GB/T 16294-2025 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法

　　ICS 13. 040.30 CCS C 30

　　中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准

　　GB/T 16294—2025代替 GB/T 16294—2010

　　医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法

　　Testmethod forsettling microbein clean room(zone) ofthepharmaceuticalindusty

　　2025-10-05发布 2026-11-01实施

　　国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

　　

　　发

　　

　　布

　　GB/T 16294—2025

　　目 次

　　前言 Ⅲ

　　1 范围 1

　　2 规范性引用文件 1

　　3 术语和定义 1

　　4 人员要求 1

　　5 主要仪器设备 1

　　6 培养基 1

　　7 测试条件 2

　　8 测试方法 2

　　8. 1 确定采样点 2

　　8. 2 采样步骤 3

　　8. 3 培养计数 3

　　9 试验报告 3

　　参考文献 4

　　Ⅰ

　　GB/T 16294—2025

　　前 言

　　本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则 第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草 。

　　本文件代替 GB/T 16294—2010《医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》,与 GB/T 16294—2010相比 ,除结构调整和编辑性改动外 ,主要技术变化如下 :

　　— 更改了术语和定义(见第 3 章 ,2010年版的第 3 章) ;

　　— 增加了培养基的要求(见第 6章) ;

　　— 更改了采样点的要求(见 8. 1,2010年版的 5. 4. 1、附录 A) ;

　　— 删除了 “最少培养皿数 ”的要求(见 2010年版的 5. 4. 2) ;

　　— 更改了培养皿暴露时间的要求(见 8. 2. 2、8. 2. 3,2010年版的 4. 4. 3) ;

　　— 更改了培养条件(见 8. 3. 2,2010年版的 4. 4. 5) ;

　　— 删除了“结果计算 ”(见 2010年版的 5. 6) ;

　　— 删除了“结果评定 ”(见 2010年版的 5. 7) ;

　　— 删除了“日常监控 ”(见 2010年版的 5. 8) ;

　　— 删除了 “洁净室(区)采样点布置 ”(见 2010年版的附录 A) ;

　　— 删除了 “培养基的灭菌及准备 ”(见 2010年版的附录 B) 。

　　请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。

　　本文件由国家药品监督管理局提出 。

　　本文件由全国医用输液器具标准化技术委员会(SAC/TC106)归 口 。

　　本文件起草单位 : 山东省医疗器械和药品包装检验研究院 、辽宁省药品检验检测院 、上海市食品药品包装材料测试所 、北京市医疗器械检验研究院(北京市医用生物防护装备检验研究中心) 、中国食品药品检定研究院 、湖北省医疗器械质量监督检验研究院 、浙江省食品药品检验研究院 。

　　本文件主要起草人 :王文庆 、张萌萌 、马恒 、张亚杰 、忻运 、王霖 、田霖 、王烨婷 、吴鑫 、张静 、李文丽 。

　　本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 :

　　— 1996年首次发布为 GB/T 16294—1996,2010年第一次修订 ;

　　— 本次为第二次修订 。

　　Ⅲ

　　GB/T 16294—2025

　　医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法

　　1 范围

　　本文件描述了医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法 。

　　本文件适用于医药工业洁净室(区)洁净厂房 、洁净实验室等的沉降菌测试 。

　　2 规范性引用文件

　　下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 , 注 日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件 。

　　中华人民共和国药典 2025年版 四部

　　3 术语和定义

　　下列术语和定义适用于本文件 。

　　3. 1

　　沉降菌 settling microbe

　　通过被动式采样法收集到的悬浮在空气中的活微生物 。

　　3.2

　　静态 at-rest

　　洁净室或洁净区建成且设备就位 ,按议定的方式运行 ,但无人员在场的状态 。

　　[来源 :GB/T 25915. 1—2021,3. 3. 2] 3.3

　　动态 operational

　　洁净室或洁净区设施按议定方式运行 ,且有规定数量的人员按议定方式工作的状态 。

　　[来源 :GB/T 25915. 1—2021,3. 3. 3]

　　4 人员要求

　　洁净室(区)的测试人员应接受卫生和微生物学基础知识等相关专业知识的培训 ,应使测试活动对洁净室(区)的干预降至最低 。

　　5 主要仪器设备

　　培养箱 、压力蒸汽灭菌器等 ,应定期进行校准 。

　　6 培养基

　　一般选择胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA) ,必要时可加入适宜的中和剂 。 当监测结果有疑似真菌或

　　1

　　GB/T 16294—2025

　　考虑季节因素影响时 ,可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA) 。应符合《中华人民共和国药典 2025年版 四部》9203相关要求 。

　　7 测试条件

　　洁净室(区)确认时 ,应在静态和动态两种占用状态进行测试 。洁净室(区)常规监测时 ,应在动态条件下测试 。

　　对单向流洁净室(区)进行静态测试时 ,宜在净化空调系统正常运行时间不少于 10 min后开始 ,对非单向流洁净室(区)进行静态测试时 ,宜在净化空调系统正常运行时间不少于 30 min后开始 。

