GB/T 31270.9-2025 化学农药环境安全评价试验准则 第9部分：鸟类短期饲喂毒性试验

　　ICS 65. 100 CCS B 15

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 31270.9—2025部分代替 GB/T31270.9—2014

　　化学农药环境安全评价试验准则

　　第 9 部分:鸟类短期饲喂毒性试验

　　Testguidelineson environmentalsafety assessmentforchemicalpesticides—

　　Part9:Avian short-term dietarytoxicitytest

　　2025-10-05发布 2026-05-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 31270.9—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　本文件是 GB/T 31270《化学农药环境安全评价试验准则》的第 9 部分 。 GB/T 31270 已经发布了以下部分 :

　　— 第 1部分 :土壤降解试验 ;

　　— 第 2部分 :水解试验 ;

　　— 第 3部分 :光解试验 ;

　　— 第 4部分 :土壤吸附/解吸试验 ;

　　— 第 5部分 :土壤淋溶试验 ;

　　— 第 6部分 :挥发性试验 ;

　　— 第 7部分 :生物富集试验 ;

　　— 第 8部分 :水-沉积物系统代谢试验 ;

　　— 第 9部分 :鸟类短期饲喂毒性试验 ;

　　— 第 10部分 :蜜蜂急性毒性试验 ;

　　— 第 11部分 :家蚕急性毒性试验 ;

　　— 第 12部分 :鱼类急性毒性试验 ;

　　— 第 13部分 :溞类急性活动抑制试验 ;

　　— 第 14部分 :藻类生长抑制试验 ;

　　— 第 15部分 :蚯蚓急性毒性试验 ;

　　— 第 16部分 :土壤微生物毒性试验 ;

　　— 第 17部分 :天敌赤眼蜂急性毒性试验 ;

　　— 第 18部分 :天敌两栖类急性毒性试验 ;

　　— 第 19部分 :非靶标植物影响试验 ;

　　— 第 20部分 :家畜短期饲喂毒性试验 ;

　　— 第 21部分 :大型甲壳类生物毒性试验 ;

　　— 第 22部分 :土壤表面光解试验 ;

　　— 第 23部分 :鸟类急性经口毒性试验 。

　　本文件部分代替 GB/T 31270. 9—2014《化学农药环境安全评价试验准则 第 9 部分 : 鸟类急性毒性试验》,与 GB/T 31270. 9—2014中的鸟类短期饲喂毒性试验部分相比 , 除结构调整和编辑性改动外 ,主要技术变化如下 :

　　a) 更改了范围(见第 1 章 ,2014年版的第 1 章) ;

　　b) 删除了 “半致死剂量”“半致死浓度”“供试物”“化学农药”“原药”“制剂”“有效成分 ”的术语和定义(见 2014年版的 2. 1、2. 2、2. 3、2. 4、2. 5、2. 6、2. 7) ;

　　c) 增加了试验条件 ,细化开展试验的光照 、温湿度等要求(见第 5 章 ,2014年版的 4. 1. 4) ;

　　d) 增加了试剂和材料 ,列出了试验所需的试剂 ,细化了供试生物相关要求(见第 6章) ;

　　e) 增加了供试生物中 日本鹌鹑的培养方法(见 6. 2) ;

　　f) 更改了对被试物的要求(见第 8章 ,2014年版的 4. 1. 2) ;

　　g) 删除了试验步骤中急性经口毒性试验的相关操作(见 2014年版的 4. 2. 1) ;

　　Ⅰ

　　GB/T 31270.9—2025

　　h) 增加了正式试验中试验设计、染毒饲料制备、给药与观察、被试物稳定性测试等的要求(见 9. 2) ;

　　i) 删除了数据处理中的寇氏法 、直线内插法 、概率单位图解法的规定 ,更改了数据处理方法(见10. 1、10. 2、10. 3,2014年版的 4. 3. 1、4. 3. 2、4. 3. 3、4. 3. 4) 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由中华人民共和国农业农村部提出 。

　　本文件由全国农药标准化技术委员会(SAC/TC133)归 口 。

　　本文件起草单位 :农业农村部农药检定所 。

　　本文件主要起草人 :周欣欣 、陈朗 、袁善奎 、周艳明 、吴长兴 、郭铁映 、吴声敢 、赵榆 、钱忠海 、刘洪斌 、吴迪 。

　　本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 :

　　— 2014年首次发布为 GB/T 31270. 9—2014;

