T/HTCMA 085-2022 河南道地药材 菊花组织培养育苗技术规程

河南省中药材协会发布
团体标准
T/HTCMA 085－2022
河南道地药材菊花组织培养育苗技术规程
Henan dao-di herbs-Technical Specification for tissue culture of chrysanthemum
seedling.
目 次
前言......................................................................................I
菊花组织培养育苗技术规程....................................................................1
1 范围......................................................................................1
2 规范性引用文件............................................................................1
3 术语与定义................................................................................1
4 设施设备..................................................................................2
5 组织培养..................................................................................2
6 温室驯化..................................................................................3
I
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》、国家标
准化管理委员会、民政部的《团体标准管理规定》、河南省中药材协会的《团体标准管理办法（试行）》
及其它团体标准管理的规定起草。
本文件的全部技术内容为推荐性。
本文件由河南省农业科学院中药材研究所提出。
本文件由河南省中药材协会、河南省农学会中药材专业委员会归口。
本文件由河南省农业科学院中药材研究所起草。
本文件起草人员：梁慧珍、苏小雨、孙瑶、许兰杰、谭政委、杨青、余永亮、李春明、杨红旗、李
磊、安素妨、鲁丹丹、董薇。
本文件知识产权属于河南省农业科学院中药材研究所，负责解释并组织实施。
1
菊花组织培养育苗技术规程
1 范围
本标准规定了菊花组织培养育苗的术语和定义、设施设备、组织培养和温室驯化。
本标准适用于组织培养育苗的术语和定义、设施设备、组织培养和温室驯化。
2 规范性引用文件
下列文件所包含的条款，通过在本标准中引用而构成为本标准的条款。凡不注日期的引用文件，其
最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
LY/T 1882—2010 林木组织培养育苗技术规程
3 术语与定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 道地药材
道地药材是优质药材的专用名词，是指历史悠久、品种优良、产量较大、加工炮制规范、疗效突出，
带有明显地域特点的中药材。
3.2 菊花
菊花（Chrysanthemum morifolium Ramat）为菊科、菊属的多年生宿根草本植物。
3.3 组织培养
在无菌条件下，将离体的菊花幼嫩茎段、茎尖和腋芽在人工培养基和人工控制的环境中，使其再生
新植株的过程和技术。
3.4 初代培养
在组织培养过程中,最初建立的外植体无菌培养阶段。
3.5 继代培养
将初代培养获得的茎段或愈伤组织，通过分离切割接种在新的培养基中，从而获得大量无菌幼苗的
培养阶段。
2
4 设施设备
4.1 组织培养设施设备
4.1.1 基本要求
组织培养室包括洗涤室、灭菌室、培养基配制室、缓冲室、无菌接种室和无菌培养室等。
4.1.2 洗涤室设备
配备自动或半自动洗瓶机、水槽、收纳箱、量瓶架等。
4.1.3 灭菌室设备
配备高压蒸汽灭菌锅、器械消毒器、紫外线灯、烘干箱、微孔过滤器等。
4.1.4 培养基配制室设备
配备万分之一电子天平、酸度计、微波炉、冰箱等。
4.1.5 缓冲室设备
配备衣帽柜、风淋装置等。
4.1.6 无菌接种室设备
配备超净工作台、器械消毒器、酒精灯等。
4.1.7 无菌培养室设备
配备培养架、紫外灯、臭氧发生器、空气加湿器、除湿机、时控装置等。
4.2 温室驯化设施设备
配备温湿度调节装置、光照控制装置、灌溉设备、栽培床、穴盘等。
5 组织培养
5.1 外植体取材与灭菌
5.1.1 外植体取材
选取生长健壮、无病虫害的菊花当年生幼嫩茎段、茎尖和腋芽，截取长度为0.5 cm～3 cm的芽段。
5.1.2 外植体处理
将截取的芽段置于1%中性洗涤剂中浸泡10 min，再用自来水冲洗20 min。
3
5.1.3 外植体灭菌
在超净工作台内，将处理过的芽段置于无菌培养瓶中加入70%~75%的酒精中浸润30 s，转入2%次氯酸钠
溶液中消毒8～15 min，并不时摇动，最后于无菌水中漂洗3～5次，以获得无菌的外植体用于接种。
5.2 培养基成分
芽段初代培养与继代培养所需培养基成分见附录A，培养基pH 5.8。
5.3 外植体的接种
将经过灭菌的芽段置于超净工作台内，无菌接种。
5.4 培初代培养
外植体接种于300 mL～650 mL培养瓶中， 每瓶分装培养基高度1.0 cm～1.5 cm，每10 mL培养基接
种1个芽段。置于无菌培养室中培养10 d～20 d。
培养室设置光照强度1000 lx～4000 lx，光照时间16 h/d，湿度60%，温度25 ℃±1 ℃。
5.5 继代培养
将初代培养获得的不定芽分割成1 cm3 不定芽块，按5.4的方法接种培养，扩繁获得大量不定芽块。
5.6 生根培养
从继代培养获得的不定芽块中分离高度≥3 cm的健壮不定芽， 按5.4的方法接种培养，其中光照强
度设置为2000 lx，获得根芽齐全的菊花无菌幼苗。
6 温室驯化
6.1 幼苗锻炼
将根芽齐全的无菌幼苗带瓶转移至温室中，日光锻炼5 d～7 d，然后开瓶锻炼3 d～5 d，注意及时加
水保湿。将空气湿度保持在75%～85%之间，遮光率为40%，环境温度控制在22～26℃。
6.2 穴盘育苗
将锻炼好的幼苗从培养瓶中取出，用自来水冲洗根部15 min，洗净根系附着的培养基，置于适宜浓
度的农用杀菌剂中，浸泡处理，然后定植于珍珠岩加营养基质（配比为1:1）的穴盘中，喷水保湿。
4
附录A
（资料性）
培养基成分
菊花组织培养培养基成分见表A.1。
表A.1 菊花组织培养培养基成分表
培养基成分
初代培养基
mg/L
继代培养基
mg/L
生根培养基
mg/L
无机成分
硝酸铵NH4NO3 1650 1650 825
硝酸钾KNO3 1900 1900 950
磷酸二氢钾KH2PO4 170 170 85
七水硫酸镁MgSO4•7H2O 370 370 185
二水氯化钙CaCl2•2H2O 440 440 220
四水硫酸锰MnSO4•4H2O 22.3 22.3 22.3
硼酸H3BO3 6.2 6.2 6.2
七水硫酸锌ZnSO4•7H2O 8.6 8.6 8.6
碘化钾KI 0.83 0.83 0.83
二水钼酸钠Na2MoO4•2H2O 0.25 0.25 0.25
五水硫酸铜CuSO4•5H2O 0.025 0.025 0.025
六水氯化钴CoCl2•6H2O 0.025 0.025 0.025
乙二胺四乙酸二钠
Na2EDTA•2H2O 37.3 37.3 37.3
七水硫酸亚铁FeSO4•7H2O 27.8 27.8 27.8
维生素
肌醇Myo-inositol 100 100 100
盐酸硫胺素Thiamine HCl 0.1 0.1 0.1
盐酸吡哆醇Pyridoxine HCl 0.5 0.5 0.5
烟酸Nicotinic Acid 0.5 0.5 0.5
氨基酸甘氨酸Glycine 2 2 2
植物生长调节物质
萘乙酸NAA 0.1 0.1 0.1
六苄基腺嘌呤6-BA 1.0 1.5 0
附加物
活性炭Active Carbon 3000 0 0
蔗糖Sucrose 30000 30000 30000
琼脂Agar 4000 4000 4000