　　8 测试方法

　　8. 1 确定采样点

　　在进行洁净室(区)确认及监测时 ,应基于风险评估确定采样点数目及位置(含水平及垂直位置) 。宜选择合适的风险管理工具 ,如故障模式效应分析(FMEA) 、危害分析关键控制点(HACCP)等 。

　　在通过风险评估确定采样点时 ,应同时满足表 1最少采样点数目的要求 。

　　表 1 洁净室(区)沉降菌最少采样点数目

　　洁净室(区)面积

　　m2

　　最少采样点数目

　　NL

　　≤8

　　4

　　>8~ 28

　　5

　　>28~ 52

　　6

　　>52~ 68

　　7

　　>68~ 104

　　8

　　>104~ 148

　　9

　　>148~ 232

　　10

　　>232~ 436

　　11

　　>436~ 1 000

　　12

　　>1 000

　　按公式(1)

　　NL ( 1 )

　　式中 :

　　NL — 最少样点数目 ,带小数时向上进位取整数 ;

　　A — 待测洁净室(区)的面积 ,单位为平方米(m2 ) 。

　　注 : 洁净室(区)面积在 1 000 m2 以上时 ,最少采样点数目是在 GB/T 16293—2025 中浮游菌最少采样点数 目 的基础上增加 3个采样点确定的 , 以增加空间覆盖 ,使数据更具代表性 。

　　2

　　GB/T 16294—2025

　　8.2 采样步骤

　　8.2. 1 按设定的采样点放置采样培养皿 。打开培养皿盖 ,使培养基表面暴露在空气中 。采样培养皿尽量避开回风 口 。

　　8.2.2 对动态洁净室(区)进行测试时 ,ISO 5 级 、A 级 、B 级以及 100级洁净室(区) 宜在整个操作期间采样 ,其他洁净级别应基于风险评估确定采样时间 。对静态洁净室(区)进行测试时 ,采样时间宜与动态测试时采样时间一致 。

　　8.2.3 采用经确定的单个培养皿的暴露时间进行暴露采样 。必要时 ,可使用多个培养皿连续暴露采样以达到规定的采样时间 。

　　注 : 采样培养皿的暴露时间是沉降菌测试方法的重要参数 。相较于浮游菌和表面微生物测试 ,用于沉降菌测试的采样培养皿需要较长的暴露时间 。放置 在 高 气 流 、湍 流 、高 温 或 低 湿 条 件 下 的 采 样 培 养 皿 可 能 会 变 干 或 以 其他方式改变其特性 ,如溶解气体、pH 变化或培养基某些成分变质等 ,从而使先前沉降或新捕获的微生物死亡 。必要时对采样培养皿在特定使用条件下的暴露时间进行研究 , 以证明暴露操作不对所用培养基的促生长能力产生任何负面影响 。暴露时间一般不大于 4 h。

　　8.2.4 取同批次制备的培养皿作为阴性对照 , 与采样培养皿同法操作但不进行暴露采样 , 培养后阴性对照培养皿应无菌生长 ,否则测试无效 。

　　8.3 培养计数

　　8.3. 1 采样结束后 ,将培养皿倒置于培养箱中进行培养 。

　　8.3.2 对于环境微生物种群不确定的情况 ,可在 20 ℃ ~25 ℃培养 3 d~ 5 d后再转移至 30 ℃ ~ 35 ℃培养 2 d~ 3 d,或先在 30 ℃ ~ 35 ℃培养 2 d~ 3 d后再转移至 20 ℃ ~ 25 ℃培养 3 d~ 5 d。 当采用沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)时 ,培养温度为 20 ℃ ~ 25 ℃ ,时间为 5 d~ 7 d。宜根据环境污染微生物历史数据及种群特性调整培养方案 。

　　8.3.3 用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数标记或在菌落计数器上点计 。若培养皿上有 2个或 2个以上的菌落重叠 ,可分辨时仍以 2个或 2个以上菌落计数 。

　　9 试验报告

　　如适用 ,测试报告应至少包含以下内容 :

　　a) 测试洁净室(区)名称 、地址 ;

　　b) 测试洁净室(区)占用状态 ;

　　c) 测试洁净室(区)环境条件 ;

　　d) 测试洁净室(区)人数 ;

　　e) 测试人数 ;

　　f) 测试时间 ;

　　g) 测试依据 ;

　　h) 采样点数目及布置图 ;

　　i) 培养基种类 、培养条件 、培养时间 ;

　　j) 每个采样点沉降菌数 。

　　3

　　GB/T 16294—2025

　　参 考 文 献

　　[1] GB/T 25915. 1—2021 洁 净 室 及 相 关 受 控 环 境 第 1 部 分 : 按 粒 子 浓 度 划 分 空 气 洁 净 度等级

　　[2] GB/T 16293—2025 医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法

　　4