅对化妆品中测定该物质提供检测方法 。

　　Ⅱ

　　GB/T 46258—2025

　　化妆品中乌洛托品的测定

　　液相色谱-串联质谱法

　　警示— 使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验 。本文件并未指出所有可能的安全问题 。使用者有责任采取适当的安全和健康措施 ,并保证符合国家有关规定的条件。

　　1 范围

　　本文件描述了化妆品中乌洛托品的液相色谱-串联质谱测定方法的原理 、试剂和材料 、仪器设备 、试样制备和试验步骤 、试验数据处理 、回收率 、精密度和试验报告等内容 。

　　本文件适用于水剂类 、膏霜类和乳液类化妆品中乌洛托品的测定 。

　　本文件方法检出限为 0. 10 mg/kg,定量限为 0. 20 mg/kg。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义 。

　　4 原理

　　试样经 20%乙腈溶液涡旋振荡 ,超声提取 ,正己烷液液萃取净化 ,离心 、过滤后 ,得到 目标物待测溶液 。将目标物待测溶液注入液相色谱-串联质谱仪 ,采用液相色谱分离 ,质谱检测器检测 ,保留时间和质谱的相对离子丰度定性 , 内标法定量 。

　　5 试剂和材料

　　除非另有规定 ,仅使用色谱纯试剂 。

　　5. 1 水 :GB/T 6682,一级 。

　　5.2 乙腈 。

　　5.3 乙酸铵 。

　　5.4 正己烷 。

　　5.5 20%乙腈溶液 :取 20 mL乙腈(5. 2) ,用水(5. 1)稀释至 100 mL,混匀 。

　　5.7 乌洛托品标准样品/标 准 物 质 : 纯 度 不 小 于 99% , 标 准 样 品/标 准 物 质 的 英 文 名 称 、CAS号 、分 子

　　5.6 乙酸铵溶液(c=0. 005 mol/L) :称取 0. 3854 g 乙酸铵(5. 3) ,用水(5. 1)溶解并稀释至 1 L,混匀 。

　　1

　　GB/T 46258—2025

　　式 、相对分子质量及化学结构式见附录 A 中表 A. 1。

　　5.8 乌洛托品内标(乌洛托品-D12) :纯度不小于 99% ,乌洛托品-D12 的英文名称 、CAS号 、分子式 、相对分子质量及化学结构式见表 A. 1。

　　置于 10 mL棕色容量瓶中 ,用乙腈(5. 2)溶解并定容至刻度 , 即得质量浓度为 1 000 μg/mL 的标准储备

　　5.9 标准储备液(ρ=1000μg/mL) :准确称取 0.01g乌洛托品标准样品/标准物质(5.7)(精确至 0.000 1 g)

　　液 ,于 -20℃或以下避光保存 ,可保存 1个月 。

　　10mL棕色容量瓶中 ,用乙腈(5. 2)溶解并定容至刻度 , 即得质量浓度为 1000μg/mL 的内标储备液 ,于

　　5. 10 内标中间液(ρ= 5. 0 μg/mL) :准确称取 0. 01 g乌洛托品内标物质(5. 8)(精确至 0. 000 1 g) ,置于

　　-20 ℃或以下避光保存 ,可保存 1个月 。准确移取内标储备液 0. 050 mL,置于 10 mL棕色容量瓶中 ,用乙腈(5. 2)定容至刻度 , 即得质量浓度为 5. 0 μg/mL 的内标中间液 ,现配现用 。