　　— 本次为第一次修订 ,代替 GB/T 31270. 9—2014中的鸟类短期饲喂毒性试验部分 。

　　Ⅱ

　　GB/T 31270.9—2025

　　引 言

　　为减少农药使用对生态环境的影响 、提供符合农药环境风险评估要求的数据 ,需开展环境安全评价试验明确 农 药 在 环 境 中 的 代 谢 、降 解 、吸 附 、淋 溶 、生 物 富 集 等 特 性 及 对 非 靶 标 生 物 的 毒 性 。 GB/T 31270《化学农药环境安全评价试验准则》是指导我国农药环境安全评价试验的试验方法标准 , 旨在规范农药环境安全评价试验工作 , 提高农药环境安全评价试验的科学性和可比性 , 拟由 23个 部 分构成 。

　　— 第 1部分 :土壤代谢试验 。 目的在于明确农药在土壤中的代谢途径和代谢速率 。

　　— 第 2部分 :水解试验 。 目的在于明确农药水解途径和水解速率 。

　　— 第 3部分 :光解试验 。 目的在于明确农药光解途径和光解速率 。

　　— 第 4部分 :土壤吸附/解吸试验 。 目的在于明确农药的土壤吸附特性 。

　　— 第 5部分 :土壤淋溶试验 。 目的在于明确农药的淋溶性 。

　　— 第 6部分 :挥发性试验 。 目的在于明确农药的挥发性 。

　　— 第 7部分 :生物富集试验 。 目的在于明确农药在鱼体内的生物富集性 。

　　— 第 8部分 :水-沉积物系统代谢试验 。 目 的在于明确农药在水-沉积物系统中的代谢途径和代谢速率 。

　　— 第 9部分 :鸟类短期饲喂毒性试验 。 目的在于明确农药对鸟类的短期饲喂毒性 。

　　— 第 10部分 :蜜蜂急性毒性试验 。 目的在于明确农药对蜜蜂的急性毒性 。

　　— 第 11部分 :家蚕急性毒性试验 。 目的在于明确农药对家蚕的急性毒性 。

　　— 第 12部分 :鱼类急性毒性试验 。 目的在于明确农药对鱼类的急性毒性 。

　　— 第 13部分 :溞类急性活动抑制试验 。 目的在于明确农药对溞类的急性毒性 。

　　— 第 14部分 :藻类生长抑制试验 。 目的在于明确农药对藻类的毒性 。

　　— 第 15部分 :蚯蚓急性毒性试验 。 目的在于明确农药对蚯蚓的急性毒性 。

　　— 第 16部分 :土壤微生物毒性试验 。 目的在于明确农药对土壤微生物的毒性 。

　　— 第 17部分 :天敌赤眼蜂急性毒性试验 。 目的在于明确农药对赤眼蜂的毒性 。

　　— 第 18部分 :天敌两栖类急性毒性试验 。 目的在于明确农药对两栖类的急性毒性 。

　　— 第 19部分 :非靶标植物影响试验 。 目的在于明确农药对非靶标植物的毒性 。

　　— 第 20部分 :家畜短期饲喂毒性试验 。 目的在于明确农药对家畜的饲喂毒性 。

　　— 第 21部分 :大型甲壳类生物毒性试验 。 目的在于明确农药对大型甲壳类生物的毒性 。

　　— 第 22部分 :土壤表面光解试验 。 目的在于明确农药在土壤表面的光解途径和光解速率 。

　　— 第 23部分 :鸟类急性经口毒性试验 。 目的在于明确农药对鸟类的急性经口毒性 。

　　Ⅲ

　　GB/T 31270.9—2025

　　化学农药环境安全评价试验准则

　　第 9 部分:鸟类短期饲喂毒性试验

　　警示— 使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验 。本文件并未指出所有可能的安全问题 。使用者有责任采取适当的安全和健康措施 ,并保证符合国家有关法规规定的条件。

　　1 范围

　　本文件描述了化学农药环境安全评价的鸟类短期饲喂毒性试验方法 。

　　本文件适用于为化学农药登记而进行的鸟类短期饲喂毒性试验 。

　　本文件不适用于易挥发的农药 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　NY/T 4195. 2 农药登记环境影响试验生物试材培养 第 2部分 : 日本鹌鹑

　　3 术语和定义

　　本文件没有需要界定的术语和定义 。

　　4 原理

　　在 5 d暴露期内 ,用含有不同浓度被试物的染毒饲料饲喂供试生物 ,从第 6 d开始换喂不含被试物的空白饲料 ,至少饲喂 3 d,试验期间每天记录供试生物的死亡数和中毒症状 ,并求出 LC50 和 LD50及其95%置信区间 。

　　5 试验条件

　　5. 1 试验期间保持每天 12 h~ 16h光照 。

　　5.2 每只供试生物的最小栖息面积应满足附录 A 中表 A. 1 的要求 ,原鸽应单笼饲养 ,绿头鸭 、鹌鹑和山齿鹑以每笼 5 只 ~ 10只为宜 。

　　5.3 试验期间温湿度应满足表 A. 1 的要求 ,不同鸟龄试验期间的温度变化应有缓冲时间 。

　　5.4 保持良好通风条件 ,空气每小时至少交换 10次 。

　　5.5 应提供充足的饲料和水 ,并及时更换 。可使用商品饲料和维生素 ,但应符合受试物种的营养需求 。饲料和水应定期测定重金属(如砷 、镉 、铅 、汞 、硒等)和持久性农药(如有机氯农药等)等污染物含量 。

　　5.6 保持良好环境条件 ,避免任何可能干扰鸟类的操作 。

　　1

　　GB/T 31270.9—2025

　　6 试剂和材料

　　6. 1 试剂

　　水 、玉米油 、丙二醇等载体 。

　　6.2 供试生物

　　根据试验目的 ,选择至少 1种供试生物 。可选择鹌鹑(Coturnixjaponica,曾用名 : 日本鹌鹑) 、山齿鹑(Colinusvirginianus) 、绿头鸭(Anasplatyrhynchos) 或 原 鸽(Columba livia) 。 供 试 生 物 应 通 过 检疫 ,健康状况良好且无明显畸形 ,生长状态符合该物种生长规律 。供试生物应来自同一母本种群 ,且 日龄相同 。鹌鹑 、山齿鹑 、绿头鸭 日龄应为 10 d~ 17 d,原鸽 日龄应为 56 d~ 70 d。供试生物试验前应在试验条件下至少驯养 7 d适应试验设施及基础饮食 ,用于试验之前 3 d 内死亡率应 <5% 。 驯养前鹌鹑的饲养应符合 NY/T 4195. 2 的要求 。

　　7 仪器设备

　　7. 1 鸟笼 ,底部应为网状结构 , 网眼大小应能使粪便落下且不影响鸟类活动 。

　　7.2 电子天平(感量 0. 000 1 g及以上) 。

　　7.3 电子秤(感量 0. 1 g及以上) 。

　　7.4 移液器 。

　　7.5 温湿度等温湿度监控设备 。

　　7.6 离心机和旋转蒸发仪等前处理设备 。

　　7.7 气相色谱仪 、高效液相色谱仪 、质谱仪 、气相色谱-质谱联用仪 、高效液相色谱-质谱联用仪等 。

　　8 被试物

　　被试物为农药原(母)药 ,试验开始前 ,宜了解被试物在水中和有机溶剂中的溶解度 、在水中的稳定性和光解稳定性 、饱和蒸气压 、正辛醇-水分配系数 、对其他鸟类或哺乳动物的毒性 、饲料中被试物浓度的检测方法 、在水和饲料中的稳定性等 。

　　9 试验步骤

　　9. 1 预试验

　　按正式试验的条件 , 以少量供试生物 、较大的间距设置处理组 ,确定正式试验的浓度范围 。

　　9.2 正式试验

　　9.2. 1 试验设计

　　根据预试验结果或已知毒性数据 ,按一定间距至少设置 5个处理组(几何级差 ≤2) ,并设空白对照 ,使用溶剂助溶的还需增设溶剂对照 。处理组和对照组均不设重复 ,每组 10只鸟 , 随机分配 ,雌雄各半 。

　　9.2.2 染毒饲料制备

　　9.2.2. 1 配制

　　试验开始前 ,配制染毒饲料 ,配制方法如下 。

　　2

　　GB/T 31270.9—2025

　　a) 染毒饲料的制备宜在不使用载体的情况下 ,将适量被试物与饲料混合均匀 。

　　b) 确需使用载体时 ,应选择对鸟无毒或低毒的载体(优先使用蒸馏水 ,也可使用食用级玉米油 、丙二醇) ,且不应引起吐食 。将被试物溶解或分散在载体中 ,然后与饲料混合均匀 。

　　c) 必要时 ,可将被试物溶解在试剂级挥发性有机溶剂(如丙酮)中 ,先与少量粉末状饲料或石英砂[孔径 ≥200 目 (≤75 μm)]混匀 ,待有机溶剂完全挥发后再与粉末状饲料混合均匀 。