　　5. 11 滤膜 :孔径 0. 22 μm ,材质为聚四氟乙烯(PTFE) 。

　　6 仪器设备

　　6. 1 液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS) :配有电喷雾离子源 。

　　6.2 分析天平 :精确度为 0. 001 g 和 0. 000 01 g。

　　6.3 漩涡振荡器 。

　　6.4 超声波清洗仪 :工作频率不低于 40 kHz。

　　6.5 离心机 :最高转速不低于 4 000 r/min。

　　7 试样制备和试验步骤

　　7. 1 试样制备

　　取样前应将试样充分混匀 。水剂类化妆品将试样摇匀后取样 ;膏霜类 、乳液类化妆品将试样挤出 、混匀后取样 。

　　称取 0. 5 g(精 确 至 0. 00 1 g) 试 样 , 置 于 25 mL 具 塞 比 色 管 中 , 准 确 加 入 0. 400 mL 内 标 中 间 液(5. 10) ,涡旋混合均匀 。准确加入 8 mL20%乙腈(5. 5) ,具塞后涡旋混合均匀 ,超声 10min,冷却至室温后定容至 10. 0 mL(V1 ) 。加入 5 mL正己烷(5. 4) ,涡旋混匀 ,于 4000 r/min离心 5 min,取 1. 0 mL(V2 )下层清液用 20%乙腈(5. 5)稀释至 10. 0 mL(V3 ) ,经微孔滤膜过滤 ,滤液作为试样溶液备用 。

　　7.2 试验步骤

　　7.2. 1 液相色谱参考工作条件

　　液相色谱参考工作条件如下 :

　　a) 色谱柱 :低密度 C18键 合 的 硅 胶 反 向 色 谱 柱 , 1. 8 μm(粒 径) , 100 mm × 2. 1 mm (内 径) , 或 相当者 ;

　　c) 流速 :0. 3 mL/min;

　　b) 流动相 :A相为乙腈(5. 2) ,B相为乙酸铵溶液(c=0. 005 mol/L)(5. 6) ,梯度洗脱条件见表 1;

　　d) 柱温 :30 ℃ ;

　　e) 进样量 :5 μL。

　　2

　　GB/T 46258—2025

　　表 1 液相色谱梯度洗脱条件

　　时间min

　　A

　　%

　　B

　　%

　　0. 0

　　5

　　95

　　1. 0

　　5

　　95

　　3. 5

　　95

　　5

　　6. 0

　　95

　　5

　　6. 1

　　5

　　95

　　8. 0

　　5

　　95

　　7.2.2 质谱参考工作条件

　　质谱参考工作条件如下 :

　　a) 离子源 : 电喷雾离子源(ESI) ;

　　b) 扫描方式 :正离子扫描 ;

　　c) 喷雾电压 :5 500V;

　　d) 离子源温度 :400 ℃ ;

　　e) 雾化气压力 :0. 276MPa;

　　f) 辅助气压力 :0. 414MPa;

　　g) 气帘气压力 :0. 276MPa;

　　h) 检测方式 :多反应监测(MRM) ;

　　i) 保留时间 、母离子 、子离子 、去簇电压 、碰撞室出口电压及碰撞电压见表 2。表 2 乌洛托品及其内标的质谱参数

　　化合物

　　保留时间min

　　母离子m/≈

　　子离子m/≈

　　去簇电压V

　　碰撞室出 口 电压

　　V

　　碰撞电压V

　　乌洛托品

　　1. 33

　　141. 0

　　112. 2a ,98. 2

　　80

　　10. 0

　　20. 0,18. 0

　　乌洛托品-D12

　　1. 33

　　153. 1

　　122. 2a ,94. 2

　　80

　　10. 0

　　20. 0,20. 0

　　a 定量离子 。

　　7.2.3 标准工作曲线绘制

　　乙腈(5. 2)定容至刻度 , 即得质量浓度为 1. 0 μg/mL 的标准中间液 ,现用现配 。

　　标准中间液(ρ= 1. 0 μg/mL) :准确移取标准储备液(5. 9)0. 025 mL,置于 25 mL棕色容量瓶中 ,用

　　系列混合标准工作溶液 :分别移取 0. 010 mL、0. 020 mL、0. 050 mL、0. 100 mL、0. 200 mL和 0. 500 mL标准中间液(1. 0 μg/mL)于 10 mL容量瓶中 ,分别加入内标中间液(5. 10)0. 040 mL, 用 20%乙腈溶液(5. 5)定容至刻度 ,摇匀 ,得到质量浓度为 1. 00 μg/L、2. 00 μg/L、5. 00 μg/L、10. 0 μg/L、20. 0 μg/L和50. 0 μg/L, 内标浓度为 20. 0 μg/L的系列混合标准工作溶液 ,现配现用 。