　　d) 使用载体时 ,其用量不应超过饲料质量的 2% ,且对照组载体用量应与处理组一致 。

　　9.2.2.2 储存

　　染毒饲料宜每次更换饲料前配制 , 以保证染毒饲料中被试物稳定性和均一性 。如需配制后储存 ,应将染毒饲料放置在密封袋中 ,并置于阴凉干燥 、通风良好的室内 ,且每次使用前 ,应检测最高浓度组和最低浓度组中被试物的浓度是否符合要求 。对易挥发或不稳定的被试物 ,应随时配制供试食物以保证食物中被试物的浓度不低于设定含量的 80% 。

　　9.2.3 给药与观察

　　9.2.3. 1 供试生物随机分配至各处理组和对照组 。用含有被试物的染毒饲料饲喂处理组供试生物 5 d,第 6 d起换喂空白饲料 。对照组试验期间饲喂不含被试物的未染毒饲料 ,使用助溶剂助溶的 ,还应饲喂仅添加助溶剂的饲料 。

　　9.2.3.2 观察并记录供试生物的死亡数和中毒症状 ,观察指标及其频率如下 :

　　a) 死亡情况 、中毒症状及异常行为 ,给药后第 1 d观察 2 次 ,此后每天 1 次 ;

　　b) 体重 ,第 0 d、第 5 d、第 8 d 以及试验结束时(如果延长试验时间)各测定 1 次 ;

　　c) 每次添加饲料时 ,记录饲料添加量和前次剩余饲料量 ,试验结束时记录饲料剩余量 ,对于饲喂过程中显著的洒溢饲料量也需要记录 ,并计算给药后 0 d~ 5 d每 日饲料消耗量以及 5 d~ 8 d之间的饲料消耗量 ;

　　d) 若延长观察时间 ,最后 1 次体重和饲料消耗量应在试验结束时测定 。

　　9.2.3.3 试验周期至少 8 d,如第 7 d或第 8 d 出现死亡 ,或第 8 d仍存在中毒症状 ,应延长观察时间至连续 2 d不出现死亡且无中毒症状 ,最长延长至 21 d。

　　9.2.3.4 所有死亡供试生物应进行大体解剖 ,试验结束时对存活的供试生物实施安乐死后进行大体解剖以鉴别偶然死亡和中毒症状 。所有处理组和对照组均未出现死亡和明显中毒症状时可不解剖 。

　　9.2.3.5 试验期间 ,供试生物有明显疼痛或处于濒死状态时 ,经评估继续观察不能得出对试验有用信息的 ,可实施安乐死并将其计入死亡数 。

　　9.2.4 被试物稳定性测试

　　9.2.4. 1 试验开始后 ,应监测被试物浓度 , 以确认其在试验体系中的稳定性 ,食物中的被试物浓度应维持在设定浓度的 ±20%范围内 。试验开始 ,应测定最高和最低浓度组 0 h 及饲喂后 4 h 内饲料中被试物浓度 ,之后定期检测 ,至被试物在饲料中的稳定性可以明确为止 。若按照某个频率更换饲料 ,被试物浓度可维持在设定浓度的 ±20%范围内 ,则后续试验可按照该频率更换 ,无需再进行浓度测定 。

　　9.2.4.2 也可在试验前根据被试物稳定性 ,确定染毒饲料制备/更换频率 。若测定结果表明 ,饲料中被试物的浓度不在设计浓度的 ±20%范围内 ,应调整测试被试物浓度时间间隔 , 以确定更换饲料的频率 ,保证试验期间被试物的浓度满足试验要求 。

　　9.3 限度试验

　　限度试验浓度为 5000mg/kg饲料(以农药有效成分计) ,按正式试验的条件开展试验 ,如处理组供试生物未出现死亡 ,无需进行正式试验 。

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　　GB/T 31270.9—2025

　　9.4 安乐死

　　试验结束后 ,对存活的供试生物 ,可采用戊巴比妥钠注射法 、乙醚麻醉法和二氧化碳麻醉法等进行安乐死处理 。处理后的供试生物按照生物医学试验垃圾进行处置 。

　　10 试验数据处理

　　10. 1 计算各处理组和对照组在第 0 天 、第 5 天 、第 8 天以及试验结束时(如果延长试验时间)的平均体重以及这些天的体重增长量 ,并采用合理的统计方法比较处理组和对照组体重增长量间的差异 。