　　将系列混合标准工作溶液按液相色谱和质谱参考工作条件(7. 2. 1 和 7. 2. 2) 进行测定 , 以 目标物定量离子色谱峰的峰面积与内标离子峰面积比值为纵坐标 ,与其对应的标准溶液浓度比值为横坐标作图 ,

　　3

　　GB/T 46258—2025

　　绘制标准工作曲线 。

　　乌洛托品标准溶液和内标溶液的多反应监测色谱图见附录 B 中图 B. 1。

　　7.2.4 试样测定

　　按液相色谱和质谱参考工作条件(7. 2. 1 和 7. 2. 2)测定试样溶液(7. 1) ,如果检出色谱峰的保留时间与标准样品/标准物质的一致(偏差在 ±2. 5%之间) ,且在扣除背景后的试样质谱图中 ,定性离子和定量离子均出现 ,且其相对离子丰度与浓度相近的标准样品/标准物质的进行比较 ,相对偏差不超过表 3 规定的范围 ,可判定为试样中含有乌洛托品 。记录定量离子色谱峰的峰面积 , 以内标法定量 。试样溶液中乌洛托品的响应值应在标准曲线的线性范围之内 ,超出线性范围的试样溶液可用 20%乙腈溶液(5. 5)稀释后进行测定 。

　　表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

　　相对离子丰度 K/%

　　K>50

　　20

　　10

　　K≤10

　　最大允许偏差/%

　　±20

　　±25

　　±30

　　±50

　　7.3 空白试验

　　除不称取试样外 ,均按 7. 1~ 7. 2 的步骤进行测定 。

　　8 试验数据处理

　　试样中乌洛托品含量按公式(1)计算 :

　　w k … … … … … … … … … …

　　式中 :

　　w — 试样中乌洛托品的含量 ,单位为毫克每千克(mg/kg) ;

　　ρ — 从标准曲线得到的试样溶液中乌洛托品的质量浓 度(应 扣 除 空 白 值) , 单 位 为 微 克 每 升(μg/L) ;

　　V1 — 定容的体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　V3 — 取下层清液稀释后的体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　m — 试样质量 ,单位为克(g) ;

　　V2 — 移取下层清液的体积 ,单位为毫升(mL) ;

　　1 000— 单位换算系数 ;

　　k — 超线性范围的稀释倍数 。

　　计算结果保留三位有效数字 。

　　9 回收率

　　在添加浓度为 0. 20 mg/kg~ 2. 00 mg/kg范围内 , 回收率在 80% ~ 115%之间 。

　　10 精密度

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 10% 。

　　4

　　GB/T 46258—2025

　　11 试验报告

　　试验报告至少应给出以下几个方面的内容 :

　　a) 试验对象 ;

　　b) 本文件的编号 ;

　　c) 试验结果 ;

　　d) 观察到的异常现象 ;

　　e) 试验日期 。

　　5

　　GB/T 46258—2025

　　附 录 A

　　(资料性)

　　乌洛托品标准样品/标准物质和内标的信息

　　乌洛托品标准样品/标准物质和内标的中文名称 、英文名称 、CAS号 、分子式 、相对分子质量及化学结构式见表 A. 1。

　　表 A. 1 乌洛托品标准样品/标准物质和内标的信息

　　中文名称

　　英文名称

　　CAS号

　　分子式

　　相对分子质量

　　化学结构式

　　乌洛托品

　　Methenamine

　　100-97-0

　　C6 H12N4

　　140. 19

　　乌洛托品-D12

　　Methenamine-D12

　　23304-08-7

　　C6D12N4

　　152. 26

　　6

　　GB/T 46258—2025

　　附 录 B

　　(资料性)

　　乌洛托品标准溶液和内标溶液的多反应监测色谱图

　　乌洛托品标准溶液和内标溶液的多反应监测色谱图见图 B. 1。

　　7

　　乌洛托品 : 141. 0/112.2

　　a)

　　

　　乌洛托品 : 141. 0/98.2

　　b)

　　乌洛托品-D12 : 153. 1/122.2

　　c)

　　

　　乌洛托品-D12 : 153. 1/94.2

　　d)

　　图 B. 1 乌洛托品标准溶液(20. 0 μg/L)和内标溶液(20. 0 μg/L)的多反应监测色谱图