　　10.2 计算各处理组和对照组在第 0 天 、第 5 天 、第 8 天以及试验结束时(如果延长试验时间)的平均饲料消耗量 、试验期间总饲料消耗量 ,并采用合理的统计方法比较处理组和对照组总饲料消耗量的差异 。

　　10.3 采用概率单位法等适宜的统计方法计算 LC50、LD50及其 95%置信区间 。 当相邻 2 个处理组供试生物死亡 率 分 别 为 0%和 100%时 , 以 其 几 何 平 均 值 作 为 LC50 和 LD50 。 计 算 LD50 时 , 使 用 第 0 天 、第 5 天 、第 8 天以及试验结束时(如果延长试验时间)的平均体重和饲料消耗量将试验浓度换算为试验剂量 。 当出现耗食量减少 、高浓度出现死亡等情形导致不能获得各处理组的试验剂量并估算 LD50 时 ,可采用 LC50 附近处理组的耗食量和体重数据将 LC50换算为 LD50 。

　　11 质量控制

　　11. 1 给药期间染毒饲料浓度偏差应保持在设定浓度的 ±20%范围内 。

　　11.2 试验结束时 ,对照组死亡率 ≤10% 。

　　12 试验报告

　　试验报告至少应包括下列内容 :

　　a) 被试物的信息 ,包括 被 试 农 药 的 通 用 名 称 、化 学 名 称 、结 构 式 、化 学 文 摘 登 记 号(CAS号) 、纯度 、基本理化性质 、来源等 ;

　　b) 供试生物学名及品系 、种类 、来源 、试验开始时的鸟龄(以 d计)及驯养情况 ;

　　c) 试验条件 ,包括 :试验温湿度 、光照条件 、鸟笼的类型大小材质等 ;

　　d) 饲料 ,包括饲料的来源 、组成和营养成分(蛋白质 、糖类 、脂肪 、钙 、磷 、维生素等) 、使用的添加剂和载体 、染毒饲料的制备方法 、饲料更换频次等 ;

　　e) 试验设计 ,包括被试物的设计浓度和实测浓度 、分析测试方法 ;供试生物驯养和随机分组方法 、空白组及每个处理组供试生物的数量 ;试验期间观察频率 、时间及方法等 ;

　　f) 试验结果 ,包括试验开始时 、给药后 5 d、试验结束时供试生物的体重 ;各处理组和对照组供试生物的死亡数及异常反应 ;饲料添加量和前次剩余饲料量 、试验结束时记录饲料剩余量 ;计算1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、8 d 以及试验结束时(如果延长试验时间)的 LC50 和 LD50及其 95%置信区间 ,并给出所采用的计算方法 ;大体解剖检查结果 ;

　　g) 饲料和饮用水的污染物测定结果 ;

　　h) 试验过程中发生的可能影响结果的事件 ,偏离试验准则的情况 、后果及相关解释与评价等 。

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　　附 录 A

　　(规范性)

　　鸟类推荐物种及推荐测试条件

　　鸟类推荐物种及测试条件应满足表 A. 1 的要求 。

　　表 A. 1 鸟类推荐物种及推荐测试条件

　　物种

　　鸟龄/d

　　推荐测试条件

　　温度/℃

　　相对湿度/%

　　鸟龄/d

　　栖息面积/(cm2 /只)

　　绿头鸭

　　(Anasplatyrhynchos)

　　0~ 7

　　32~ 35

　　60~ 85

　　10~ 17

　　≥600

　　8~ 14

　　28~ 32

　　>14

　　22~ 28

　　山齿鹑

　　(Colinusvirginianus)

　　0~ 7

　　35~ 38

　　50~ 75

　　10~ 17

　　≥300

　　8~ 14

　　30~ 32

　　>14

　　25~ 28

　　原鸽(Columba livia)

　　>35

　　18~ 22

　　50~ 75

　　56~ 70

　　≥2 500

　　鹌鹑

　　(Coturnix japonica)

　　0~ 7

　　35~ 38

　　50~ 75

　　10~ 17

　　≥300

　　8~ 14

　　30~ 32

　　>14

　　25~ 28

　　5

　　GB/T 31270.9—2025

　　参 考 文 献

　　[1] EPA Ecologicaleffects testguidelines OCSPP 850. 2200:Avian DietaryToxicityTest(2012)

　　[2] OECD Guideline for testing of chemicals No. 205Avian dietary toxicity test(1984)

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